Выход вирусов из клетки.

31. Типы вирусной инфекции на уровне клетки.

Продуктивная:

• взрывной механизм: после репродукции вируса из погибающей клетки одновременно выходит большое количество вирионов. Такой тип инфекции характерен для простых вирусов;

• почкование: после репродукции вирусного нуклеокапсида происходит его контакт с определенным участком клеточной мембраны, выпячивание и отпочковывание вириона, покрытого мембраной, от клетки. Такой тип инфекции характерен для сложных вирусов. При этом клетка способна длительно сохранять жизнеспособность. Она становится источником вирусной инфекции для здоровых клеток, постоянно продуцируя вирусные частицы почкованием.

Абортивная: не завершается образованием вирусного потомства и гибелью клетки. Это обусловлено либо дефектностью самого вируса, либо генетической резистентностью клетки к данному вирусу.

Интегративная: не приводит к гибели клеток. При этой форме инфекции вирусная ДНК встраивается в геном клетки-хозяина и в последующем при делении передается дочерним клеткам.

В зависимости от типа вирусной нуклеиновой кислоты различают два варианта интегративной инфекции:

для ДНК-содержащих вирусов: происходит интеграция ДНК вируса с ДНК клетки-хозяина;

для РНК-содержащих вирусов: на вирусной РНК под действием фермента «РНК-зависимая ДНК-полимераза» (обратная транскриптаза или ревертаза) синтезируется ДНК. Затем образовавшаяся вирусная ДНК интегрируется с ДНК клетки-хозяина.

В результате интегративной инфекции возможно превращение (трансформация) нормальных клеток в опухолевые. Интегративная инфекция характерна для онкогенных (опухолевых) вирусов и умеренных бактериофагов.

32. Интегративная вирусная инфекция. Вирусо-генетическая теория онкогенеза л.А.Зильбера. Основные онкогенные вирусы.

В 50-х годах XX столетия Л.А. Зильбер сформулировал вирусо-генетическую теорию, согласно которой вирусная ДНК интегрирует с ДНК клеткихозяина, что приводит к трансформации нормальных клеток в опухолевые.

Механизм интегративной инфекции для РНК-содержащих онкогенных вирусов был выяснен намного позже, после открытия фермента «обратная транскриптаза» (см. выше). Последующие исследования выявили новые данные о роли ДНК- и РНК-содержащих вирусов в онкогенезе.

В геноме нормальных клеток существуют клеточные онкогены (протоонкогены). Они находятся в неактивном состоянии и кодируют белки, стимулирующие размножение клеток во время эмбрионального развития, а также контролирующие рост и размножение клеток во взрослом состоянии, когда в этом есть необходимость.

Онкогенез для ДНК-содержащих вирусов

Некоторые ДНК-содержащие вирусы имеют онкогены, сходные с человеческими. Функции вирусных онкогенов разнообразны и при интеграции ДНК вируса в геном клетки человека они могут нарушать синтез нормальных факторов размножения клетки на разных этапах. Итогом таких взаимодействий является избыточное размножение клетки и деление ее в незрелом состоянии.

Так формируется опухоль.

Онкогенез для РНК-содержащих вирусов

РНК-содержащие вирусы, способны индуцировать онкогенез, выступая в роли канцерогенных факторов. На вирусной РНК с помощью собственного фермента «РНК-зависимая ДНК-полимераза» (обратная транскриптаза) синтезируются ДНК. Затем вирус встраивает в геном клетки свою ДНК-копию рядом с клеточным онкогеном и вызывает повышение его активности. Это приводит к злокачественной трансформации клетки.

Основные онкогенные вирусы, вызывающие опухоли у человека.

ДНК-содержащие:

• семейство Papillomaviridae: вирусы папилломы человека – вызывают рак кожи, рак шейки матки;

• семейство Herpesviridae: вирус простого герпеса II типа – вызывает рак шейки матки, рак простаты; вирус Эпштейна-Барр – вызывает рак носоглотки (назофарингеальный рак) и лимфому Беркитта (лимфоидную опухоль верхней челюсти); герпесвирус 8 типа – вызывает саркому Капоши;

• семейство Hepadnaviridae: вирус гепатита В – вызывает первичный рак печени.

РНК-содержащие:

• семейство Retroviridae: лимфотропные вирусы – вызывают Т-клеточные лимфомы, Т-клеточный лейкоз и др.;

• вирус гепатита С – вызывает рак печени.

3 3. Методы культивирования вирусов.

Индикацию вирусов, культивируемых в культуре клеток, можно проводить по их цитопатогенному действию (ЦПД) на клетки (рисунок 5). Это действие выражается в повреждении монослоя зараженной культуры клеток и изменении их морфологии: клетки округляются, темнеют, теряют отростки, в них появляется зернистость. Эти изменения обозначают термином «дегенерация клеток». В дальнейшем происходит отслойка клеток от стекла – нарушение монослоя. Используют для индикации аденовирусов.

Индикацию вирусов, культивируемых в организме лабораторных животных, проводят по факту гибели животного. Используют для индикации вируса бешенства.

34. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Молекулярно-биологический: обнаружение специфических участков вирусной нуклеиновой кислоты с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Теоретически данный метод позволяет обнаружить участок одной молекулы вирусной ДНК или РНК в любом образце биологического материала. Принцип ПЦР: многократное образование (гибридизация) копий специфического участка нуклеиновой кислоты вируса с последующей их идентификацией методом электрофореза.

Определение вирусных антигенов (экспресс-диагностика): вирусные антигены определяют в крови и других биологических жидкостях с помощью серологических реакций, чаще это РИФ и ИФА (см. учебно-методическое пособие «Учение об инфекции и иммунитете. Основы иммунологии»).

Вирусологический: заражение исследуемым материалом биологической модели (куриный эмбрион, культура клеток, организм животного) с последующей индикацией, а затем идентификацией обнаруженных вирусов.

Для размножения вирусов в курином эмбрионе исследуемый материал вводят в аллантоисную или амниотическую полость (культивируют вирусы гриппа, эпидемического паротита и др.).

Для размножения вирусов в культуре клеток исследуемым материалом заражают живые клетки различного происхождения: эмбриональные, нормальных тканей, опухолевые (культивируют вирусы полиомиелита, аденовирусы и др.).

Для размножения вирусов в организме лабораторных животных используют белых мышей (культивируют вирусы бешенства, клещевого энцефалита).

Помимо диагностики вирусных инфекций, культивирование вирусов проводят с целью получения вакцинных и диагностических препаратов.

Вирусоскопический: обнаружение в исследуемом материале включений, образующихся в пораженных клетках при вирусной инфекции. Включения представляют собой скопления вирусов и продуктов реакции клетки на вирусную инфекцию. Включения могут располагаться в цитоплазме или в ядре клетки-хозяина. Чаще внутрицитоплазматические включения образуют РНКсодержащие вирусы (например, включения Бабеша-Негри при бешенстве). Внутриядерная локализация включений в большей степени характерна для ДНК-содержащих вирусов (например, включения при цитомегаловирусной инфекции). В мазках видны гигантские клетки с внутриядерными включениями вирусов, напоминающие «совиный глаз» (рисунок 4).

Серологический: определение противовирусных антител в сыворотке крови больного. Особенностью серологического метода диагностики вирусных инфекций является исследование парных проб сыворотки. Первую пробу сыворотки берут у больного в начале заболевания, а вторую – через 10-14 дней. О вирусной инфекции свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой. Диагностически значимой является сероконверсия для взрослых в 4 раза, а для детей – в 2 раза.

35. Вирусологический метод диагностики. Методы индикации и идентификации вирусов.

Индикацию (обнаружение) вирусов в материале от больного проводят различными способами. Они зависят от метода культивирования вируса:

• Если вирус способен размножаться в курином эмбрионе, то для его обнаружения используют реакцию гемагглютинации (РГА). Она основана на способности таких вирусов склеивать (агглютинировать) эритроциты с помощью фермента «гемагглютинина», расположенного в суперкапсиде вируса. В результате реакции in vitro наблюдается осадок эритроцитов в виде «перевернутого зонтика» – это положительный результат РГА. При отрицательной реакции – выпадает осадок эритроцитов с ровными краями. Используют для индикации вирусов гриппа.

• Индикацию вирусов, культивируемых в культуре клеток, можно проводить по их цитопатогенному действию (ЦПД) на клетки (рисунок 5). Это действие выражается в повреждении монослоя зараженной культуры клеток и изменении их морфологии: клетки округляются, темнеют, теряют отростки, в них появляется зернистость. Эти изменения обозначают термином «дегенерация клеток». В дальнейшем происходит отслойка клеток от стекла – нарушение монослоя. Используют для индикации аденовирусов.

• Индикацию вирусов, культивируемых в организме лабораторных животных, проводят по факту гибели животного. Используют для индикации вируса бешенства.

Методы идентификации вирусов

Идентификацию вирусов проводят по антигенным свойствам с помощью серологических реакций со специфическими диагностическими противовирусными сыворотками. Основными реакциями являются: реакция торможения гемагглютинации, реакция нейтрализации в культуре клеток или в организме животного, реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА).

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА): 2-компонентная, сложная серологическая реакция.

Компоненты реакции: исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг), типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат).

Индикатор реакции: 1% взвесь эритроцитов.

Постановка реакции: готовят разведения диагностических сывороток в лунках полистироловой пластины. К ним добавляют вируссодержащую жидкость и оставляют на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем в лунки вносят взвесь эритроцитов. Учет реакции проводят через 1-2 часа.

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу сыворотки. Вирусный гемагглютинин блокируется антителами сыворотки, поэтому агглютинация эритроцитов отсутствует. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с ровными краями, в виде «пуговицы».

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки. Вирусный гемагглютинин склеивает эритроциты. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с неровными краями в виде «перевернутого зонтика».

РТГА применяют для идентификации вирусов гриппа и других вирусов, имеющих в суперкапсидной оболочке фермент гемагглютинин.

Реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток: 2-компонентная, сложная серологическая реакция.

Компоненты реакции: исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг), типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат).

Индикатор реакции: культура клеток.

Постановка реакции: вируссодержащую жидкость смешивают в пробирках со специфическими диагностическими сыворотками. Оставляют на 1 час при комнатной температуре. Затем содержимым пробирок заражают культуры клеток во флаконах.

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу сыворотки. Происходит нейтрализация вируса антителами сыворотки и культура клеток остается нормальной, без изменений.

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки. Вирус оказывает цитопатогенное действие, что приводит к дегенерации культуры клеток.

РН в культуре клеток применяют для идентификации вирусов полиомиелита, аденовирусов и др.

РН можно также использовать для идентификации вирусов, культивируемых в организме лабораторных животных. Компоненты и постановка реакции такие же, как в РН в культуре клеток. Индикатор реакции: лабораторное животное (в частности, белые мыши).

Положительная реакция: тип вируса соответствует типу диагностической сыворотки, происходит его нейтрализация антителами сыворотки и животное остается здоровым.

Отрицательная реакция: тип вируса не соответствует типу сыворотки, животное погибает.

РН в организме животного используется для идентификации вирусов бешенства.

В таблице 2 представлены обобщенные данные о методах культивирования, индикации и идентификации вирусов.

36. Особенности противовирусного иммунитета.

• Интерфероны (гликопротеины) продуцируются клетками при вирусной инфекции. Являются первой, наиболее ранней линией защиты (через несколько часов после начала размножения вируса).

• Основными клетками, осуществляющими в организме противовирусный иммунологический надзор, являются ЦТЛ и NK-клетки. Они разрушают инфицированные вирусом клетки с помощью перфоринов и гранзимов.

Т-лимфоциты и интерфероны приводят организм к выздоровлению, но не формируют приобретенного иммунитета.

• Противовирусные антитела (секреторные IgA и сывороточные IgM и G) защищают только при внеклеточном расположении вирусов. Окружая вирионы, они препятствуют их адсорбции на клетке.

