Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
praktikum-po-bx-versiya-3.doc
Скачиваний:
6
Добавлен:
07.05.2019
Размер:
5.91 Mб
Скачать

Работа 4. Определение содержания мочевины в сыворотке крови ферментативным методом.

Принцип метода. Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и двуокиси углерода. Аммиак реагирует с производными фенола и щелочным раствором гипохлорита с образованием цветного соединения, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины в анализируемой пробе.

Реактивы. Рабочий раствор - уреаза, нитропруссид натрия+буферно-субстратный раствор рН 6,5. Реактив 3 - раствор гипохлорита натрия и гидроокиси натрия. Ход определения.

Таблица 36

Опытная проба

Холостая проба

Сыворотка крови, мл

0,02

-

Рабочий раствор, мл

2,0

2,0

Перемешать и инкубировать 10 мин при 370 С

Реактив 3, мл

2,0

2,0

Перемешать, выдержать 15 мин при комнатной температуре. Инкубационную смесь следует предохранять от воздействия прямого света. После инкубации измеряют оптическую плотность опытной (А) пробы против холостой пробы в кюветах на 10 мм при длине волны 670 нм на ФЭКе.

Расчет концентрации мочевины в опытной пробе проводят по формуле:

С = (А/0,21)10 ммоль/л.

Норма 3,5-9,0 ммоль/л.

Эталоны ответов на тесты

1.1. -Д

1.2. –1.Б

2.Г

3.В

2.1.-2.В

3.1-.1-В

2-А, Б

3-А

4-Б

3.2-1-В, Е

2-А, Г

3-Б, Д

4.1.- Е (не верно, не верно, не верно)

4.2.- С (верно, не верно, не верно)

Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1.

Мочевина является продуктом обезвреживания аммиака. Полный набор ферментов синтеза мочевины имеется только в ткани печени. Синтез мочевины идет по следующей схеме:

С

NH3

О2

Карбамоилфосфат

орнитин цитруллин

мочевина

аспартат

аргинин аргининосукцинат

фумарат

Содержание мочевины в крови и моче больного снижены, что указывает на замедление скорости биосинтеза мочевины. Последствием нарушения функционирования орнитинового цикла будет повышение концентрации аммиака в крови. Гипераммониемия очень опасна в первую очередь для нервной системы и проявляется рвотой, торможением, потерей сознания и судорогами. Орнитиновый цикл синтеза мочевины обладает большим запасом мощности (в норме он функционирует только на 60%). Снижение аммиакфиксирующей функции печени наблюдается при тяжелых заболеваниях печени, сопровождающихся значительным уменьшением массы функционирующих гепатоцитов – при циррозе, тяжелых формах вирусных гепатитов.

Задача 2.

Аминокислота метионин является донором подвижной метильной группы в реакциях метилирования. Примерами реакций трансметилирования протекающих с участием метионина, являются превращение норадреналина в адреналин, гуанидинацетата в креатин, синтез мелатонина, метилирование азотных оснований нуклеотидов. Активной формой метионина (точнее его метильной группы) являются S- аденозилметионин:

Синтез сложных липидов (фосфолипидов) также включает реакцию метилирования с участием S- аденозилметионина.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]