7. Фактор II действует лишь в присутствии Са²⁺, потому что его посттрансляционная модификация в гепатоците осуществляется с участием витамина К.

8. Креатинкиназа сыворотки крови относится к секреторным ферментам крови, потому что креатинкиназа секретируется в кровь из печени.

Самостоятельная работа студентов

Работа 1. Определение содержания гемоглобина в крови

Цианметгемоглобиновым методом.

Принцип метода. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль), образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид), определяют колометрически.

Ход работы. В пробирку (осторожно!) отмеривают 5 мл трансформирующего раствора, к нему добавляют 0,02 мл крови (разведена в 251 раз). Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. Измеряют на ФЭКе при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Измеряют при тех же условиях стандартный раствор.

Расчет содержания гемоглобина производят по формуле:

Hb( г/л)= Е_оп/Е_ст С К 0,01

Е_оп – экстинкция опытной пробы; Е_ст-экстинции стандартного раствор; С-концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг/100 мл) К-коэффициент разведения крови (251); 0,01-коэффициент пересчета мг/100 мл в г/л.

Работа 2. Определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови амилокластическим методом.

Принцип метода. α- амилаза катализирует гидролиз крахмала с образованием конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Об активности α- амилазы судят по уменьшению интенсивности окраски.

Ход работы. В обычную химическую пробирку (опыт) вносят 1 мл раствора крахмала (субстрат), прогревают 5 мин. в термостате при 37^оС, после чего к нему добавляют 0,02 мл сыворотки крови. Пробу вновь помещают на 5 мин. в термостат. Контрольную пробу проводят так же, как опытную, но сыворотку в нее не вносят. Затем и в контрольную, и опытную пробирки доливают по 1 мл рабочего раствора йода и по 18 мл дистиллированной воды, пробирки хорошо взбалтывают, их содержимое колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (630-690 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды.

Расчет проводят по формуле:

(Е_к - Е_оп)

Х = ――――― · 240 г/ч · л ,

Е_к

где Х - активность альфа-амилазы;

Е_к - экстинкция контрольной пробы;

Е_оп - экстинкция опытной пробы.

Активность фермента сыворотки крови в норме составляет 16-30 г / ч · л.

Работа 3. Определение щелочного резерва крови титриметрическим методом.

Под резервной щелочностью крови понимают количество оснований крови, связанных с углекислотой. По данной методике определяется запас щелочных валентностей в цельной крови, включая и эритроциты.

Принцип метода. Заключается в связывании щелочей цельной крови соляной кислотой, избыток которой затем оттитровывают до появления в растворе мути, что соответствует изоэлектрической точке белков крови.

Ход работы. К 10 мл 0,01 н раствора соляной кислоты в стаканчике или колбочке для титрования добавляют 0,2 мл крови, тщательно перемешивают и прозрачную бурого цвета жидкость титруют из микробюретки 0,1 м раствором NaOH до помутнения и выпадения хлопьев. Обычно конец реакции наступает резко, от одной капли щелочи при рН 5,0.

Расчет производят по формуле:

(1-d) · 0,1 · 1000

щелочной запас крови = ―――――――― м · экв/л ,

0,2

где 1 – количество раствора соляной кислоты, взятого для анализа и

выраженного в миллилитрах при условии 0,1 н ее концент-

рации;

d - количество щелочи, израсходованное на титрование;

0,1 – нормальность щелочи;

0,2 - количество мл крови, взятой для анализа.

У здоровых людей нормальный рН крови составляет 7,36–7,42. Значения рН вышедшие за пределы 6,8-7,8 несовместимы с жизнью.

СО₂ – связывающая способность плазмы крови у грудных детей составляет 20-24 м-экв/л, у старших детей 21-27 м-экв/л, у взрослого человека -22-29 м-экв/л.