Гуморальное звено защиты формирует приобретенный (постинфекционный) иммунитет за счет клонов клеток памяти из В-лимфоцитов.

• Развитие вирусной инфекции всегда подавляет некоторые защитные механизмы (незавершенность фагоцитоза, подавление синтеза молекул MHC I класса на поверхности зараженных клеток, подавление активации комплемента по классическому и альтернативному пути и т.д.).

37. Интерфероны. Классификация. Механизм действия. Практическое применение.

Интерфероны – гликопротеины, которые вырабатываются многими клетками организма. Однако эта способность наиболее выражена у лейкоцитов, фибробластов и лимфоцитов. Интерфероны (ИФ) являются цитокинами, подавляющими размножение вирусов, определенных бактерий и некоторых раковых клеток.

По природе клеток, вырабатывающих ИФ, их делят на три группы:

α-ИФ (лейкоцитарный): обладает выраженным противовирусным действием;

β-ИФ (фибробластный): обладает противовирусным действием, а также регулирует работу лимфоцитов, макрофагов и дендритных клеток (иммуномодулирующее действие);

γ-ИФ (иммунный): продуцируется всеми Т-лимфоцитами, стимулирует активность Т- и В-лимфоцитов, фагоцитов, усиливает синтез молекул MHCI и MHCII и др. Таким образом, γ-ИФ усиливает активность всех звеньев иммунной системы.

Механизм противовирусного действия интерферонов. Интерфероны ингибируют внутриклеточную репликацию широкого спектра ДНК- и РНК-содержащих вирусов.

В инфицированной клетке синтезируется ИФ, выходит из нее, связывается с поверхностью здоровой клетки и индуцирует в ней синтез антивирусных белков. Если в эту клетку проникает вирус, то его репродукция подавляется этими белками. Один из них является ферментом рибонуклеазой, которая разрушает мРНК вируса. Второй фермент – протеинкиназа – блокирует синтез вирусных белков. Репродукция вируса становится невозможной.

Практическое использование интерферона для лечения и профилактики вирусных инфекций связано с использованием препаратов на основе генноинженерного рекомбинантного α2-ИФ. Его получают в культуре бактерий после встраивания в их геном гена человеческого α-ИФ. Рекомбинантный α2-ИФ эффективен для лечения хронических гепатитов В и С, герпетической и папилломавирусной инфекции.

38. Вирусы бактерий (бактериофаги). Вирулентные и умеренные бактериофаги.

Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой.

Бактериофаги (от греч. bacterion – бактерии, phagos – пожирающий) – вирусы бактерий, вызывающие их гибель.

Бактериофаги были открыты в 1917 г. канадским ученым Ф. Д'Эррелем. Исследователь выделил из испражнений больных дизентерией фильтрующийся агент, способный разрушать, лизировать дизентерийные бактерии. Последующие наблюдения показали, что бактериофаги встречаются повсеместно, где есть бактерии: в почве, сточных водах, кишечном тракте человека и животных, гнойном отделяемом и других субстратах. Поэтому в широком смысле слова их часто называют просто фагами.

В зависимости от формы и структурной организации фаги подразделяют на пять морфологических групп (классификация А.С. Тихоненко):

I. Фаги I типа – нитевидной формы.

2. Фаги II типа – имеют головку и рудимент отростка.

3. Фаги III типа – имеют головку с коротким отростком.

4. Фаги IV типа – имеют головку и длинный несокращающийся отросток.

5. V. Фаги V типа – имеют головку и длинный сокращающийся отросток.

Структура сложноустроенного фага:

• головка, в которой содержится нуклеиновая кислота;

• воротничковая часть;

• отросток, сверху покрытый сократительным чехлом. На конце отростка находятся базальная пластинка и нити прикрепления для адсорбции фага на бактериальной клетке.

Оболочечные структуры фага имеют белковую природу.

Вирулентные и умеренные бактериофаги. Фазы взаимодействия вирулентного бактериофага с клеткой. Практическое применение бактериофагов.

В зависимости от характера взаимодействия с бактериальной клеткой, различают вирулентные и умеренные бактериофаги.

Вирулентные фаги способны вызывать взрывную продуктивную инфекцию. Проникнув в бактериальные клетки, они размножаются и вызывают лизис бактерий. Умеренные фаги чаще вызывают интегративную вирусную инфекцию, которая может переходить в продуктивную.

Фазы взаимодействия сложноустроенного вирулентного бактериофага с клеткой:

• Адсорбция (отростковой частью фага) на клеточной стенке бактерий. В эту фазу рецепторы базальной пластинки и нитей прикрепления специфически взаимодействуют с определенными рецепторами клеточной стенки бактерий. На бактериях, лишенных клеточной стенки (L-формы, микоплазмы), фаги не адсорбируются.

• Проникновение нуклеиновой кислоты фага в клетку: происходит сокращение чехла отростка и растворение с помощью фагового лизоцима небольшого участка клеточной стенки бактерии. Затем ДНК из головки бактериофага через канал отростка инъецируется (впрыскивается) в цитоплазму клетки, при этом оболочка фага остается на поверхности бактериальной клетки.

• Синтез фаговых частиц (подобно синтезу вирусов в эукариотической клетке): происходит репликация нуклеиновой кислоты бактериофага с образованием множества копий, а на рибосомах бактериальной клетки – синтез фаговых белков головки и отростка.

• Композиция фаговых частиц: происходит сборка белковых оболочек и нуклеиновых кислот и формируются зрелые бактериофаги.

• Выход фагов из бактериальной клетки путем лизиса клетки изнутри. Он осуществляется за счет свободного лизоцима, выделяемого множеством фагов, что приводит к гибели бактерий в результате ее осмотического лизиса.

Репродукция вирулентного фага в популяции бактерий, выращенных в жидкой питательной среде (МПБ), сопровождается их лизисом и просветлением среды (рисунок 8а). В популяции чувствительных бактерий, выращенных сплошным газоном на плотной питательной среде (МПА), фаги образуют зоны очагового лизиса (рисунок 8б), которые называются «негативными колониями» или стерильными бляшками.

Умеренные фаги чаще взаимодействуют с клеткой по типу интегративной вирусной инфекции: ДНК фага интегрируется с ДНК клетки и называется профагом. Став частью хромосомы бактерии, профаг, при ее размножении, передается бактериальному потомству. Клетка, несущая профаг, называется лизогенной. Под влиянием различных факторов (УФ-света, некоторых химических веществ) связь профага с ДНК бактериальной клетки нарушается и профаг переходит в цитоплазму клетки, где размножается и ведет себя как вирулентный.

39. Практическое применение бактериофагов.

1. Для диагностики инфекционных заболеваний используют метод фаготипирования, когда с помощью известного набора фагов определяют фаговариант исследуемых бактерий. Метод основан на специфичности фагов, т.е. способности взаимодействовать только с бактериями, имеющими специфические рецепторы для адсорбции фага и лизиса этих бактерий. Фаготипирование используют для диагностики брюшного тифа, дизентерии, холеры, стафилококковых инфекций (рисунок 9).

Метод фаготипирования имеет важное эпидемиологическое значение, т.к. позволяет установить связи между источником инфекции и отдельными случаями заболевания. Выделение бактерий одного фаговарианта от разных больных указывает на общий источник их заражения.

2. Для лечения:

• стафилококковый бактериофаг (при гнойно-воспалительных заболеваниях, вызванных стафилококками);

• бактериофаг P.aeruginosa (при гнойно-воспалительных заболеваниях, вызванных синегнойной палочкой);

• клебсиеллезный бактериофаг (при заболеваниях, вызванных клебсиеллами).

Комбинированные многокомпонентные препараты бактериофагов:

• коли-протейный бактериофаг (для лечения эшерихизов и дисбактериозов, вызванных бактериями рода Proteus);

• пиобактериофаг (для лечения стафилококковой, стрептококковой, клебсиеллезной, протейной, синегнойной инфекции и эшерихиозов);

• интести-бактериофаг (для лечения бактериальной дизентерии, сальмонеллезов, эшерихиозов, а также протейной, стафилококковой, энтерококковой и синегнойной инфекций).

Бактериофаги применяют местно путем аппликации на раневую или ожоговую поверхность, введением в полости (брюшную, плевральную, мочевой пузырь), через рот, а также ректально. Соответственно способу применения препараты бактериофагов выпускают в различных лекарственных формах (жидкая форма, таблетки, мази, свечи, аэрозоли). Перед назначением бактериофага необходимо поставить пробу на чувствительность к нему выделенной культуры микроорганизмов.

III. Для профилактики брюшного тифа и дизентерии у людей, контактировавших с больным, используют брюшнотифозный и поливалентный дизентерийный бактериофаги.

40. Организация генетического материала бактериальной клетки. Факторы внехромосомной наследственности (плазмиды, транспозоны, инсерционные элементы).

Генетический материал бактериальной клетки представлен хромосомной ДНК с гаплоидным набором генов. Хромосомная ДНК находится в суперспирализованной форме в виде кольца.

В бактериях могут присутствовать внехромосомные молекулы ДНК: плазмиды, транспозоны, вставочные последовательности.

Хромосомный и внехромосомный генетический материал свободно располагается в цитоплазме.

Факторы внехромосомной наследственности

Факторы внехромосомной наследственности (плазмиды, транспозоны, вставочные последовательности) состоят из молекул ДНК, не являются жизненно важными для бактерий, но придают им новые свойства.

Плазмиды – кольцевидные молекулы ДНК, способные к саморепликации и несущие от 40 до 50 генов. Они находятся в автономном состоянии в цитоплазме бактерий и способны к самопереносу из одной клетки в другую при конъюгации. Плазмиды кодируют свойства, дающие бактерии преимущества при попадании в неблагоприятные условия существования.

Плазмиды подразделяют на различные категории в зависимости от свойств, которые они кодируют у бактерий:

Подвижные генетические элементы

Транспозоны – подвижные участки ДНК, которые способны перемещаться внутри бактериальной хромосомы или между ДНК бактерий, плазмид и бактериофагов («прыгающие гены»). Помимо генов, кодирующих их перемещение по ДНК, транспозоны могут содержать структурные гены, обеспечивающие бактерию новыми свойствами (устойчивость к антибиотикам, токсинопродукция и др).

Вставочные последовательности или инсерционные элементы – простейший тип генетических элементов, мигрирующих между хромосомами, внутри хромосомы, между хромосомой и плазмидами. Содержат гены, необходимые для их перемещения, новых свойств не кодируют.

Подвижные генетические элементы могут:

• распространять новые гены в популяции бактерий;

• координировать взаимодействие плазмид с хромосомой;

• вызывать изменения генов (мутацию, инактивацию) в местах их внедрения в генетический материал.

Таким образом, внехромосомные молекулы ДНК бактериальной клетки способствуют разнообразным изменениям бактериального генома, появлению новых свойств и эволюционным изменениям микробной популяции в целом.

41. Трансформация у бактерий.

Трансформация у бактерий – форма генетической изменчивости, при которой бактерия-реципиент поглощает из внешней среды трофическим путем фрагменты ДНК погибшей бактерии-донора. Это приводит к образованию рекомбинантных бактерий, обладающих некоторыми свойствами донорских клеток

Впервые феномен трансформации был установлен Ф. Гриффитсом в 1928 г. на модели бескапсульного и капсульного пневмококков (рисунок 11). Следует напомнить, что капсула пневмококков – мощный фактор патогенности, способствующий возникновению септического течения инфекции и гибели лабораторного животного. Для проведения опыта в качестве индикатора использовали 3 белые мыши. Первую мышь заражали живыми, бескапсульными невирулентными пневмококками. Второй мыши вводили убитую культуру капсульных вирулентных пневмококков; третьей мыши – смесь живых бескапсульных пневмококков и убитых капсульных пневмококков.

В результате из всех мышей, взятых в опыт, погибала третья мышь, т.к. живые бескапсульные пневмококки поглощали фрагменты ДНК убитых капсульных, приобретали ген, кодирующий синтез капсулы, превращались в вирулентные пневмококки и убивали мышь.

