62. Реакция агглютинации (ра), практическое применение.

Реакция агглютинации («agglutinatiо» (лат.) – склеивание): 2компонентная простая серологическая реакция (рис. 3). Компоненты реакции агглютинации (РА): корпускулярный антиген (бактериальные клетки) и антитела. В результате реакции образуется агглютинат (комплекс [Аг+Ат]). Антитела «склеивают» бактерии и препятствуют их размножению.

РА используется:

1. Для идентификации микробов (определение вида возбудителя, выделенного от больного) с помощью известных антител (диагностическая сыворотка). Этот вариант реакции агглютинации выполняется в 2-х технических модификациях: ориентировочная (на предметном стекле); развернутая (в пробирках) – для окончательной идентификации исследуемой культуры. Используется для диагностики брюшного тифа, дизентерии, холеры и др. заболеваний.

2. Для определения титра антител в сыворотке крови обследуемого с помощью известных антигенов (диагностикумы). Технически всегда выполняется в виде развернутой РА. Используется для диагностики брюшного тифа, бруцеллеза и др. заболеваний.

Чтобы подтвердить клинический диагноз, титр антител, обнаруженных в сыворотке больного, сравнивают с диагностическим титром для данного заболевания.

Диагностический титр – это минимальное содержание антител в сыворотке крови больного, позволяющее установить диагноз инфекционного заболевания. Например, при брюшном тифе и бруцеллѐзе диагностический титр РА для взрослых – 1/200, для детей – 1/100.

Если титр реакции совпадает с диагностическим титром, значит, пациент болен.

Каждая серологическая реакция, в том числе РА, сопровождается постановкой контролей:

• контроль сыворотки: сыворотка + физиологический раствор. Контроль должен быть прозрачным;

• контроль антигена: взвесь микробов + физиологический раствор. Контроль должен быть равномерно мутным.

Учѐт результатов РА производят визуально.

При положительной реакции на предметном стекле или в пробирках образуется хлопьевидный осадок. При отрицательной реакции жидкость остается равномерно мутной, как в контроле антигена.

63. Реакция преципитации (рп), практическое применение.

Реакция преципитации («praеcipito» (лат.) – осаждать): двухкомпонентная простая реакция. Компоненты реакции преципитации (РП): растворимый антиген (например, бактериальный токсин) и антитела. В результате реакции образуется преципитат (комплекс [Аг+Ат]) в виде помутнения.

Одним из технических вариантов РП является реакция преципитации в геле для определения токсигенности возбудителя дифтерии: на сывороточный МПА в чашке Петри накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную противодифтерийной антитоксической сывороткой. На расстоянии 0,5-1 см от полоски бумаги делают посев бляшками дифтерийных культур, а также заведомо токсигенной контрольной культуры. Антитела сыворотки диффундируют от фильтровальной бумаги в агар и в том месте, где они встречаются с дифтерийным экзотоксином, образуются линии преципитации (рис.4).

64. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга). Практическое использование.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): двухкомпонентная, сложная реакция, используется в 2 модификациях:

а) по Рыцаю:

Компоненты: эритроциты, на которых адсорбированы известные антитела (эритроцитарный антительный диагностикум); неизвестный антиген (исследуемый материал). Реакцию используют для экспрессного выявления типа ботулинового экзотоксина, для диагностики чумы, вирусных инфекций и др.

б) по Бойдену:

Компоненты: эритроциты, на которых адсорбирован известный антиген (антигенный эритроцитарный диагностикум); сыворотка крови больного для определения в ней титра антител. Реакцию используют для диагностики брюшного тифа, вирусных инфекций и др.

Эритроциты в РНГА выполняют роль индикаторной системы, что позволяет визуально обнаружить результат реакции.

Учѐт РНГА: при положительной реакции происходит образование иммунных комплексов [Аг+Ат], которые вызывают склеивание эритроцитов с формированием осадка с неровными краями в виде «перевернутого зонтика». При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговицы».