3.6 Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия использует подсветку от кварцевой или галогеновой лампы, либо от ртутной лампы высокого давления.

Преимущество люминесцентной микроскопии заключается в том, что мазки про­сматриваются при меньшем увеличении, тем самым охватывается большая область и как результат, времени на просмотр затрачивается значительно меньше. Недо­статком люминесцентной микроскопии является вероятность принятия кислото­упорных артефактов за кислотоустойчивые палочки. Поэтому рекомендуется про­верять все найденные сомнительные палочки под большим увеличением, а положи­тельные мазки подтверждать окрашиванием по методу Циля-Нильсена.

3.6.1 Приготовление реактивов

АураминО

• Аурамин0,1 г

• 95% этиловый спирт 10 мл

• Растворите аурамин в спирте - раствор №1

Аурамин является канцерогенным веществом и поэтому следует избегать прямого контакта с порошком или раствором красителя.

Фенол

• Кристаллы фенола 3 г

• Дистиллированная вода87 мл

• Растворите кристаллы фенола в воде - раствор №2

Смешайте растворы №1 и №2. Реактив хранится в прочно закрытой емкости из темного стекла в темноте, вдали от источников тепла. Раствор хранится при ком­натной температуре в течение 3 месяцев. Реактив может помутнеть во время хране­ния, но это не отражается на качестве окрашивания.

Обесцвечивающий раствор:

• Концентрированная соляная кислота 0,5 мл

• 70% этиловый спирт (можно технический для перманганата калия и акриди­ нового оранжевого) - 100 мл.

Осторожно добавьте концентрированную соляную кислоту к 70% этиловому спир­ту. Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, не наоборот. Смесь может на­греться. Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Соляно-кислый спирт 3,0%:

- Концентрированная соляная кислота 3 мл

- 95% этиловый спирт (можно технического качества) 97 мл Осторожно добавьте концентрированную соляную кислоту к 95% этиловому спир-

28

ту. Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, не наоборот. Смесь может на­греться. Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Фоновое окрашивание

В качестве красителей возможно использование перманганата калия, акридинового оранжевого; 0,25% водного раствора метиленового синего и кислого фуксина.

Перманганат калия

• Перманганат калия 0,5 г

• Дистиллированная вода 100 мл

Растворите перманганат калия в дистиллированной воде. Приготовленный реактив хранится в хорошо укупоренном флаконе из темного стекла. Раствор может хра­ниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Акридиновый оранжевый

• Безводный двухзамещенный фосфат натрия 0,01 г

• Дистиллированная вода 100 мл

• Акридиновый оранжевый 0,01 г

• Растворите фосфат в дистиллированной воде, затем добавьте акридиновый оранжевый и растворите.

Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла в темноте и вдали от источников тепла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Кислый фуксин

• Кислый фуксин 1гр

• Дистиллированная вода 300 мл

• Концентрированная уксусная кислота 10мл

• Растворите кислый фуксин в дистиллированной воде, добавьте уксусной кис­ лоты. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Метиленовый синий (0,25% водный раствор)

• Метиленовый синий 0,25 г

• Дистиллированная вода 100 мл

• Растворите аурамин в спирте - раствор № 1

Растворите метиленовый синий в дистиллированной воде. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

На всех флаконах с реактивами написать название реактива, дату приготовления и срок хранения.