42. Трансдукция и фаговая (лизогенная) конверсия.

Трансдукция – перенос небольшого фрагмента хромосомной ДНК от клетки-донора к клетке-реципиенту с помощью умеренного бактериофага (рисунок 13). В результате трансдукции бактерия-реципиент приобретает новые фенотипические признаки (ферментативные свойства, устойчивость к антибиотикам и др.). При выходе бактериофага из клетки фрагмент донорской трансдуцированной ДНК остается в хромосоме клетки-реципиента, следовательно, сохраняются и новые фенотипические признаки. Таким образом, при трансдукции умеренный бактериофаг выполняет только транспортную функцию.

Фаговая конверсия (от лат conversion – превращение) – получение бактерией новых свойств в результате использования генов профага, интегрированного с хромосомой клетки. Например, ДНК умеренного дифтерийного фага содержит ген tox, который кодирует синтез дифтерийного экзотоксина. Если ДНК такого умеренного фага интегрирует с ДНК дифтерийной палочки, то она превращается в токсигенную, т.е. продуцирующую дифтерийный экзотоксин. При выходе из клетки умеренного фага дифтерийные бактерии утрачивают ген tox и теряют способность к продукции экзотоксина. Лизогенная конверсия выявлена также у возбудителей ботулизма, холеры и др.

43. Конъюгация у бактерий.

Конъюгация у бактерий – передача генетического (хромосомного и нехромосомного) материала от бактерии-донора к бактерии-реципиенту при их непосредственном контакте (рисунок 12). Необходимым условием для конъюгации является наличие у бактерии-донора F-плазмиды, которая контролирует синтез половых pili на поверхности клеток-доноров.

Процесс конъюгации между бактерией-донором (F⁺) и бактериейреципиентом (F^-) имеет следующие стадии:

• установление контакта между донором и реципиентом с помощью половых pili;

• прохождение генетического материала через канал половой pili от донора к реципиенту; рекомбинация между донорской и реципиентной ДНК.

44. Практическое значение генетики и изменчивости микроорганизмов. Использование генной инженерии в медицине.

• Получение живых вакцин. В основе лежит принцип аттенуации, предложенный Л. Пастером. Аттенуация – ослабление вирулентности микробов под действием физических, химических или биологических факторов с сохранением их иммуногенных свойств. Например, вакцинный штамм туберкулезных бактерий (БЦЖ) был получен А.Ш. Кальметом и Ж-М.К. Жереном путем длительного (13 лет) выращивания возбудителя туберкулеза на питательной среде с желчью.

• Получение генно-инженерных вакцин (рекомбинантная дрожжевая вакцина против вирусного гепатита В из протективного HBs-антигена вируса).

• Разработка и внедрение в практику молекулярно-биологических методов диагностики инфекционных заболеваний, например, ПЦР.

• Получение штаммов бактерий и микроскопических грибов с высокой продукцией антибиотиков.

• Получение инсулина, гормонов, интерферона и других биологических веществ в бактериальных клетках с помощью генно-инженерных методов.

45. Антибиотики. Классификация антибиотиков по механизму антимикробного действия.

Антибиотики – это химические вещества биологического происхождения, а также их полусинтетические и синтетические аналоги, обладающие бактериостатическим или бактерицидным действием.

Антибиотики, обладающие бактериостатическим действием, подавляют рост и размножение микроорганизмов. Антибиотики, обладающие бактерицидным действием, вызывают гибель микроорганизмов.

Антибиотики были открыты английским ученым А. Флемингом и американским ученым С. Ваксманом. В 1929 г. А. Флеминг установил, что фильтрат бульонной культуры плесневого гриба Penicillium notatum содержит вещество (пенициллин), угнетающее рост стафилококков. Однако, в чистом виде препарат был получен лишь в 1940 г., после чего было налажено его промышленное производство. С. Ваксман открыл в 1944 г. стрептомицин (его продуцентом является Actinomyces griseus) и предложил впервые термин «антибиотик» (от греч. anti, bios – против жизни). В настоящее время существует более 6 тысяч природных антибиотиков и созданы многие десятки тысяч полусинтетических и синтетических препаратов.

Антибиотики могут вырабатывать клетки животного (лизоцим) и растительного происхождения (фитонциды чеснока и лука), однако широкого производственного применения в медицине они не имеют.

Основными источниками получения природных и полусинтетических антибиотиков являются:

• плесневые грибы родов Penicillium и Cephalosporium – синтезируют беталактамные антибиотики (пенициллины и цефалоспорины);

• актиномицеты (ветвящиеся бактерии) – синтезируют большинство (80%) природных антибиотиков, в том числе стрептомицин, ванкомицин, нистатин и др.;

• бактерии (бациллы, псевдомонады и др.).

Группы антибиотиков по химической структуре:

бета-лактамные (пенициллины, цефалоспорины, монобактамы, карбапенемы); макролиды; производные диоксиаминофенилпропана (левомицетин); тетрациклины; аминогликозиды; спектиномицин; полимиксины; гликопептиды; липопептиды; ансамицины (рифампицин); полиеновые антибиотики; антибиотики других химических групп.

Синтетические противомикробные химиотерапевтические препараты.

Методами химического синтеза созданы вещества, которые не встречаются в живой природе, но похожи на антибиотики по механизму и спектру действия.

К наиболее значимым группам относят:

1. сульфаниламиды (производные сульфаниловой кислоты);

2. хинолоны;

3. нитрофураны;

4. 8-оксихинолины;

5. производные хиноксалина;

6. 5-нитроимидазолы

7. оксазолидиноны.

В бактериальной клетке есть четыре основные области, которые отличаются от клеток человека и определяют клиническую эффективность действия антибактериальных препаратов: клеточная стенка, рибосомы, нуклеиновые кислоты и цитоплазматическая мембрана.

По механизму действия антибиотики подразделяют:

1. Бактерицидные:

   • нарушают синтез клеточной стенки или ее компонентов (бетa-лактамы, фосфомицин, ристомицин);

   • нарушают морфо-функциональную организацию цитоплазматической мембраны (полимиксины, полиены);

   • нарушают репликацию ДНК (фторхинолоны).

2. Бактериостатические:

   • ингибируют синтез белка на уровне РНК-полимеразы (рифампицины);

   • ингибируют синтез белка на уровне рибосом (тетрациклины, левомицетин, фузидин, макролиды и др.).

Антибиотики могут быть узкого спектра (действуют только на грамотрицательные бактерии или на некоторые виды грамположительных бактерий), а также широкого спектра (действуют на грамположительные и грамотрицательные бактерии).

Существуют специальные группы антибиотиков: противотуберкулезные, противогрибковые и др.

Нерациональное применение антимикробных лекарственных средств для лечения инфекционных заболеваний нередко приводит к формированию лекарственной устойчивости – антибиотикорезистентности. Бактерии следует считать резистентными, если они не обезвреживаются оптимальными терапевтическими дозами препарата, вводимого в организм. Резистентность может быть природной и приобретенной. Приобретенная лекарственная резистентность связана с адаптацией микроорганизмов к условиям окружающей среды. Проблема формирования и распространения лекарственной резистентности микробов особенно значима для внутрибольничных инфекций, вызываемых госпитальными микробами с множественной лекарственной устойчивостью к нескольким антибиотикам (так называемая полирезистентность).

46. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Осложнения и последствия антибиотикотерапии.

Осложнения и последствия антибиотикотерапии.

• Метод серийных разведений. В пробирках готовят двукратные разведения антибиотиков, а затем к каждому разведению добавляют взвесь исследуемых бактерий. После термостатирования в течение суток при 37⁰С определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика (МПК), т.е самую низкую концентрацию препарата, которая полностью задерживает рост бактерий (рисунок 14).

• Диско-диффузионный метод. Производят посев выделенной от больного культуры бактерий сплошным газоном на пластинчатый МПА. Затем на посев помещают стандартные бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками, и термостатируют при 37⁰С 24 часа.

Учет результатов проводят по диаметру зон отсутствия роста бактерий вокруг дисков (рисунок 15). Размеры зон подавления роста сравнивают со стандартами и определяют антибиотик, который необходим для лечения.

Осложнения и последствия антибиотикотерапии

Аллергические реакции (крапивница, анафилактический шок и др.). Могут вызывать большинство антибиотиков.

Иммунотоксическое действие на клеточный и гуморальный иммунитет, а также фагоцитоз (тетрациклины, левомицетин и др.).

Токсические реакции в связи с органотропным действием антибиотиков при длительном лечении: поражение печени (тетрациклин, рифампицин), почек (стрептомицин, полимиксин), костного мозга (левомицетин) и др.

Эндотоксический шок. Развивается в тех случаях, когда под влиянием антибиотика происходит массовое разрушение грамотрицательных бактерий и поступление в кровь их эндотоксинов.

Дисбактериозы. Развиваются после длительного применения антибиотиков, подавляющих резидентную микрофлору организма.

Формирование антибиотикоустойчивых микробов.

2. раздел

47. Определение понятия «инфекция». Стадии инфекционного процесса.

Инфекция (infectio (лат.) – заражение) – процесс взаимодействия макро- и микроорганизма, при котором микроб обитает внутри макроорганизма или на его поверхности. Крайним выражением этого взаимодействия является инфекционное заболевание, которое характеризуется нарушением функций макроорганизма.

Характеристика инфекционного заболевания.

Инфекционным болезням свойственна цикличность с последовательной сменой периодов:

1. Инкубационный (скрытый) период – от момента внедрения возбудителя в организм до появления первых симптомов заболевания.

2. Продромальный период или период предвестников заболевания. В этот период у больного отмечается общий дискомфорт, быстрая утомляемость, головная боль, озноб, повышение температуры, т.е. симптомы, общие для всех инфекционных заболеваний.

3. Период разгара (период собственно болезни) – характеризуется появлением специфических для данной инфекции симптомов. Этот период может закончиться летально, или перейти в следующий период.

4. Период реконвалесценции (выздоровления).

Выздоровление бывает клиническим (отсутствие симптомов), морфологическим (восстановление морфологических и физиологических свойств поврежденных тканей и органов) и микробиологическим (освобождение организма от микроба). У некоторых лиц не наступает микробиологическое выздоровление и формируется микробоносительство. У таких людей может возникнуть рецидив, т.е. повторное проявление признаков заболевания, за счѐт оставшихся в организме возбудителей (при брюшном тифе, сыпном тифе и др.). От рецидива необходимо отличать реинфекцию – повторное проявление клинических признаков заболевания в результате повторного экзогенного заражения организма возбудителем того же вида.

Формы инфекционного процесса по степени проявления:

1. Манифестированные инфекции (manifestus (лат.) – явный) – сопровождаются клинической симптоматикой: типичные – все клинические симптомы присутствуют и выражены с достаточной полнотой;

   • атипичные: стёртая форма – все симптомы заболевания присутствуют, но выражены недостаточно ярко, либо отсутствует полный набор симптомов;

медленные инфекции – характеризуются следующими особенностями:

длительный инкубационный и продромальный период, длительное клиническое течение;

системное поражение органов, чаще ЦНС; летальный исход.

Примеры медленных инфекций: подострый склерозирующий панэнцефалит, ВИЧ-инфекция (СПИД), губчатая энцефалопатия.

2. Бессимптомные инфекции: латентная (инаппарантная) инфекция: инфекционный процесс проходит все стадии на подпороговом уровне, клинические проявления заболевания отсутствуют. Однако происходит размножение возбудителя с формированием защитных иммунологических реакций со стороны макроорганизма. В форме инаппарантной инфекции могут протекать герпетическая инфекция, полиомиелит и др;

   • микробоносительство: может сформироваться в результате перенесѐнной манифестированной или латентной инфекции. Для этой формы характерно длительное пребывание микробов в макроорганизме с их размножением и выделением во внешнюю среду без развития клинических проявлений. Микробоносители представляют значительную эпидемическую опасность, т.к. являются источниками инфекции при некоторых инфекционных заболеваниях (брюшной тиф, менингококковая инфекция, вирусный гепатит В и др.).

