Методы идентификации вирусов

Идентификацию вирусов проводят по антигенным свойствам с помощью серологических реакций со специфическими диагностическими противовирусными сыворотками. Основными реакциями являются: реакция торможения гемагглютинации, реакция нейтрализации в культуре клеток или в организме животного, реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА): 2-компонентная, сложная серологическая реакция.

Компоненты реакции: исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг), типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат).

Индикатор реакции: 1% взвесь эритроцитов.

Постановка реакции: готовят разведения диагностических сывороток в лунках полистироловой пластины. К ним добавляют вируссодержащую жидкость и оставляют на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем в лунки вносят взвесь эритроцитов. Учет реакции проводят через 1-2 часа.

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу сыворотки. Вирусный гемагглютинин блокируется антителами сыворотки, поэтому агглютинация эритроцитов отсутствует. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с ровными краями, в виде «пуговицы».

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки. Вирусный гемагглютинин склеивает эритроциты. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с неровными краями в виде «перевернутого зонтика».

РТГА применяют для идентификации вирусов гриппа и других вирусов, имеющих в суперкапсидной оболочке фермент гемагглютинин.

Реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток: 2-компонентная, сложная серологическая реакция.

Компоненты реакции: исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг), типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат).

Индикатор реакции: культура клеток.

Постановка реакции: вируссодержащую жидкость смешивают в пробирках со специфическими диагностическими сыворотками. Оставляют на 1 час при комнатной температуре. Затем содержимым пробирок заражают культуры клеток во флаконах.

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу сыворотки. Происходит нейтрализация вируса антителами сыворотки и культура клеток остается нормальной, без изменений.

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки. Вирус оказывает цитопатогенное действие, что приводит к дегенерации культуры клеток.

РН в культуре клеток применяют для идентификации вирусов полиомиелита, аденовирусов и др.

РН можно также использовать для идентификации вирусов, культивируемых в организме лабораторных животных. Компоненты и постановка реакции такие же, как в РН в культуре клеток. Индикатор реакции: лабораторное животное (в частности, белые мыши).

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу диагностической сыворотки, происходит его нейтрализация антителами сыворотки и животное остается здоровым.

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки, животное погибает.

РН в организме животного используется для идентификации вирусов бешенства.

В таблице 2 представлены обобщенные данные о методах культивирования, индикации и идентификации вирусов.