Молекулярно-генетические и биохимические методы диагностики наследственных заболеваний. Показания к их проведению.

Молекулярно-генетическая диагностика это метод обследования организма, позволяющий точно и быстро выявить мутации генов, вызывающих патологию, оценить риски наследственных и иных заболеваний.

• Используется для выявления вариаций в структуре исследуемого участка ДНК: аллель, ген, сегмент хромосомы

• Для диагностики мутаций, их ассоциации с наследственными заболеваниями

• Выявление гетерозиготных и гомозиготных носителей мутаций

Объект исследования: лейкоциты, амниотические клетки, фибробласты, хориональные клетки.

Этап 1. Получение образцов ДНК

Этап 2.Клонирование необходимых фрагментов ДНК.

Этап 3. Рестрикция ДНК на фрагменты с помощью рестриктаз

Этап 4,5. Элетрофорез фрагментов ДНК, визуализация и идентификация. Выявляемые заболевания: хорея Гентингтона, миопатия Дюшена, атаксия Фридрейха

Показания

1. множественные пороки развития

2. лица с выявленной патологией полового хроматина

3. олигофрения в сочетании с чертами внутриутробного дизгенеза или врожденными пороками развития

4. олигофрения в сочетании с выраженным физическим недоразвитием (низкорослость, гипогенитализм)

5. выраженная задержка физического развития в сочетании с дисэмбриональными стигмами

6. повторные спонтанные аборты в анамнезе

1. мертворожденные дети или дети с пороками развития (обследуются оба родителя)

8. сибсы больных (пробандов) и другие родственники детородного возраста в случае выявления структурной перестройки у пробанда или носительства хромосомной аномалии у его родителей

9. исследование плода при беременности с высоким риском рождения ребенка с хромосомной патологией,

10. нарушение репродуктивной функции неясного генеза (бесплодный брак, первичная аменорея)

11. лица с профессиональными вредностями для оценки мутагенных влияний (химических, радиационных, физических)

12. лейкозы

Биохимический метод - исследование биохимического фенотипа в диагностике наследственных болезней обмена веществ (энзимопатии).

Формула генетического каскада: ГЕН -> ФЕРМЕНТ -> БЕЛОК.

Т.е. мутация в гене нарушает синтез определённого фермента, а значит, не вырабатывается соответствующий белок

Объект исследования: любая ткань или секрет организма (моча, пот, кровь, слюна, ликвор, пунктат костного мозга, амниотическая жидкость, сперма, волосы, ногти, мышечные волокна, фибробласты, лимфоциты)

Этапы биохимической диагностики

1. Первичный этап (экспресс-диагностика) - выявить лиц, подозрительных на энзимопатии. Массовые просеивающие программы или биохимический скрининг: Фенилкетонурия (Проба Феллинга), Гипотиреоз, Муковисцидоз, Адрено- генитальный синдром

2. Уточняющий этап - дообследование отобранных лиц из группы риска - селективные программы.

   1. Простые методы (тест с хлоридом железа на ФКУ ( фенилкетонурию), тест с ДНФГ (динитрофенилгидразином) на кетокислоты)

   2. Сложные методы (хроматография тонкослойная, газовая, высокоэффективная жидкостная для определения

нарушений обмена аминокислот, при мукополисахаридозах, высоковольтный электрофорез гемоглобина при гемоглобинопатиях, флюорометрические методы для определения активности ферментов)

Показания:

1. судороги неясного генеза

2. кома неясного генеза

3. непереносимость отдельных пищевых продуктов и лекарственных препаратов, нарушение пищеварения, частая рвота, диарея, гепато- и спленомегалия

4. мышечная гипотония

5. желтуха, гемолитические анемии

6. гипо- и гиперпигментация, фоточувствительность

7. падение АД

8. плохое зрение или полная слепота, тугоухость или глухота

9. специфический запах мочи и пота

10. остановка роста у новорождённых или

11. задержка физического развития в раннем детстве, в том числе аномальный рост и строение волос или ногтей, неправильный рост искривлением костей туловища и конечностей, чрезмерное отложение жира и пр.

12. задержка психического развития в раннем детстве

13. нарушение кислотно-щелочного равновесия (ацидоз, алкалов)

14. у взрослых подозрение на болезнь Вильсона-Коновалова, недостаточность глюкозо-6-фофатдегидрогеназы, недост- ть альфа1-антитрипсина