Для всех бессимптомных инфекций характерна персистенция (persistentia (лат.) – упорство, постоянство) – длительное пребывание микроба в организме.

Классификация инфекционных заболеваний по длительности течения:

1. Острая инфекция длится непродолжительное время (дни, недели): грипп, дифтерия, столбняк;

2. Хроническая инфекция протекает в течение нескольких месяцев, лет: туберкулѐз, сифилис, лепра.

Хронические инфекции протекают в виде ремиссий (отсутствие клинических симптомов) и рецидивов (обострение патологического процесса, появление симптомов), которые сменяют друг друга.

Типы инфекционного процесса по основным механизмам:

1. Генерализованный механизм обусловлен попаданием микроорганизмов в кровеносное русло. Эти микроорганизмы, как правило, обладают высокой скоростью размножения и выраженными инвазивными свойствами.

Различают следующие формы генерализованной инфекции: бактериемия – микроорганизмы циркулируют в кровотоке, но не размножаются в нем (возбудители брюшного и сыпного тифов). Бактериемия может сопровождаться клиническими проявлениями или протекать бессимптомно. Существует физиологическая, кратковременная бактериемия после приема пищи (алиментарная), интенсивных физических нагрузок, переохлаждения и перегревания. Протекает бессимптомно;

• вирусемия – пребывание вирусов в крови с последующим попаданием в различные органы и ткани;

• сепсис (септицемия) – длительное пребывание и размножение возбудителя (бактерии, грибы) в кровеносном русле с развитием характерной клинической и патологоанатомической картины (стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, дрожжеподобные грибы рода Candida);

• септикопиемия – состояние, при котором возбудитель не только размножается в кровотоке, но и попадает в различные органы и ткани, формируя вторичные очаги инфекции.

2. Интоксикационный механизм обусловлен продукцией микроорганизмами экзотоксинов (возбудители столбняка, ботулизма, дифтерии, холеры);

3. Смешанный механизм связан с размножением возбудителя в кровеносном русле и выделением экзотоксинов.

48. Типы инфекционного процесса по степени проявления.

3. Манифестированные инфекции (manifestus (лат.) – явный) – сопровождаются клинической симптоматикой: типичные – все клинические симптомы присутствуют и выражены с достаточной полнотой;

   • атипичные: стёртая форма – все симптомы заболевания присутствуют, но выражены недостаточно ярко, либо отсутствует полный набор симптомов;

медленные инфекции – характеризуются следующими особенностями:

длительный инкубационный и продромальный период, длительное клиническое течение;

системное поражение органов, чаще ЦНС; летальный исход.

Примеры медленных инфекций: подострый склерозирующий панэнцефалит, ВИЧ-инфекция (СПИД), губчатая энцефалопатия.

4. Бессимптомные инфекции: латентная (инаппарантная) инфекция: инфекционный процесс проходит все стадии на подпороговом уровне, клинические проявления заболевания отсутствуют. Однако происходит размножение возбудителя с формированием защитных иммунологических реакций со стороны макроорганизма. В форме инаппарантной инфекции могут протекать герпетическая инфекция, полиомиелит и др;

   • микробоносительство: может сформироваться в результате перенесѐнной манифестированной или латентной инфекции. Для этой формы характерно длительное пребывание микробов в макроорганизме с их размножением и выделением во внешнюю среду без развития клинических проявлений. Микробоносители представляют значительную эпидемическую опасность, т.к. являются источниками инфекции при некоторых инфекционных заболеваниях (брюшной тиф, менингококковая инфекция, вирусный гепатит В и др.).

Для всех бессимптомных инфекций характерна персистенция (persistentia (лат.) – упорство, постоянство) – длительное пребывание микроба в организме.

49. Типы инфекционного процесса по основным механизмам.

Типы инфекционного процесса по основным механизмам:

1. Генерализованный механизм обусловлен попаданием микроорганизмов в кровеносное русло. Эти микроорганизмы, как правило, обладают высокой скоростью размножения и выраженными инвазивными свойствами.

Различают следующие формы генерализованной инфекции: бактериемия – микроорганизмы циркулируют в кровотоке, но не размножаются в нем (возбудители брюшного и сыпного тифов). Бактериемия может сопровождаться клиническими проявлениями или протекать бессимптомно. Существует физиологическая, кратковременная бактериемия после приема пищи (алиментарная), интенсивных физических нагрузок, переохлаждения и перегревания. Протекает бессимптомно;

• вирусемия – пребывание вирусов в крови с последующим попаданием в различные органы и ткани;

• сепсис (септицемия) – длительное пребывание и размножение возбудителя (бактерии, грибы) в кровеносном русле с развитием характерной клинической и патологоанатомической картины (стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, дрожжеподобные грибы рода Candida);

• септикопиемия – состояние, при котором возбудитель не только размножается в кровотоке, но и попадает в различные органы и ткани, формируя вторичные очаги инфекции.

2. Интоксикационный механизм обусловлен продукцией микроорганизмами экзотоксинов (возбудители столбняка, ботулизма, дифтерии, холеры);

3. Смешанный механизм связан с размножением возбудителя в кровеносном русле и выделением экзотоксинов.

50. Патогенность и вирулентность бактерий. Составные, определяющие вирулентность. Определение понятий облигатно- и условно-патогенных микробов.

Патогенность (болезнетворность) – потенциальная способность микроба вызывать заболевание при взаимодействии с макроорганизмом. Видовой, генетически детерминированный признак.

Вирулентность (virulentus (лат.) – ядовитый) – мера, степень патогенности; количество микробов, необходимое для развития заболевания. Штаммовый признак. По этому признаку штаммы микробов могут быть высоко-, умеренно- или слабовирулентными.

Составные, определяющие вирулентность бактерий: адгезивность – способность микробов прикрепляться к клеткам макроорганизма с помощью различных поверхностных структур.

инвазивность – способность микробов поникать через тканевые и гуморальные барьеры и распространяться в макроорганизме.

Инвазивность обусловлена:

высокой скоростью размножения; ферментами инвазии: гиалуронидаза, коллагеназа и др.; наличием капсулы.

токсинопродукция – образование бактериями токсических веществ (экзотоксинов и эндотоксинов), повреждающих клетки и ткани организма человека.

Классификация белковых бактериальных токсинов по механизму действия:

повреждающие мембраны клеток (α-токсин C.perfringens); ингибиторы синтеза белка (гистотоксин C.diphtheriae);

активаторы клеточного метаболизма (экзотоксин-холероген

V.cholerae);

протеазы – функциональные блокаторы (ботулиновый токсин); суперантигены – активаторы иммунного ответа (энтеротоксин и эксфо-

лиатин S.aureus).

Патогенность бактерий контролируется группой генов, которые чаще располагаются в хромосомах, реже – в плазмидах (факторах внехромосомной наследственности). Эти группы генов называют «островами патогенности». Они отвечают за синтез адгезинов, инвазинов, различных токсинов и факторов множественной устойчивости к антибиотикам.

Облигатно-патогенные – это микроорганизмы, попадание которых в организм в определенной дозе является необходимым и достаточным условием для возникновения инфекционного заболевания (например, Y.pestis, S.typhi).

Условно-патогенные (микробы-оппортунисты) (opportunity (англ.) – использовать возможность) – это микроорганизмы, попадание которых в организм является необходимым, но недостаточным условием для возникновения заболевания. К условно-патогенным микроорганизмам относят представителей микробиоты человека (стафилококки, энтерококки, эшерихии, клебсиеллы и др.). Они вызывают оппортунистические инфекции, как правило, на фоне снижения резистентности организма и увеличения их количества в местах естественного обитания в макроорганизме.

51. Факторы патогенности микробов. Ферменты инвазии.

Факторы патогенности микробов – это определенные структуры и биологически активные вещества, обусловливающие способность микроорганизма вызывать инфекционное заболевание.

К факторам патогенности микробов относятся:

капсула (защищает микроб от фагоцитоза и действия антител); ферменты инвазии; токсины;

перекрестно реагирующие антигены (общие для клеток микроорга-

низма и тканей макроорганизма).

Ферменты инвазии:

• гиалуронидаза – разрушает гиалуроновую кислоту соединительной ткани,

что увеличивает еѐ проницаемость и способствует распространению микробов в организме (стафилококки, стрептококки);

коллагенеза – разрушает коллаген мышечных волокон (C.perfringens); нейраминидаза – разрушает слизистый барьер, покрывающий эпителий;

IgА-протеаза – разрушает секреторные иммуноглобулины А (IgА) и позволяет микроорганизмам прикрепляться к слизистым оболочкам

(N.gonorrhoeae, S.pneumoniae); фибринолизин – разрушает фибрин, в том числе в тромбированных сосудах, благодаря чему микробы проникают в кровь (стрептококки, стафилококки);

• плазмокоагулаза – свѐртывает альбумины плазмы крови, создавая вокруг

микробов оболочку из белков макроорганизма («ложная капсула»), что защищает микробы от действия фагоцитов и антител (S.aureus, Y.pestis);

• лецитиназа – разрушает липиды мембран клеток макроорганизма (S.aureus, C.perfringens);

• ДНК-аза – вызывает разрушение ДНК ядер и митохондрий клеток (S.aureus,

C.perfringens);

• РНК-аза – разрушает рибосомальную РНК (S.aureus).

52. Сравнительная характеристика экзо- и эндотоксинов.

Токсины:

53. Иммунитет. Определение. Виды противоинфекционного иммунитета по происхождению.

Иммунитет (immunitas (лат.) – освобождение, избавление) – это способ защиты макроорганизма от генетически чужеродных организмов и веществ. Частным случаем является противоинфекционный иммунитет (табл. 1).

54. Основные механизмы противоинфекционного иммунитета.

Иммунитет

Врожденный Адаптивный физиологический клеточный

клеточный гуморальный

гуморальный

1. Физиологический (врожденный) механизм обусловлен следующими факторами: выделением микробов из организма при кашле, чихании, с мочой, испражнениями, секретами потовых и сальных желѐз;

• механическими барьерами (кожа, слизистые оболочки) на пути проникновения микробов в организм;

• бактерицидными свойствами кожных покровов и желудка за счет кислой реакции среды;

• колонизационной резистентностью кожи и слизистых оболочек открытых полостей организма за счѐт резидентной микробиоты;

барьерными функциями лимфатических узлов; лихорадкой, воспалением – как защитными реакциями.

2. Клеточный (врожденный) механизм обусловлен действием естественных киллеров (NК-клетки, natural killer (англ.)) и фагоцитов. NК-клетки составляют около 10% всех лимфоцитов крови. Это крупные лимфоциты, содержащие много гранул белков перфоринов и гранзимов. Мишенью для NК-клеток является любая клетка организма, инфицированная бактериями, вирусами, простейшими и утратившая характерные для организма маркеры «своего» – молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНСI). В этих случаях NКклетка осуществляет так называемый контактный цитолиз клетки-мишени, выбрасывая из гранул активные молекулы перфоринов и гранзимов. Перфорины образуют поры в мембране клетки-мишени, а гранзимы вызывают ее апоптоз.

Клеточный (адаптивный) механизм обусловлен действием цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (см. занятие №11).

2. Гуморальный механизм подразделяют на:

специфический (адаптивный) – выработка антител (см. занятие №10); неспецифический (врожденный) – обусловлен рядом факторов иммуни-

тета, присутствующих в сыворотке крови.

55. Гуморальные неспецифические факторы резистентности.

Копмлемент.

Дефензины – пептиды, создающие поры в оболочке бактерий. Продуцируются нейтрофилами и эпителиальными клетками ЖКТ и дыхательных путей.

Лизоцим синтезируется лейкоцитами и содержится в слезной жидкости, слюне, крови, грудном молоке и др. Представляет собой фермент мурамидазу, который разрушает пептидогликан (муреин) клеточной стенки бактерий, что приводит к их лизису. Наибольшую активность лизоцим проявляет в отношении грамположительных бактерий, обладает также противогрибковой активностью.

