9. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий. Окраска по Цилю-Нильсену, механизм окраски.

КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫЕ БАКТЕРИИ имеют особый химический состав клеточной стенки с повышенным количеством липидов и жирных кислот (миколовой и миколеновой).

К ним относят:

Mycobacterium tuberculosis – возбудитель туберкулеза;

Mycobacterium leprae – возбудитель лепры;

Mycobacterium africanum – возбудитель эндемического туберкулеза в Африке;

Mycobacterium scrofulaceum – возбудитель лимфаденитов у детей;

Mycobacterium smegmatis – нормальный симбионт мочеполовой системы мужчин.

Кислотоустойчивые бактерии плохо воспринимают красители. Для их окраски и дифференцировки от других бактерий используют метод Циля-Нильсена.

Окраска по Цилю-Нильсену. Механизм окраски.

• на фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги и наносят карболовый фуксин Циля. Над пламенем спиртовки подогревают мазок 2-3 раза до появления пара;

• бумагу снимают, препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, погружая в стаканчик с кислотой 2-3 раза;

• промывают водой, окрашивают метиленовым синим 3-5 минут; - промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, кислотоподатливые – в синий.

Механизм окраски:

При обработке препарата карболовым фуксином Циля все клетки окрашиваются в красный цвет. При последующем обесцвечивании серной кислотой кислотоустойчивые бактерии из-за особенностей своего химического состава удерживают краситель. Кислотоподатливые – обесцвечиваются, поэтому при дальнейшем окрашивании метиленовым синим воспринимают краситель и приобретают синий цвет.

10. Цитоплазма бактерий, ее составные, их функции.

Цитоплазма занимает основной объем бактериальной клетки. Представляет собой аморфный матрикс, содержащий различные органические соединения, органеллы и включения.

• нуклеоид – внутренняя зона цитоплазмы. Представлен одной кольцевой молекулой ДНК, содержащей около 2000 генов. Нуклеоид не имеет ядерной оболочки, ядрышек и основных белков (гистонов). Содержит одну хромосому, имеет гаплоидный (одиночный) набор генов, поэтому клетка не способна к митотическому делению. Нуклеоид выявляется специальными методами окраски

(по Романовскому-Гимзе и др.) и электронной микроскопией;

• плазмиды – факторы внехромосомной наследственности, автономно присутствующие в цитоплазме в виде небольших молекул ДНК. Гены плазмид могут придавать бактериям новые свойства, способствующие их выживанию. Особое значение в медицине имеют плазмиды, обеспечивающие устойчивость бактерий к антибиотикам. У патогенных бактерий плазмиды кодируют факторы, способствующие развитию инфекционного процесса;

• рибосомы – состоят из двух субъединиц, но отличаются от рибосом эукариот молекулярной массой. Функция рибосом – синтез белка. Индикация 16S рРНК бактерий является основой метода пиросеквенирования (см. занятие №1);

• мезосомы – являются производными ЦПМ при впячивании ее участков в цитоплазму. Функции: участвуют в энергетическом метаболизме, в процессах деления и спорообразования;

• включения образуются в процессе жизнедеятельности клетки и выполняют резервную (трофическую и энергетическую) функцию. Они представлены гранулами гликогена, крахмала, каплями жира, минеральными веществами – серой, кальцием, железом и др., а также зернами волютина. Зерна волютина по химической природе полифосфаты – являются запасным источником энергии. Для обнаружения зерен волютина используют метод окраски по Нейссеру. В результате окраски бактерии приобретают нежно-желтый цвет, а зерна волютина – темно-синий.

Зерна волютина имеют: Spirillum volutans– сапрофит; Corynebacterium diphtheriaе; Corynebacterium xerosis; Corynebacterium ulcerans – возбудитель дифтериеподобных поражений кожи.