Работа 4. Количественное определение протеолитической активности желудочного сока по Ансону.

Принцип метода. О протеолитической активности желудочного сока судят по количеству образующихся при расщеплении казеина неосаждаемых трихлоруксусной кислотой пептидов, количество которых соответствует количеству определяемого в них тирозина.

Ход определения. В две центрифужные пробирки отмерить по 1 мл желудочного сока, разведенного в 10 раз. В опытную пробирку добавить 1,0 мл 5 % раствора казеината натрия, а в контрольную - 2,0 мл 5 % ТХУ. Содержимое пробирок перемешать, поместить в термостат при температуре 38° С на 20 мин. После термостатирования в контрольную пробу добавить 1 мл 5 % раствора казеината натрия, в опытную - 2,0 мл 5 % ТХУ. Выдержать 15 мин. Далее центрифугировать 15 мин при 3000 об/мин. После этого отобрать в 2 биологические пробирки по 1 мл центрифугата (надосадочной жидкости) и по 5 мл 0,5 н раствора Nа₂СО₃. При перемешивании в обе пробирки добавить по 1 мл реактива Фолина и выдержать 20 мин. Оптическую плотность опытного раствора измерить на ФЭКе при длине волны 760 нм (красный светофильтр) в кювете толщиной 10 мм против контроля. Концентрацию тирозина (С_тир.) найти по калибровочному графику.

Расчет. А=2С_тир. (мкМ/мл мин)

В норме протеолитическая активность желудочного сока равна 0,15-0,5 мкМ/мл мин.

Эталоны ответов на тесты

1.1 –1,2.

1.2.- 2.В.

2.1.-. 1. Б, Д.

2.А, В, Г, Е.

2.2.- А- 1

Б- 5

В- 3

Г- 2

Д – 4.

3.1.- В (верно только А, В)

3.2.- С (верно только 2, 4)

4.1.- А (верно, верно, верно)

4.2.- В (верно, верно, не верно)

Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1.

Фонд свободных аминокислот организма наполняется из трех источников- белков пищи, Белков собственных тканей и за счет синтеза из углеводов. Последний пункт справедлив только в отношении заменимых аминокислот

Пищевые белки (100 г)

Белки собственных тканей

Синтез из углеводов (только для заменимых аминокислот)

Фонд свободных аминокислот

Метионин и лизин относятся к незаменимым аминокислотам - т.е. аминокислотам, которые не могут быть синтезированы в организме. Если отсутствует хотя бы одна из неземенимых аминокислот, синтез белка прекращается, поэтому в условиях, когда пища не содержит какую–либо незаменимую аминокислоту (или аминокислоты), их единственным источником становятся белки собственных тканей, распад тканевых белков усиливается, что приводит к развитию отрицательного азотистого баланса.

Задача 2.

Перечисленные симптомы указывают на снижение переваривающей способности желудочного сока, что может быть связано с низкой секрецией или отсутствием соляной кислоты и/или пепсина. В норме соляная кислота синтезируется обкладочными клетками в концентрации 0,16 м, что соответствует рН 1-2 . Одной из основных функций НCl в желудочном соке, помимо активации пепсиногена – и создания оптимального рН, денатурации пищевых белков, является бактерицидное действие. При отсутствии или дефиците НCl в желудочном соке (анацидное, гипоацидное состояние) усиливаются процессы молочнокислого брожения («отрыжка с кислым запахом»). Таким больным показана заместительная терапия - назначение препаратов желудочного сока, ацидин-пепсин (соляная кислота + пепсин).