Трансферрин относится к β-глобулинам сыворотки крови. Благодаря его способности связывать железо, попавшие в кровь микробы оказываются в условиях пониженного содержания железа, необходимого для их роста и жизнедеятельности.

Белки острой фазы воспаления:

С-реактивный белок – вырабатывается в печени в ответ на повреждение тканей и клеток, активирует комплемент, стимулирует фагоцитоз, является индикатором воспаления;

маннозосвязывающий белок – активирует комплемент; ЛПС-связывающий белок – активирует макрофаги.

Интерфероны – гликопротеины, которые могут быть синтезированы любыми клетками организма (в большей степени – лейкоцитами) в ответ на внедрение вирусов. Более подробно интерфероны будут рассмотрены в разделе

«Введение в вирусологию. Бактериофаги. Генетика и изменчивость бактерий».

56. Фагоцитоз. Стадии фагоцитоза. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.

В 1883 г. И.И. Мечников впервые обнаружил способность некоторых клеток макроорганизма поглощать, переваривать и очищать организм от инородных тел, в том числе микробов и продуктов распада клеток. Это явление было названо «фагоцитозом», а клетки – «фагоцитами». В процессе фагоцитоза участвуют гранулоциты крови (в основном, нейтрофилы), тканевые макрофаги, эпидермоциты, эпителиоидные клетки и некоторые другие.

Стадии фагоцитоза:

1. Хемотаксис – приближение фагоцита к микробам;

2. Адгезия микробов на фагоците;

3. Поглощение фагоцитом микробов. Внутри фагоцита микробы погибают под действием активных форм кислорода (О₂^-, Н₂О₂), а также кислороднезависимых факторов (лизоцим, катионные белки и др.);

4. Внутриклеточное переваривание убитых микроорганизмов с помощью ферментов лизосом.

Возможны два основных исхода фагоцитоза:

• завершенный – когда микробы внутри фагоцита погибают и полностью перевариваются;

• незавершенный – при котором микробы не погибают, а размножаются в

фагоцитах (при туберкулезе, гонорее, менингококковой инфекции др.).

57. Комплемент как защитная система, пути активации комплемента.

Комплемент (complement (лат.) – дополнение) – комплекс сывороточных белков, которые последовательно активируются и вызывают лизис бактерий (бактериолиз) и других чужеродных клеток (цитолиз).

Функции комплемента: лизис бактерий и других чужеродных клеток, усиление фагоцитоза, участие в аллергических реакциях немедленного типа.

Комплемент (С) состоит из 9 белковых компонентов (фракций) – от С₁ до С₉. Кроме того, первый компонент (С₁) состоит из трѐх подфракций.

Все компоненты комплемента можно условно разделить на три блока:

I блок – распознающий (С₁ с подфракциями); II блок – активирующий (С₂ – С₄);

III блок – мембраноатакующий (С₅ – С₉).

При появлении в организме микробов или их продуктов запускается активация комплемента по типу каскадной реакции.

Процесс активации и самосборки системы комплемента может запускаться тремя путями, получившими названия классический, лектиновый и альтернативный (рис.1) и всегда заканчивается образованием мембраноатакующего комплекса.

Классический путь активации комплемента. В нем участвуют все компоненты комплемента. Инициатором активации классического пути является иммунный комплекс «антиген + антитело». Мембраноатакующий блок образует в мембране клетки-мишени многочисленные поры. Это приводит к выходу содержимого клетки и ее гибели.

Лектиновый путь активации комплемента запускается поверхностными полисахаридами бактерий и грибов, содержащими маннозу. Манноза распознается циркулирующим в крови белком, который называется маннозосвязывающий лектин. Этот белок активирует С₄-С₂ фракции комплемента. Далее активация совпадает с классическим путем.

Альтернативный путь активации комплемента в отличие от классического пути активируется не иммунным комплексом, а отдельными компонентами микробных клеток. В нем не участвуют фракции С₁, С₄ и С₂. Их функции выполняют сывороточные белки: факторы В, D и пропердин (Р). Каскадная цепная реакция при альтернативном пути начинается с взаимодействия микробного антигена (например, липополисахарида) с факторами В, D и Р, с последующей активацией компонента С₃. В дальнейшем все этапы активации комплемента осуществляются в той же последовательности, как при классическом пути.

Н а ранних этапах инфекции, когда нет еще комплексов Аг+Ат, лизис бактерий осуществляется при активации комплемента лектиновым и альтернативным путѐм. По мере накопления антител и образования иммунных комплексов большее значение приобретает классический путь активации.

58. Антигены, их признаки, классификация.

Антигены – это генетически чужеродные вещества, которые вызывают в организме иммунный ответ, направленный на их устранение: образование антител и активацию лимфоцитов. Антигены способны специфически взаимодействовать с антителами и активированными лимфоцитами.

Антиген состоит из 2 частей: высокомолекулярного носителя – шлеппера (schlepper (англ.) – тягач) и низкомолекулярных антигенных детерминант (эпитопов). Носитель чаще является белком, а детерминантами могут быть простые химические группировки (кислотные радикалы, дипептиды и др.).

Признаки антигенов:

1. Иммуногенность – потенциальная способность антигена вызывать иммунный ответ в организме.

Иммуногенность определяется:

• степенью чужеродности антигена по отношению к макроорганизму;

• молекулярной массой и химической природой носителя (шлеппера). Наиболее выраженной иммуногенностью обладают белки.

1. Антигенность – способность антигена специфически активировать компоненты иммунной системы (антитела, Т-лимфоциты) и специфически взаимодействовать с ними.

2. Специфичность – определяется только эпитопами антигена. Один антиген может иметь несколько эпитопов.

Классификация антигенов по иммунологической активности:

полноценные антигены обладают иммуногенностью и антигенностью. По химической природе это белки или комплексы белков с липидами, полисахаридами, нуклеиновыми кислотами.

неполноценные антигены (гаптены) не обладают иммуногенностью и самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но могут взаимодействовать с антителами или активированными лимфоцитами. При соединении с каким-либо белком, присутствующим в организме, гаптены становятся полноценными антигенами и вызывают иммунный ответ в организме. Причем, антитела, образовавшиеся к комплексу «белок + гаптен», реагируют не только с этим полноценным антигеном, но и со свободным гаптеном, не соединенным с белком. Примеры гаптенов: липиды, нуклеиновые кислоты, антибиотики и др.

59. Антигенная структура бактерий, ее диагностическое значение. Классификация антигенов бактерий по функциональному значению.

Антигенная структура бактерий и еѐ диагностическое значение.

• О-антиген – соматический, связан с клеточной стенкой. Его основу составляет липополисахарид, термостабильный. У грамотрицательных бактерий О-антиген является эндотоксином.

• Н-антиген – жгутиковый, по химической природе белок, термолабильный.

• К-антигены – капсульные (у капсульных бактерий) и оболочечные (у грамотрицательных бактерий). Эти антигены располагаются на поверхности клеточной стенки. По химической природе чаще полисахариды, реже полипептиды с разной степенью термостабильности. Экзотоксин – белок.

Диагностическое значение антигенной структуры бактерий: для идентификации возбудителей по антигенным свойствам в серологических реакциях.

Антигены бактерий по функциональному значению:

1. Протективные антигены – первыми распознаются иммунной системой,

т.к. обладают высокой иммуногенностью. Благодаря этому развивается полноценный иммунный ответ, защищающий организм от микроба в целом. Они различаются по химической природе и локализации в микробной клетке. Благодаря обнаружению и изучению протективных антигенов у патогенных микроорганизмов создаются высокоэффективные вакцины, содержащие эти антигены и формирующие прочный искусственный иммунитет.

2. Перекрестно реагирующие антигены – имеют общие эпитопы для клеток микроорганизма и тканей макроорганизма. Возбудитель дизентерии имеет перекрестные антигены с тканью кишечника, стрептококки – с тканью сердечной мышцы, почек и др. На эти антигены не вырабатываются антитела, не формируется иммунитет, поэтому они являются факторами патогенности возбудителей инфекционных заболеваний.

Положительная роль перекрестно реагирующих антигенов проявляется в возможности формирования симбионтной микробиоты организма человека из непатогенных и условно-патогенных микробов, которые имеют эти антигены.

60. Иммуноглобулины, их свойства. Структура молекулы иммуноглобулина g.

Антитела (Ig) – высокоспециализированные белки, которые вырабатываются в ответ на появление антигена в организме и взаимодействуют с этим антигеном, образуя иммунный комплекс.

Иммуноглобулины вырабатываются плазматическими клетками и циркулируют в крови и других биологических жидкостях организма.

Основная функция молекул Ig – специфическое распознавание чужеродных антигенов и связывание с ними. Это приводит к удалению микробов и/или их токсинов из организма. Некоторые антитела специфически метят антигены и делают их более доступными для уничтожения фагоцитами. Эта функция называется «опсонизация» – усиление фагоцитоза.

Существует 5 классов иммуноглобулинов: IgМ, IgG, IgА, IgЕ, IgD. Основной структурной единицей всех классов иммуноглобулинов является IgG.

Молекула иммуноглобулина G состоит из двух идентичных лѐгких (L) и двух тяжѐлых (H) полипептидных цепей, различающихся по длине и молекулярной массе. Тяжелые и легкие цепи связаны между собой попарно дисульфидными (S-S) связями.

Каждая из цепей имеет вариабельные и константные участки. Легкая цепь имеет один вариабельный участок (V_L) и один константный участок (C_L).

Тяжелая цепь имеет один вариабельный участок (V_H) и три константных участка (C_H1, C_H2, C_H3). Константные участки C_H2 и C_H3 формируют Fcфрагмент. Этот фрагмент связывает комплемент, фиксирует молекулу иммуноглобулина на мембранах клеток и обеспечивает проникновение IgG через плаценту.

Вариабельные участки легких и тяжелых цепей формируют два активных центра, вступающих во взаимодействие с эпитопами антигена.

В месте перегибов тяжѐлых цепей находятся шарнирные участки, что придаѐт молекуле иммуноглобулина гибкость при взаимодействии с антигеном.

Свойства антител:

• гетерогенность (многообразие);

• специфичность – способность реагировать с конкретным антигеном;

• аффинность – сила связи одного из активных центров Ig с одним эпитопом антигена;

• авидность (жадность) – показывает, какое количество антигенов может связать молекула антитела. Авидность зависит от количества активных центров, взаимодействующих с антигенным эпитопом.

61. Классификация, функциональное и диагностическое значение отдельных классов иммуноглобулинов.

IgM (тяжѐлые): состоят из 5 молекул иммуноглобулина G; филогенетически самый древний класс иммуноглобулинов. Первыми синтезируются в организме плода. Появляются в сыворотке крови больного в начале инфекционного заболевания, что указывает на острое течение. Не проходят через плаценту. Содержание в сыворотке крови 5-10% от общего количества иммуноглобулинов. Обладают в основном антибактериальным действием, хорошо фиксируют своим Fc-фрагментом комплемент с последующей его активацией. Обладают самой высокой авидностью. Мономеры IgM находятся на поверхности Влимфоцитов в виде мембранного Ig и образуют В-клеточный рецептор (BCR) (см. занятие №11).

IgG (лѐгкие): проходят от матери к плоду через плаценту, что определяет защиту новорожденного от инфекции. Образуются в организме в разгар острого заболевания. При реинфекции и рецидиве IgG образуются в начале заболевания. Являются универсальными, т.к. обладают антибактериальным, антивирусным, антитоксическим действием. Содержание в сыворотке крови – около 80% от общего количества Ig. IgА бывают 2-х видов: сывороточные и секреторные.

Сывороточные IgА представлены мономерами IgG. Содержание их в сыворотки крови 10-15%. Через плаценту не проходят.

