Обнаружение микобактерий туберкулеза

Микобактерий туберкулеза в материале в норме отсутствуют.

В отличие от серологических методов диагностики туберкулезной инфекции, где нахо­дят антитела к микобактериям туберкулеза, ПЦР позволяет выявить наличие непосредствен­но ДНК микобактерий туберкулеза и количественно выразить его концентрацию в исследуе­мом материале. Исследуемым материалом могут быть мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, моча, пунктаты из различных органов и кист и др. Тест имеет видовую специфичность и вы­сокую чувствительность (более 95 %). Микробиологическая диагностика туберкулеза в на­стоящее время — основной метод выявления больных и мониторинга эффективности лече­ния. Однако микробиологические анализы на туберкулез чрезвычайно продолжительны и имеют низкую чувствительность (выявление положительных проб не превышает 50 %). Диа­гностика туберкулеза ПЦР имеет большое диагностическое значение (время исследования 4—5 ч). В исследованиях В.И. Голышевской и соавт. (1998) показано, что результаты ПЦР в 100 % случаев совпадали с положительными результатами микроскопии и бактериологичес­кого посева и свидетельствовали о наличии ДНК микобактерий в 65 % случаев у больных ту­беркулезом с отрицательным результатом микроскопии и посева. Обнаружение ДНК мико­бактерий туберкулеза в материале с помощью ПЦР необходимо для:

• быстрого обнаружения источника инфекции;

• диагностики легочного туберкулеза;

• диагностики туберкулеза внелегочной локализации; —контроля эффективности противотуберкулезного лечения;

• раннего выявления случаев рецидивов.

Вместе с тем следует отметить, что ПЦР для диагностики туберкулеза не заменяет бакте­риологических методов.

391

Обнаружение Helicobacter pylori

Helicobacter pylori в исследуемом материале в норме отсутствует.

Helicobacter pylori отводится ведущая роль в этиологии хронического гастрита, язвенной болезни, рака желудка. Колонизация эпителия слизистой оболочки желудка и двенадцати­перстной кишки Helicobacter pylori является одним из основных факторов возникновения хронического воспаления, называемого гастритом типа В. На фоне гастрита типа В образу­ются пептические язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Исследования последних лет показали, что развитие гастрита и язвы желудка связано в первую очередь с колонизацией слизистой оболочки токсигенными штаммами Helicobacter pylori, в то время как колониза­ция нетоксигенными штаммами только в небольшом проценте случаев приводит к развитию этих заболеваний. Токсигенность штаммов обусловлена продукцией вакуолярного цитоток-сина, синтез которого связан с продукцией белка с мол. массой 120 000—128 000, кодируемо­го геном Coag A (cytoxin-associated gene А). Присутствие токсигенных штаммов является важным фактором перерождения язвы в аденокарциному. В настоящее время основной метод, позволяющий выявлять токсигенные штаммы, — бактериологический метод. Однако в последние годы разработаны три вида тест-систем, диагностирующих Helicobacter pylori:

1-й — на основе праймеров к последовательности 16S-pPHK, позволяющих идентифи­цировать Helicobacter pylori как вид;

2-й — на основе праймеров к последовательности Coag А-гена;

3-й — на основе праймеров к последовательности Vac-гена, кодирующего синтез вакуо­лярного токсина. Только две последние тест-системы выявляют токсигенные штаммы Heli­cobacter pylori.

Материалом для исследования служат биоптаты слизистой оболочки желудка или кал.

В настоящее время лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori пред­ставляет собой трудную задачу, так как существует значительное число штаммов возбудите­ля, резистентных к антибиотикам. Helicobacter pylori имеет природную резистентность к сле­дующим антибиотикам: ванкомицину, триметоприму, цефсулоидину и полимиксину [Ме-graud F., 1995]. Помимо природной, существует приобретенная резистентность — первичная и вторичная. Первичная резистентность возникает при приеме антибактериальных препара­тов, не связанных с инфицированием Helicobacter pylori; вторичная — непосредственно в процессе лечения инфекции. В настоящее время описана резистентность Helicobacter pylori к четырем группам антибиотиков: нитроимидазолам, макролидам, фторхинолонам и произ­водным рифампицина. Показатель первичной резистентности Helicobacter pylori к нитро-имидазолу в России составляет около 30 %, а вторичной резистентности в группах больных язвенной болезнью превышает 50 % [Иванников И.О., 1998]. Для практикующего врача важно не только диагностировать инфекцию, вызываемую Helicobacter pylori, но и еще до начала лечения знать чувствительность возбудителя к тем или иным группам антибиотиков.

В настоящее время ПЦР нашла практическое применение и в изучении феномена анти-биотикоустойчивости штаммов Helicobacter pylori. С помощью произвольно-праймерной ПЦР с использованием рестрикционных эндонуклеаз можно обнаружить точечные мутации в 23S-pPHK гене, которые обусловливают устойчивость Helicobacter pylori к макролидам. Разрабатываются тест-системы с ПЦР и для выявления точечных мутаций в генах, ответст­венных за устойчивость штаммов Helicobacter pylori к другим группам антибиотиков.