Самостоятельная работа студентов Работа 1. Количественное определение содержания лецитина в сыворотке крови.

Содержание лецитина в сыворотке крови здорового человека зависит от возраста, составляя в среднем 1,5-2,7 г/л. Изменение содержания лецитина в крови наблюдается при ряде заболеваний (атеросклероз, сахарный диабет, микседема и др.).

Принцип метода. Лецитин извлекается из сыворотки крови горячим спиртом; после минерализации в экстракте колориметрическим методом определяется неорганический фосфор, содержащийся в составе лецитинов. Количество лецитина определяется по стандартной кривой.

Ход работы. В пробирку налить 1 мл сыворотки крови и 2,5 мл спирта. Содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой. Пробирку неплотно закрыть резиновой пробкой и поместить на 10 минут в водяную баню при температуре 80°С. Параллельно поставить контрольную пробу с 2,5 мл смеси Блюра. Содержимое обеих пробирок охладить, профильтровать через обезжиренный фильтр в сухие пробирки. Для полноты извлечения содержимое пробирки сполоснуть 1-1,5 мл смеси Блюра и вылить на фильтр.

Полученные фильтраты (опыт и контроль) осторожно выпарить, добавить в каждую пробирку по 5 капель концентрированной серной кислоты и сжечь на слабом пламени спиртовки до появления бурой окраски и тяжелых белых паров. Пробирки охладить на воздухе, добавить по 5-6 капель пергидроля и содержимое пробирок вновь сжечь до обесцвечивания жидкости. После охлаждения в каждую пробирку добавить по 2 мл бидистиллированной воды, нейтрализовать содержимое пробирок 6-7 каплями 33% раствора едкого натра, после чего добавить по 2,5 мл ацетатного буфера (рН - 4,0), 0,5 мл 2% раствора молибденово-кислого аммония и 1 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешать и через 10 минут колориметрировать па ФЭКе с красным светофильтром (опыт против контроля). Содержание лецитина в сыворотке крови в г/л рассчитать по калибровочному графику.

Работа 2. Количественное определение холестерина в сыворотке крови по методу Илька.

Принцип метода. Холестерин, содержащийся в сыворотке крови, обрабатывается реактивом Либермана-Бурхарда (смесь уксусного ангидрида, ледяной уксусной кислоты и концентрированной Н₂SО₄). При этом холестерин теряет воду и превращается в непредельный углеводород, который с уксусным ангидридом образует зеленое окрашивание. Интенсивность полученной окраски определяется на ФЭКе.

Ход работы. В сухую (!) пробирку поместить 2,1 мл реактива Либермана-Бурхарда и осторожно по стенке пробирки добавить 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови. Пробирку тотчас же встряхнуть энергичными движениями 8-10 раз и поместить в термостат при температуре 30°С на 20-25 минут в темноте. Полученную зеленую окраску колориметрировать на ФЭКе при красном светофильтре против дистиллированной воды в кюветах с толщиной слоя 5 мм.

По найденной экстинции определить количество холестерина в г/л по стандартной кривой.

Содержание холестерина в сыворотке крови у человека зависит от возраста. В сыворотке крови здорового взрослого человека содержится 1,5-2,4 г/л холестерина, у детей - 1,0-1,3 г/л, юношей - 1,3-1,8 г/л, у людей пожилого возраста выше 2,4 г/л. Обмен холестерина часто нарушается при различных заболеваниях (атеросклероз, гипертоническая болезнь и др.).