Секреторные IgA (SIgA) присутствуют на слизистых оболочках дыхательных путей, кишечника, мочеполовых органов, а также в слюне и грудном молоке. Встречаются чаще в виде димеров IgG. Для защиты от действия протеолитических ферментов имеют особую структуру – секреторный компонент (Sc). SIgA – это основной фактор местного иммунитета слизистых оболочек организма, т.к. предотвращает прикрепление микробов к слизистым оболочкам.

IgE (реагины): мономеры IgG, не проходят через плаценту, содержание в сыворотке крови 0,01-0,02%. Обладают цитофильностью – соединяются Fc– фрагментом с тучными клетками и базофилами. Играют важную роль в развитии аллергических реакций немедленного типа. Обладают антигельминтозной активностью.

IgD: мономеры IgG, не проходят через плаценту. Составляют 0,1% от общего количества иммуноглобулинов. Находятся на поверхности В-лимфоцита, контролируя его активацию.

По направленности действия различают следующие антитела: - антибактериальные; противогельминтные; - антитоксические; - противоопухолевые; - противовирусные; - аутоантитела. - противогрибковые;

62. Реакция агглютинации (ра), практическое применение.

Реакция агглютинации («agglutinatiо» (лат.) – склеивание): 2компонентная простая серологическая реакция (рис. 3). Компоненты реакции агглютинации (РА): корпускулярный антиген (бактериальные клетки) и антитела. В результате реакции образуется агглютинат (комплекс [Аг+Ат]). Антитела «склеивают» бактерии и препятствуют их размножению.

РА используется:

1. Для идентификации микробов (определение вида возбудителя, выделенного от больного) с помощью известных антител (диагностическая сыворотка). Этот вариант реакции агглютинации выполняется в 2-х технических модификациях: ориентировочная (на предметном стекле); развернутая (в пробирках) – для окончательной идентификации исследуемой культуры. Используется для диагностики брюшного тифа, дизентерии, холеры и др. заболеваний.

2. Для определения титра антител в сыворотке крови обследуемого с помощью известных антигенов (диагностикумы). Технически всегда выполняется в виде развернутой РА. Используется для диагностики брюшного тифа, бруцеллеза и др. заболеваний.

Чтобы подтвердить клинический диагноз, титр антител, обнаруженных в сыворотке больного, сравнивают с диагностическим титром для данного заболевания.

Диагностический титр – это минимальное содержание антител в сыворотке крови больного, позволяющее установить диагноз инфекционного заболевания. Например, при брюшном тифе и бруцеллѐзе диагностический титр РА для взрослых – 1/200, для детей – 1/100.

Если титр реакции совпадает с диагностическим титром, значит, пациент болен.

Каждая серологическая реакция, в том числе РА, сопровождается постановкой контролей:

• контроль сыворотки: сыворотка + физиологический раствор. Контроль должен быть прозрачным;

• контроль антигена: взвесь микробов + физиологический раствор. Контроль должен быть равномерно мутным.

Учѐт результатов РА производят визуально.

При положительной реакции на предметном стекле или в пробирках образуется хлопьевидный осадок. При отрицательной реакции жидкость остается равномерно мутной, как в контроле антигена.

63. Реакция преципитации (рп), практическое применение.

Реакция преципитации («praеcipito» (лат.) – осаждать): двухкомпонентная простая реакция. Компоненты реакции преципитации (РП): растворимый антиген (например, бактериальный токсин) и антитела. В результате реакции образуется преципитат (комплекс [Аг+Ат]) в виде помутнения.

Одним из технических вариантов РП является реакция преципитации в геле для определения токсигенности возбудителя дифтерии: на сывороточный МПА в чашке Петри накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную противодифтерийной антитоксической сывороткой. На расстоянии 0,5-1 см от полоски бумаги делают посев бляшками дифтерийных культур, а также заведомо токсигенной контрольной культуры. Антитела сыворотки диффундируют от фильтровальной бумаги в агар и в том месте, где они встречаются с дифтерийным экзотоксином, образуются линии преципитации (рис.4).

64. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга). Практическое использование.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): двухкомпонентная, сложная реакция, используется в 2 модификациях:

а) по Рыцаю:

Компоненты: эритроциты, на которых адсорбированы известные антитела (эритроцитарный антительный диагностикум); неизвестный антиген (исследуемый материал). Реакцию используют для экспрессного выявления типа ботулинового экзотоксина, для диагностики чумы, вирусных инфекций и др.

б) по Бойдену:

Компоненты: эритроциты, на которых адсорбирован известный антиген (антигенный эритроцитарный диагностикум); сыворотка крови больного для определения в ней титра антител. Реакцию используют для диагностики брюшного тифа, вирусных инфекций и др.

Эритроциты в РНГА выполняют роль индикаторной системы, что позволяет визуально обнаружить результат реакции.

Учѐт РНГА: при положительной реакции происходит образование иммунных комплексов [Аг+Ат], которые вызывают склеивание эритроцитов с формированием осадка с неровными краями в виде «перевернутого зонтика». При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговицы».

65. Реакция нейтрализации (рн) для определения типа ботулинового токсина.

двухкомпонентная, сложная реакция, основана на способности Ат нейтрализовать биологическую активность возбудителя или его экзотоксина. Используется для определения типа ботулинового экзотоксина в исследуемом материале. Компоненты реакции: диагностические противоботулинические антитоксические моновалентные сыворотки типов A, B, E, F; исследуемый материал от больного, в котором содержится предполагаемый ботулиновый экзотоксин (кровь или промывные воды желудка). В качестве индикаторной системы используют белых мышей.

Постановка реакции: в 5 пробирок помещают исследуемый материал, в четыре из них добавляют соответствующие моновалентные противоботулинические антитоксические сыворотки А, В, Е, F. 5-я пробирка – «контроль» – содержит исследуемый материал и физиологический раствор. Смеси оставляют для контакта на 30 минут. Затем 5 мышам вводят по 1,0 мл каждой смеси внутрибрюшинно. Учѐт результатов проводят в течение 4-х суток (ежедневно). При наличии экзотоксина в исследуемом материале контрольная мышь погибает обязательно. Из мышей, взятых в опыт, выживает только одна мышь, которой была введена нейтральная смесь т.к. тип экзотоксина совпал с типом сыворотки и произошла его нейтрализация.

66. Реакция связывания комплемента (рск). Практическое использование.

Реакция связывания комплемента (РСК) – сложная трехкомпонентная реакция. Компоненты: исследуемая сыворотка пациента; диагностикум; комплемент. Индикаторная (гемолитическая) система – гемолитическая сыворотка + эритроциты барана.

Постановка реакции (рис.6): в опытную пробирку помещают исследуемую сыворотку пациента (Ат), диагностикум (известный Аг) и комплемент; оставляют пробирку на 1 час в термостате (37⁰С) для контакта. В другой пробирке готовят индикаторную систему (гемолитическая сыворотка + взвесь эритроцитов барана). Через 1 час инкубации в опытную пробирку добавляют индикаторную систему. Учет реакции производят через 16-18 часов.

М еханизм: при положительной реакции в сыворотке больного присутствуют антитела, образуется комплекс Аг+Ат и комплемент адсорбируется на этом комплексе. Поэтому, когда в пробирку добавляют индикаторную (гемолитическую) систему, в отсутствии комплемента не происходит реакции иммуногемолиза, и эритроциты выпадают в осадок. При отрицательной реакции (отсутствие соответствующих антител в сыворотке обследуемого) не образуется комплекс [Аг+Ат], поэтому комплемент остается свободным и связывается с гемолитической системой, что приводит к гемолизу (лизису эритроцитов). РСК используется для диагностики бактериальных (сифилис) и вирусных инфекций.

67. Реакции иммунофлюоресценции (риф). Практическое использование.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) прямая (рис.7): двухкомпонентная сложная серологическая реакция. Компоненты: диагностическая антимикробная сыворотка (Ат), меченная флюорохромом (изотиоцианат флюоресцеина); исследуемый антиген (бактерии или клетки организма, пораженные вирусами) – Аг. Индикатором реакции является флюорохром (*), который светится в УФ-лучах.

Постановка реакции: на фиксированный мазок материала, в котором находится возбудитель (Аг), наносят люминесцирующую диагностическую сыворотку на 10-15 минут, затем сыворотку сливают, препарат промывают водой и микроскопируют в люминесцентном микроскопе. Если исследуемый антиген соответствует антителам сыворотки, они адсорбируются на его поверхности, и наблюдается яркое зеленое свечение клеток возбудителя или клеток, пораженных микроорганизмом. РИФ используется для экспресс-диагностики холеры, сибирской язвы, вирусных инфекций.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) непрямая (рис.8): трехкомпонентная сложная серологическая реакция. Компоненты: диагностическая антимикробная сыворотка (Ат), полученная путем иммунизации кроликов конкретным антигеном; исследуемый антиген (бактерии или клетки, пораженные вирусом) – Аг; антиглобулиновая (антикроличья) сыворотка (АГС), меченная флюорохромом. Содержит антитела против кроличьих иммуноглобулинов. Индикатором реакции является флюорохром (*).

Постановка реакции: на фиксированный мазок из исследуемого материала наносят диагностическую антимикробную сыворотку на 10-15 минут. Затем сыворотку сливают, препарат промывают водой и наносят антиглобулиновую (антикроличью) сыворотку, меченную флюорохромом, и повторно промывают. При положительной реакции (если в мазке есть возбудитель) образуется комплекс микроб + антимикробные (кроличьи) антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. При микроскопии в люминесцентном микроскопе наблюдается яркое зеленое свечение клеток возбудителя или клеток, пораженных микроорганизмом. Реакция используется для экспресс-диагностики бактериальных и вирусных инфекций.

68. Реакция иммуноферментного анализа (ифа). Практическое использование.

Иммуноферментный анализ (ИФА): сложная трехкомпонентная серологическая реакция, используется как для определения исследуемого антигена, так и для определения антител в сыворотке больного.

Компоненты реакции для определения антител в сыворотке больного: известный антиген (диагностикум), сорбированный на твердом носителе (в лунках пластин из полистирола); сыворотка больного (Ат); антиглобулиновая сыворотка против Ig человека, меченная ферментом. Индикатором реакции для визуального наблюдения является пероксидаза – фермент, который действует на субстрат (Н₂О₂), соединенный с хромогеном.

Техника постановки реакции: в лунки полистироловых пластин с сорбированным диагностикумом последовательно добавляют сыворотку больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, а затем субстрат (H₂O₂) с хромогеном. Каждый раз после добавления очередного компонента реакции, лунки пластин промывают для удаления не связавшихся реагентов.

При положительной реакции (наличие антител к данному антигену) образуется комплекс [Аг+Ат], к которому присоединяется антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом. Фермент пероксидаза расщепляет субстрат (перекись водорода), и среда в лунках окрашивается в желто-коричневый цвет за счет хромогена. Интенсивность окраски зависит от количества антигенов и антител, вступивших в реакцию. Реакция используется для диагностики вирусных гепатитов, ВИЧ-инфекции и др.

69. Иммунная система организма человека и ее основные функции. Роль апк, т- и в-лимфоцитов.

Иммунная система организма человека представляет совокупность лимфоидных органов и тканей, предназначенных для распознавания, уничтожения и элиминации (удаления) из организма генетически чужеродных веществ (антигенов). В иммунной системе различают центральные (костный мозг и тимус (вилочковая железа)) и периферические органы (лимфатические узлы, селезѐнка, лимфоидная ткань ротоглотки и кишечника).

В центральных органах иммунной системы происходит созревание и дифференцировка лимфоцитов, в результате чего они приобретают иммунокомпетентность, т.е. способность реагировать на чужеродные вещества. В периферических органах зрелые лимфоциты распознают и обезвреживают антигены.

Основные клетки, участвующие в иммунном ответе: антигенпрезентирующие клетки (дендритные клетки, макрофаги и др.), Т- и В-лимфоциты.

