59.Реакції лізису. Реакція зв'язування комплементу, її практичне використання.

Реакції лізису — це імунні реакції, під час яких клітини-мішені (бактерії або еритроцити) руйнуються під дією специфічних антитіл (лізинів) за обов'язкової участі комплементу. Головним прикладом є Реакція зв'язування комплементу (РЗК), яка виявляє наявність антитіл або антигенів за витрачанням комплементу в індикаторній системі.

Реакція лізису моносистемна, непряма, трикомпонентна. У зв'язку з нестійкістю комплементу в реакціях лізису використовують консервований комплемент, найчастіше сироватку крові морської свинки. 

Отже для реакції лізису необхідні антиген, антитіло й комплемент. Антигеном можуть бути мікроорганізми, еритроцити або інші клітини. Як антитіло (лізин) використовують специфічну сироватку або сироватку хворого. Залежно від того, проти яких клітин спрямована дія лізинів, вони мають свої назви: проти бактерій – бактеріолізини, спірохет – спірохетолізини, еритроцитів – гемолізини, проти інших клітин – цитолізини. Комплемент при утворенні комплексу клітина (антиген) – антитіло, звязується з ним, активується за класичним шляхом і викликає розчинення клітини. Без комплементу лізис клітини неможливий. 

Суть і етапи реакції зв'язування комплементу (РЗК)

РЗК є складною серологічною реакцією, яка залучає дві робочі пари (тестову та індикаторну) і сироватку з комплементом. Процес ділиться на два послідовні етапи: [1]

• Перший етап (основний): Досліджувану сироватку (змішують для інактивації власних антитіл) з'єднуюрють з відомим антигеном та додають певну кількість комплементу (суміш із сироватки морської свинки). Якщо антитіла відповідають антигену, утворюється комплекс, який «зв'язує» (абсорбує) на собі весь доданий комплемент.

• Другий етап (індикаторний): До суміші додають гемолітичну систему — еритроцити барана та протибаранячі антитіла (гемолізин). Якщо весь комплемент зв'язався на першому етапі, еритроцити залишаються цілими (позитивна реакція, лізису немає). Якщо ж антитіл у пацієнта не було, вільний комплемент руйнує індикаторні еритроцити — відбувається гемоліз (негативна реакція).

Практичне використання РЗК у медицині

РЗК використовують для діагностики інфекційних захворювань, коли інші простіші реакції (аглютинації чи преципітації) не дають результату:

• Бактеріальні інфекції: Діагностика сифілісу (класична реакція Вассермана — РВ), бруцельозу, туберкульозу.

• Вірусні та хламідійні інфекції: Виявлення антитіл до рикетсій, хламідій та деяких вірусів.

• Ідентифікація невідомого антигену: Визначення мікроорганізмів у патологічному матеріалі за допомогою відомих еталонних імунних сироваток.

60.Реакції з міченими антитілами або антигенами. Принципи та використання реакцій імунофлуоресценції (ріф), імуноферментного та радіоімунного аналізу.

Реакції з міченими компонентами базуються на зв'язуванні антитіл з антигенами, де один із компонентів позначений сигнальною міткою (флуорохромом, ферментом або радіоізотопом). Це забезпечує надзвичайно високу чутливість і специфічність для виявлення інфекцій, гормонів, маркерів пухлин та антитіл у біологічних рідинах.

а)Ріф - полісистемна,непряма, гетерологічна .У діагностиці застосовують пряму і непряму Ріф. Використовують антитіла,мічені флуоресцентним барвником - ізоціанатом флюороесцеїну. З'єднуючись з антигеном вони утв. комплекс,який при дії У-ф випромінювання дає яскраво-жовте світіння. Пряма Ріф: взаємодія між антигеном і специф. антитілами обробленими флюор. барвниками. Непряма Ріф:спочатку зв’язують антиген з неміченим антитілом,потім комплекс обробляють міченим анти-γ-глобуліном .Комплекс антиген-антитіло-антиглоб. легко виявляють у люмінесцентному мікроскопі.

б)Іфа- взаємодія антигену з антитілом ,хімічно зв’язаним з ферментом. Комплекс набуває ферментативної активності і розщеплює відповідний субстрат з появою забарвлення і люмінесцентним ефектом. Прямий Іфа- визначає наявність антигену, непрямий антитіл.(до комплексу антиген-антитіло проти якого-небудь антигену добавляють мічений ферментом антиглобулін проти 1-ої імунної сироватки і хромогенний субстрат). Ефект позитивної реакції: темно-коричневе забарвлення рез-таті з'єднання анти глоб. сироватки, що несе імунофермент. комплекс, з імуноглоб. досліджуваної сироватки. Простий і доступний метод для виявлення антитіл і антигенів при різних захворюваннях.

в)Ріа- використовують стандартні к-сті антисироватки проти дослідж. антигену і к-сть цього антигену, міченого радіонуклідом. Для мічення найчастіше використовують 2 нукліди:тритій 3Н і 125І йод. Радіоактивність заміряють лічильниками γ-проміння . Чим більша к-сть дослід. антигена, тим менше міченого антигену зв’язується з антитілами. Ріа найчутливіший імунологічний метод ,дозволяє виявляти слідові к-сті білка(нано-, пікограми).