65. Реакция нейтрализации (рн) для определения типа ботулинового токсина.

двухкомпонентная, сложная реакция, основана на способности Ат нейтрализовать биологическую активность возбудителя или его экзотоксина. Используется для определения типа ботулинового экзотоксина в исследуемом материале. Компоненты реакции: диагностические противоботулинические антитоксические моновалентные сыворотки типов A, B, E, F; исследуемый материал от больного, в котором содержится предполагаемый ботулиновый экзотоксин (кровь или промывные воды желудка). В качестве индикаторной системы используют белых мышей.

Постановка реакции: в 5 пробирок помещают исследуемый материал, в четыре из них добавляют соответствующие моновалентные противоботулинические антитоксические сыворотки А, В, Е, F. 5-я пробирка – «контроль» – содержит исследуемый материал и физиологический раствор. Смеси оставляют для контакта на 30 минут. Затем 5 мышам вводят по 1,0 мл каждой смеси внутрибрюшинно. Учѐт результатов проводят в течение 4-х суток (ежедневно). При наличии экзотоксина в исследуемом материале контрольная мышь погибает обязательно. Из мышей, взятых в опыт, выживает только одна мышь, которой была введена нейтральная смесь т.к. тип экзотоксина совпал с типом сыворотки и произошла его нейтрализация.

66. Реакция связывания комплемента (рск). Практическое использование.

Реакция связывания комплемента (РСК) – сложная трехкомпонентная реакция. Компоненты: исследуемая сыворотка пациента; диагностикум; комплемент. Индикаторная (гемолитическая) система – гемолитическая сыворотка + эритроциты барана.

Постановка реакции (рис.6): в опытную пробирку помещают исследуемую сыворотку пациента (Ат), диагностикум (известный Аг) и комплемент; оставляют пробирку на 1 час в термостате (37⁰С) для контакта. В другой пробирке готовят индикаторную систему (гемолитическая сыворотка + взвесь эритроцитов барана). Через 1 час инкубации в опытную пробирку добавляют индикаторную систему. Учет реакции производят через 16-18 часов.

М еханизм: при положительной реакции в сыворотке больного присутствуют антитела, образуется комплекс Аг+Ат и комплемент адсорбируется на этом комплексе. Поэтому, когда в пробирку добавляют индикаторную (гемолитическую) систему, в отсутствии комплемента не происходит реакции иммуногемолиза, и эритроциты выпадают в осадок. При отрицательной реакции (отсутствие соответствующих антител в сыворотке обследуемого) не образуется комплекс [Аг+Ат], поэтому комплемент остается свободным и связывается с гемолитической системой, что приводит к гемолизу (лизису эритроцитов). РСК используется для диагностики бактериальных (сифилис) и вирусных инфекций.

67. Реакции иммунофлюоресценции (риф). Практическое использование.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) прямая (рис.7): двухкомпонентная сложная серологическая реакция. Компоненты: диагностическая антимикробная сыворотка (Ат), меченная флюорохромом (изотиоцианат флюоресцеина); исследуемый антиген (бактерии или клетки организма, пораженные вирусами) – Аг. Индикатором реакции является флюорохром (*), который светится в УФ-лучах.

Постановка реакции: на фиксированный мазок материала, в котором находится возбудитель (Аг), наносят люминесцирующую диагностическую сыворотку на 10-15 минут, затем сыворотку сливают, препарат промывают водой и микроскопируют в люминесцентном микроскопе. Если исследуемый антиген соответствует антителам сыворотки, они адсорбируются на его поверхности, и наблюдается яркое зеленое свечение клеток возбудителя или клеток, пораженных микроорганизмом. РИФ используется для экспресс-диагностики холеры, сибирской язвы, вирусных инфекций.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) непрямая (рис.8): трехкомпонентная сложная серологическая реакция. Компоненты: диагностическая антимикробная сыворотка (Ат), полученная путем иммунизации кроликов конкретным антигеном; исследуемый антиген (бактерии или клетки, пораженные вирусом) – Аг; антиглобулиновая (антикроличья) сыворотка (АГС), меченная флюорохромом. Содержит антитела против кроличьих иммуноглобулинов. Индикатором реакции является флюорохром (*).

Постановка реакции: на фиксированный мазок из исследуемого материала наносят диагностическую антимикробную сыворотку на 10-15 минут. Затем сыворотку сливают, препарат промывают водой и наносят антиглобулиновую (антикроличью) сыворотку, меченную флюорохромом, и повторно промывают. При положительной реакции (если в мазке есть возбудитель) образуется комплекс микроб + антимикробные (кроличьи) антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. При микроскопии в люминесцентном микроскопе наблюдается яркое зеленое свечение клеток возбудителя или клеток, пораженных микроорганизмом. Реакция используется для экспресс-диагностики бактериальных и вирусных инфекций.