• Антигенпрезентирующие клетки (АПК) захватывают микробный антиген, расщепляют (процессируют) его и затем представляют (презентируют) Т-лимфоцитам – хелперам. Антигенпрезентирующей может быть любая клетка организма, несущая на своей поверхности молекулы главного комплекса гистосовместимости I класса (МНСI – major histocompatibility complex (англ.)). Среди АПК существуют так называемые «профессиональные» АПК – три типа клеток, которые, кроме МНСI, несут на своей поверхности молекулы главного комплекса гистосовместимости II класса (МНСII). Такими «профессионалами» презентации являются дендритные клетки, макрофаги и В-лимфоциты.

• Т-лимфоциты имеют на поверхности специфические антигенраспознающие рецепторы – TCR (T-cell receptor (англ.)). Кроме TCR, в процессе распознавания микробного антигена также участвуют маркерные рецепторы CD, характер которых зависит от функций Т-лимфоцитов.

CD-молекулы (антигены) располагаются на поверхности клеток иммунной системы и имеют различное функциональное значение. Их используют для идентификации и дифференцировки субпопуляций лейкоцитов (clasters of differentiation – кластеры (группы) дифференцировки). CD-антигены являются рецепторами для взаимодействия между клетками. Эти белковые рецепторы имеют порядковые номера и их присутствие на клетках зависит от функции Т- и Влимфоцитов.

На основании различий в характеристике CD-маркеров, Т-лимфоциты подразделяют на CD4+ и CD8+.

CD4 Т-лимфоциты: к ним относят Т-хелперы активаторы и регуляторные Т-хелперы.

• Т-хелперы (Th, Th1, Th2) – при взаимодействии с АПК специфически распознают микробные антигены с помощью TCR. Одновременно CD4маркерные рецепторы связываются с МНСII для стабилизации взаимодействия Th и АПК. После распознавания антигена Th2 стимулируют иммунный ответ по гуморальному типу, а Th1 – по клеточному типу;

• Т-регуляторы – регулируют интенсивность иммунного ответа, подавляя активность других субпопуляций лимфоцитов.

CD8 Т-лимфоциты: к ним относят цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ). С помощью TCR они распознают антиген, а их CD8-рецепторы связываются с МНСI.

ЦТЛ лизируют клетки организма, зараженные вирусами или бактериями, а также опухолевые клетки. Следовательно, CD8 Т-лимфоциты отвечают за клеточный иммунный ответ.

• В-лимфоциты имеют на своей поверхности антигенраспознающий рецептор – ВCR (B-cell receptor (англ.)), а также маркерные рецепторы CD19-21 и др. После встречи с антигеном активированные В-лимфоциты превращаются в плазматические клетки (плазмоциты), вырабатывающие антитела – Ig всех классов. Следовательно, В-лимфоциты отвечают за гуморальный иммунный ответ.

Цитокины – гуморальные факторы системы иммунитета белковой природы. Синтезируются различными клетками организма и регулируют межклеточное взаимодействие. Цитокины, которые синтезируются при иммунном ответе, называются интерлейкинами (ИЛ). Они имеют порядковые номера. Основная функция ИЛ стимуляция клеток, участвующих в иммунном ответе.

Весь процесс возникновения защитных механизмов организма состоит из трех действий: 1) распознавание чужеродного микроба специфическими иммунными клетками, 2) активация этих клеток для получения специфического ответа и 3) возникновение реакций, которые ведут к уничтожению конкретных чужеродных микробов.

Независимо от того, какой чужеродный микроб проник в организм, защищать его будут оба звена адаптивного иммунитета: гуморальный (опосредованный антителами) и клеточный.

70. Иммунный ответ по гуморальному типу.

Иммунный ответ по гуморальному типу. Для его осуществления необходимо взаимодействие (кооперация) антигенпрезентирующей клетки – профессиональной АПК, Т-хелперов второго порядка (Th2) и В-лимфоцитов. Этот процесс происходит в несколько стадий (рис.10):

После появления в организме микробного антигена, АПК (дендритная клетка или макрофаг, а также В-лимфоцит) захватывает антиген и расщепляет его на отдельные антигенные детерминанты (пептиды). Это расщепление обозначается как процессирование. Процессированный антиген соединяется с MHCII и в таком комплексе выходит на поверхность АПК. Комплекс [Аг+МНСII] передается на рецепторы Th (TCR и CD4+). Одновременно АПК выделяет ИЛ-1. Th активируется и дает популяцию двух типов Th: Th1 (участвует в стимуляции иммунного ответа по клеточному типу) и Th2. Th2 активирует В-лимфоцит с помощью ИЛ-4,5. Кроме того, В-лимфоцит самостоятельно с помощью рецептора BCR распознает микробный антиген. Активированные Влимфоциты трансформируются в плазмоциты, продуцирующие антитела (Ig) различных классов.

71. Иммунный ответ по клеточному типу

Иммунный ответ по клеточному типу – предназначен для уничтожения клеток организма, инфицированных вирусами или бактериями, а также опухолевых клеток. Процесс происходит в несколько стадий (рис 10): зараженная клетка (АПК) расщепляет микроб на отдельные антигенные детерминанты (пептиды). Процессированный Аг соединяется с МНСI и в таком комплексе выходит на поверхность АПК. Комплекс [Аг+МНСI] передается на рецепторы ЦТЛ (TCR и CD8+). Одновременно на ЦТЛ поступает от Th1 ИЛ-2. ЦТЛ активируется и выделяет цитотоксические белки (перфорины и гранзимы). Их действие приводит к гибели зараженной клетки.

Перфориновый и гранзимный механизмы гибели клетки-мишени.

Перфорины на поверхности клетки-мишени формируют трансмембранные поры диаметром 5-20 нм. Через них в клетку проникает вода, что приводит к ее осмотической смерти. Через поры в клетку-мишень поступают гранзимы – протеазы, запускающие ее апоптоз путем фрагментации ДНК клетки. Зараженная клетка погибает.

Иммунологическая память основана на наличии Т- и В-лимфоцитов иммунологической памяти, которые образуются при первичной встрече с антигеном в организме (первичном иммунном ответе). Иммунологическая память – это способность лимфоцитов сохранять информацию об антигене и отвечать усиленной и ускоренной иммунологической реакцией на повторную встречу с гомологичным антигеном. В частности, при вторичном иммунном ответе за счет лимфоцитов памяти значительно возрастает скорость образования и количество IgG. Так как клетки памяти живут в течение многих лет и способны к самовоспроизведению, иммунологическая память сохраняется годами, а при некоторых инфекциях (корь, натуральная оспа и др.) – пожизненно.

72. Аллергия. Классификация аллергических реакций по времени проявления симптомов.

Аллергия («allos» – иной, «ergos» – действие (греч.)) – иммунологическая реакция, которая проявляется повышенной чувствительностью организма в ответ на повторное, а иногда и первичное воздействие аллергена (антигена).

Аллерген – вещество белковой или небелковой природы, способное вызывать состояние сенсибилизации – повышенной чувствительности организма. Первая (первичная) доза аллергена, повышающая чувствительность, называется сенсибилизирующей. Вторая (повторная) доза аллергена, вызывающая ответную реакцию организма, называется разрешающей.

По происхождению аллергены разделяют на неинфекционные и инфекционные аллергены.

Инфекционную аллергию могут вызывать различные микроорганизмы:

бактерии, микроскопические грибы и вирусы.

По времени проявления симптомов выделяют два типа аллергических реакций:

ГНТ – гиперчувствительность немедленного типа. Одним из вариантов ГНТ является анафилаксия. Происходит при участии IgЕ.

ГЗТ – гиперчувствительность замедленного типа, клеточноопосредованная реакция. Одним из вариантов ГЗТ является инфекционная аллергия. Происходит при участии Т-лимфоцитов.

73. Анафилаксия. Анафилактический шок, механизм развития. Методы десенсибилизации организма при анафилактическом шоке.

Анафилаксия (ana – без, phylaxe – защита (греч.)) – гиперчувствительность немедленного типа, проявляется через несколько секунд или минут после повторного введения чужеродного белка. Анафилаксия может проявляться в виде системной генерализованной реакции – анафилактического шока. Эта реакция может возникать в ответ на введение антибиотиков (пенициллина и др.), обезболивающих препаратов, а также лечебных сывороток, полученных из крови иммунизированных лошадей (противодифтерийная, противостолбнячная, противоботулиническая и др.).

Первый контакт человека с аллергеном сенсибилизирует организм, т.е. вызывает образование антител, а при последующих контактах происходит аллергический ответ.

Механизм развития анафилактического шока (рис.11).

После попадания сенсибилизирующей (первичной) дозы аллергена (антигена) в организме вырабатываются IgЕ (реагины). Эти антитела прикрепляются к мембранам тучных клеток и базофилов. Данные клетки имеют большое количество гранул, содержащих различные биологически активные медиаторы.

Описанные события не сопровождаются какой-либо симптоматикой до тех пор, пока тот же аллерген не попадет в организм повторно (разрешающая доза). При этом на тучных клетках и базофилах образуются комплексы [аллерген (Аг)+IgЕ], что приводит к залповому выбросу из гранул тучных клеток гистамина, гепарина и других медиаторов. Свободные медиаторы попадают в кровь и вызывают немедленную реакцию: расширение сосудов брюшной полости, спазм гладкой мускулатуры бронхов и внутренних органов.

Основные симптомы анафилактического шока: резкое падение кровяного давления, частый нитевидный пульс, бронхоспазм, одышка, потеря сознания. Если больному своевременно не оказать врачебной помощи, анафилактический шок может закончиться летальным исходом.

Для предотвращения развития анафилактического шока при использовании лошадиных лечебных сывороток отечественный иммунолог М.М. Безредка предложил особый метод введения этих препаратов, получивший название «специфическая десенсибилизация». Метод заключается в дробном (мелкими дозами) введении этих препаратов. Комплексы [Аг+IgЕ] образуются в небольших количествах и выделяющихся медиаторов не хватает, чтобы вызвать системную шоковую реакцию.

Перед введением лечебной дозы сыворотки определяют наличие или отсутствие гиперчувствительности постановкой внутрикожной пробы с 0,1 мл разведенной сыворотки. При отрицательной реакции вводят 0,1 мл неразведенной сыворотки, при отсутствии аллергических явлений, через 30 минут – остальную дозу. При наличии гиперчувствительности (положительная внутрикожная проба – покраснение и отек в месте введения) вначале дробно вводят разведенную сыворотку, а потом дробно – неразведенную (по схеме).

При возникшей симптоматике анафилактического шока немедленно проводится лечение согласно «Стандарту скорой медицинской помощи при анафилактическом шоке».

74. Инфекционная аллергия, механизм развития. Практическое применение кожных аллергических проб для диагностики инфекционных заболеваний.

Инфекционная аллергия относится к гиперчувствительности замедленного типа, которая развивается в ответ на внедрение микроорганизмов и появление в организме микробных аллергенов (антигенов).

Инфекционная аллергия обусловлена взаимодействием микробных аллергенов с макрофагами и Т-хелперами первого порядка (Th1), стимулирующими клеточный иммунитет. Механизм развития инфекционной аллергии:

АПК (макрофаг) поглощает аллерген, процессирует его и презентирует на поверхности в комплексе с МНСII. Th1 распознает этот комплекс с помощью TCR-рецептора и выделяет гамма-интерферон, который активирует макрофаги. Они продуцируют цитокины, повреждающие ткани, в которых находится аллерген, и фагоцитируют клетки, содержащие аллерген (рис. 12).

Инфекционная аллергия наблюдается при хронических бактериальных и грибковых заболеваниях. Специфичность инфекционной аллергии дает возможность использовать кожно-аллергические пробы с аллергенами возбудителей для диагностики конкретных заболеваний.

Пробы с аллергенами проводят внутрикожно. При положительной реакции через 24-48 часов на месте введения аллергена появляются инфильтрат (папула) и покраснение. При отрицательной реакции эти признаки отсутствуют.

Кожно-аллергические пробы используют для диагностики:

туберкулеза (проба Манту с туберкулином); бруцеллеза (проба Бюрне с бруцеллином); туляремии (проба с тулярином); сибирской язвы (проба с антраксином) и др.

