Работа 2. Количественное определение остаточного азота в крови

по методу Ацеля.

Под остаточным азотом крови понимают суммарный азот всех азотсодержащих веществ небелковой природы. Остаточный или небелковый азот слагается из мочевины, свободных аминокислот, несложных полипептидов, аммиака, пуриновых оснований, мочевой кислоты, креатинина, индикана, гиппуровой кислоты и других соединений У здоровых людей содержание остаточного азота в крови составляет 0,2-0,4 г/л. Увеличение количества остаточного азота наблюдается при нарушении выведения азотистых шлаков с мочой (заболевания почек) и при состояниях, сопровождающихся усиленным распадом белка в тканях (лихорадка, голодание, ожоговая и лучевая болезнь и др.).

Принцип метода. Белки крови осаждаются трихлоруксусной кислотой. Безбелковый фильтрат минерализуется сжиганием с концентрированной серной кислотой и переводится в сернокислый аммоний, который определяется колориметрически с раствором Несслера.

Ход определения.

1. В пробирку налить 1,8 мл дистиллированной воды и 0,2 мл крови, взятой из пальца. Содержимое пробирки тщательно взболтать, добавить 1 мл 10 % раствора ТХУ, перемешать, оставить на 15 мин и затем отфильтровать в сухую пробирку.

2. Минерализация безбелкового фильтрата. 1 мл полученного безбелкового фильтрата перенести в сухую пробирку из тугоплавкого стекла, прибавить 3 капли концентрированной серной кислоты и осторожно нагреть на пламени спиртовки до появления тяжелых белых паров. При этом на дне пробирки останется 1-2 капли темной жидкости. Пробирку охладить, прибавить 3 капли пергидроля и вновь нагреть до появления тяжелых паров и обесцвечивания содержимого пробирки.

3. Фотометрирование. По окончании сжигания минерализат охладить, прибавить 10 мл дистиллированной воды, 6 капель 50 % раствора NаОН, 1 каплю концентрированной серной кислоты, тщательно перемешать и прибавить 0,5 мл реакгива Несслера. После перемешивания отметить появление желтой окраски.

В контрольную пробирку добавить 10 мл дистиллированной воды, 6 капель 50 % раствора NаОН, 1 каплю концентрированной серной кислоты, тщательно перемешать и прибавить 0,5 мл реактива Несслера.

Фотометрируют против контроля на ФЭКе при синем светофильтре в кювете на 10 мм. По калибровочному графику находят соответствующее количество остаточного азота.

В норме содержание остаточного азота в крови составляет 20-40 мг/дл (0,2-0,4 г/л) или 14,3-28,6 ммоль/л.

Работа 3. Количественное определение мочевины в моче по Рашковану.

Принцип метода основан на том, что мочевина с гипохлоритом натрия и фенолом образуют продукт зеленого окрашивания.

Ход определения. В пробирку поместить 0,1 мл разведенной в 100 раз исследуемой мочи, добавить 7 мл этилового спирта-ректификата и прилить 2,0 дистиллированной воды. К полу-ченной смеси прибавить 1 мл 0,035 н. раствора НС1, тщательно перемешать, добавить 1 мл 1,2% раствора NaОС1, вновь тщательно перемешать и сразу же добавить 1 мл 5 % раствора фенола. Содержимое пробирки хорошо перемешать и поместить на 25 мин в термостат при температуре 55-60° С.

Окрашенный в зеленый цвет раствор охладить и колориметрировать на ФЭКе с красным светофильтром в кюветах толщиной 5 мм против воды. Концентрацию мочевины рассчитать с помощью калибровочного графика с учетом разведения мочи и суточного диуреза (1500—2000мл).