Задача 3.

В приемное отделении больницы доставлен 2- летний мальчик с тяжелой гипогликемией. Лабораторное исследование крови выявило также увеличение концентрации молочной кислоты. Физическое исследование выявило гепатомегалию, биопсия печени - увеличение содержания гликогена в гепатоцитах. Диагноз? Каков механизм развития ведущих симптомов данного заболевания?

Кратко выпишите принцип метода и порядок проведения работ, выполняемых на занятии, оставляя места для расчета и вывода.

Самостоятельная работа студентов

Для количественного определения глюкозы в крови используются следующие методы:

1. Редуктометрические – они основаны на свойстве сахаров восстанавливать соли тяжёлых металлов в щелочной среде (титрометрический метод Хагедорна-Йенсена). Недостаток этих методов состоит в том, что они неспецифичны, так как присутствующие в крови рецидивирующие вещества, не являющиеся углеводами, также обладают восстанавливающими свойствами, и полученные результаты включают всю сумму восстанавливающих соединений в крови.

2. Колориметрические - основаны на определении степени интенсивности окраски соединений, образующихся при взаимодействии глюкозы с определенным веществом (ортотолуидиновый метод). Метод специфичен и точен.

3. Энзиматические методы основаны на действии фермента глюкозооксидазы, окисляющей глюкозу до глюконовой кислоты кислородом воздуха (глюкозооксидазный метод). Этот метод специфичен и широко применяется в клинико-диагностических лабораториях.

Работа 1. Количественное определение глюкозы в крови

Глюкозооксидазным методом.

Принцип метода. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, при разрушении которой под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:

глюкозооксидаза

Глюкоза + О₂ + Н₂О  глюконат + Н₂О₂

пероксидаза

2Н₂О₂ + фенол + 4-аминоантипирин  4(n-бензохинонмоно-имино)- феназон + 4Н₂О

(n-аминофеназон) (цветной хиноимин)

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Ход определения. Определение проводят по схеме табл. 25.

Таблица 25

Отмерить, мл	Опыт	Стандарт	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,02	-	-
Стандартный раствор глюкозы	-	0,02	-
Дистиллированная вода	-	-	0,02
Реактив для определения глюкозы	3,0	3,0	3,0

Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. при 37^оС. Измеряют оптическую плотность опытной (Е₁) и стандартной пробы (Е₂) против контрольной пробы при длине волны 480-520 нм в кювете 0,5 см.

Расчёт произвести по формуле: С глюкозы (моль/л)= Е₁/Е₂×10. В норме содержание глюкозы в крови составляет 3,33-5,55 мМоль или 0,6-1,0 г/л. Гипергликемия наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), а также при клинически выраженной форме сахарного диабета. Гипогликемия наблюдается после инъекций инсулина и при некоторых формах гликогенозов.