75. Препараты для активной иммунизации. Виды вакцин.

Иммунопрофилактика – введение иммунных препаратов с целью предотвращения развития инфекционных заболеваний.

К профилактическим препаратам относят:

Вакцины (vacca (франц.) – корова), используемые в большинстве случаев для массовой активной профилактики среди детских контингентов;

Сывороточные препараты – для экстренной пассивной профилактики некоторых инфекционных заболеваний, в случаях контакта людей с инфекционными больными (корь, вирусный гепатит А и др.).

Иммунотерапия – введение иммунных препаратов (в основном – сывороточных, реже – вакцин) для лечения инфекционных заболеваний.

Виды вакцин:

1. Корпускулярные: из бактериальных клеток или вирусных частиц. К корпускулярным вакцинам относят живые и инактивированные (убитые) вакцины:

   • живые вакцины из аттенуированных штаммов патогенных микробов, утративших вирулентные свойства, но сохранивших иммуногенность.

Аттенуация (ослабление патогенных свойств) достигается путем длительного воздействия на возбудителя физических, химических или биологических факторов (вакцина БЦЖ для профилактики туберкулеза, тривакцина против кори, эпидемического паротита и краснухи и др.);

• инактивированные (убитые) вакцины из патогенных микробов, инактивированных с помощью физических или химических факторов. Их используют как для профилактики (коклюшная, полиомиелитная), так и иммунотерапии инфекционных болезней (бруцеллезная, герпетическая и др.).

2. Химические вакцины (из протективных антигенов микробов, вызывают полноценный иммунный ответ, который защищает организм от возбудителя инфекции):

   • бактериальные (пневмококковая и менингококковая вакцины из капсульных полисахаридов микробов, бесклеточная коклюшная вакцина); вирусные (гриппозная вакцина из протективных антигенов (гемагглю-

тинин и нейраминидаза) вируса гриппа).

3. Анатоксины, которые получают из экзотоксинов возбудителей путем длительной обработки их раствором формалина. Анатоксины лишены токсических свойств, но сохранили иммуногенность, т.е. способность вызывать в организме выработку антитоксических антител, нейтрализующих экзотоксины возбудителей (например: дифтерийный, столбнячный анатоксины). Для усиления иммуногенных свойств анатоксины адсорбируют на адъюванте (гидроокись алюминия).

4. Генно-инженерные вакцины:

молекулярные (рекомбинантные) вакцины – получают путем введения в дрожжевые или бактериальные клетки плазмиды, кодирующей синтез протективного антигена определенного возбудителя. После этого дрожжевые клетки выращивают на питательной среде, где они в процессе размножения вырабатывают протективные антигены возбудителя. Препарат очищают от дрожжевых белков и используют для иммунизации (рекомбинантная дрожжевая вакцина против вирусного гепатита В из протективного HBs-антигена вируса);

векторные вакцины – для их приготовления используют непатогенный для человека вирус (иначе вирус-вектор). В его ДНК встраивают гены, кодирующие синтез протективных антигенов другого патогенного вируса. В качестве вектора обычно используют вирус осповакцины, который раньше использовали для профилактики натуральной оспы. В организме живой векторный вирус размножается и вырабатывает не только свои антигены, но и протективные антигены возбудителя (векторная вакцина для профилактики бешенства среди диких животных).

5. Синтетические вакцины – для их получения используют эпитопы (антигенные детерминанты микробов), которые соединяют с полимерным крупномолекулярным носителем. В качестве носителя используют иммуномодулятор (полиоксидоний), который обеспечивает многократное усиление иммунного ответа на данные антигенные детерминанты (гриппозная вакцина с полиоксидонием).

Вакцины по составу:

• моновакцины создают иммунитет к одному возбудителю (например: чумная вакцина, вакцина против гепатита А);

• ассоциированные вакцины создают одновременно иммунитет к нескольким возбудителям (например: адсорбированная коклюшно-дифтерийностолбнячная вакцина (АКДС-вакцина, состоящая из инактивированной корпускулярной коклюшной вакцины в ассоциации с дифтерийным и столбнячным анатоксинами), адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС-анатоксин, используют для профилактики дифтерии и столбняка), живая тривакцина (используют для профилактики кори, эпидемического паротита и краснухи)).

Практическое применение вакцин:

1. Для профилактики инфекционных заболеваний (большинство вакцин):

   • для обязательной плановой профилактики среди детей согласно национальному календарю прививок (туберкулезная вакцина БЦЖ, вакцина против гепатита В, вакцина АКДС, полиомиелитная вакцина, тривакцина против кори, эпидемического паротита и краснухи);

   • для профилактики заболеваний среди людей из групп риска, а именно медицинских работников (вакцина против гепатита В) и животноводов (бруцеллезная и сибиреязвенная вакцины).

2. Для лечения (иммунотерапия) в основном хронических инфекционных заболеваний. С этой целью используют убитые вакцины (бруцеллезная, герпетическая и др.), а также анатоксины (стафилококковый анатоксин).

76. Серотерапия и серопрофилактика инфекционных заболеваний. Виды сывороточных препаратов.

Сывороточные препараты содержат специфические антитела и создают в организме приобретенный искусственный пассивный иммунитет. Эти препараты используют для лечения (серотерапия), а также экстренной профилактики с целью быстрого создания иммунитета у инфицированных людей, имевших контакт с больными.

Сывороточные препараты по технологии получения бывают двух видов:

Иммунные сыворотки получают из крови иммунизированных животных, обычно лошадей. Это гетерологичные (чужеродные) сыворотки, т.к. содержат чужеродные для человека сывороточные белки (противостолбнячная антитоксическая сыворотка, противоботулиническая антитоксическая сыворотка, противодифтерийная антитоксическая сыворотка).

Иммуноглобулины получают из иммунных сывороток путем фракционирования и осаждения. Они более концентрированы, не содержат балластных компонентов и представлены фракцией IgG. Иммуноглобулины бывают как гетерологичные (иммуноглобулин противосибиреязвенный лошадиный и др.), так и гомологичные, получаемые из крови иммунизированных людей (доноров) – иммуноглобулин противостолбнячный и др.

Одним из вариантов гомологичных иммуноглобулинов является нормальный человеческий иммуноглобулин. В качестве сырья для его приготовления используют утильную кровь (абортную и плацентарную), содержащую антитела к нескольким, широко распространенным возбудителям вследствие вакцинации женщин или после перенесенных ими заболеваний. Нормальный человеческий иммуноглобулин используют для экстренной профилактики кори, полиомиелита, вирусного гепатита А.

Сывороточные препараты по направленности действия: антитоксические (противоботулиническая антитоксическая сыворотка, противостолбнячная антитоксическая сыворотка, противодифтерийная антитоксическая сыворотка);

• антибактериальные (противосибиреязвенный иммуноглобулин, противостафилококковый иммуноглобулин);

• антивирусные (антирабический иммуноглобулин против бешенства, иммуноглобулин против клещевого энцефалита).

2. раздел

77. Характеристика стафилококков.

Характеристика стафилококков, вызываемые заболевания. Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций, специфическая терапия.

Род Staphylococcus включает около 40 видов, из них наибольшее значение в патологии человека имеют S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, неподвижны, имеют микрокапсулу, спор не образуют, в мазках располагаются скоплениями в виде гроздьев винограда.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, нетребовательны к питательным средам, культивируются на МПА с образованием пигментированных колоний желтого или белого цвета, в МПБ дают диффузно-мутящий рост. Для идентификации стафилококков имеет значение характер роста на кровяном агаре (зоны гемолиза), желточно-солевом агаре (ЖСА) – определение лецитиназы.

Факторы патогенности.

1. Факторы адгезии:

• микрокапсула;

• компоненты клеточной стенки: пептидогликан и тейхоевые кислоты (обеспечивают адгезию на клетках организма);

• S.epidermidis вырабатывает особый вид слизи (полисахарид, гликокаликс), обеспечивающий их прикрепление к полимерным материалам катетеров, искусственных клапанов сердца, протезов сосудов и суставов и создание на них бактериальной биопленки. Это приводит к развитию сепсиса и эндокардита, обусловленных «госпитальными штаммами» S.epidermidis.

  2. Белок А угнетает фагоцитоз.

  3. Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с клетками кожи и почек человека.

  4. Ферменты инвазии:

• плазмокоагулаза вызывает свертывание белков сыворотки крови, образуя фибриновую «псевдокапсулу», защищающую стафилококки от фагоцитоза. Плазмокоагулаза является одним из важных маркеров различных видов стафилококков для их дифференциации. S.aureus имеет плазмокоагулазу и относится к коагулазоположительным стафилококкам, S.epidermidis и S.saprophyticus не имеют плазмокоагулазы и относятся к коагулазоотрицательным (КОС);

• гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани, что способствует распространению стафилококков в организме;

• фибринолизин расщепляет фибрин и способствует распространению стафилококков в организме;

• дезоксирибонуклеаза расщепляет ДНК;

  2. Экзотоксины:

• гемолизины 4-х типов (мембранотоксины), токсичные для эритроцитов, лейкоцитов, макрофагов, фибробластов;

• лейкоцидин разрушает лейкоциты;

• эксфолиативный токсин разрушает межклеточные контакты в эпидермисе, вызывает синдром «ошпаренной кожи»;

• токсин синдрома токсического шока вызывает системное поражение организма в виде синдрома токсического шока (СТШ) с высокой летальностью;

• энтеротоксины вызывают симптоматику острого пищевого отравления.

Все токсины, кроме гемолизинов, продуцирует только S.aureus.

2. R-плазмиды детерминируют устойчивость к нескольким антибиотикам, в т.ч. за счет продукции β-лактамаз. В клинической практике большое значение имеют метициллинрезистентные S.aureus (MRSA) – штаммы S.aureus, устойчивые к большой группе антибиотиков (β-лактамы). MRSA адаптированы к выживанию в присутствии метициллина, оксациллина. Часто вызывают внутрибольничные инфекции.

S.aureus распространен повсеместно, входит в состав микробиоты кожи, носоглотки, ротоглотки, опасен как возбудитель внутрибольничных (госпитальных) инфекций.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель. Часто формируется носительство у медперсонала. Носовая полость является основной зоной колонизации S.aureus.

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, алиментарный. У лиц со сниженной резистентностью возможен эндогенный способ заражения за счет транслокации S.aureus в другие биотопы организма.

Инфекции, вызываемые S.aureus, многообразны, т.к. поражаются любые ткани и органы (табл. 1).

78. Заболевания, вызываемые стафилококками, микробиологическая диагностика, специфическое лечение.

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций.

Бактериологический метод с посевом на соответствующие питательные среды и идентификацией по морфологическим, культуральным, биохимическим и патогенным свойствам и постановкой антибиотикограммы. Фаготипирование выделенных культур S.aureus производят по эпидемиологическим показаниям при пищевых отравлениях и внутрибольничных инфекциях.

Для лечения используют антимикробные препараты. Для специфического лечения в некоторых случаях возможно применение стафилококкового бактериофага, антитоксической противостафилококковой плазмы или иммуноглобулина. Для специфической профилактики разработан стафилококковый анатоксин

79. Характеристика стрептококков.

Род Streptococcus включает 20 видов. Наибольшее значение в патологии человека имеют S.pyogenes, S.agalactiae, S.sanguis, S.mitis, S.mutans, Enterococcus faecalis, S.pneumoniae.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, неподвижны, спор и капсул (за исключением S.pneumoniae) не образуют, в мазках

располагаются цепочками или попарно.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, на кровяном агаре часто образуют колонии с зонами гемолиза.

Виды гемолиза:

α-гемолиз: вокруг колоний микроорганизмов образуются зоны позеленения («зеленящие стрептококки»)

β-гемолиз: полный гемолиз вокруг колоний (прозрачная зона);

γ-гемолиз: отсутствие видимого гемолиза.

Антигенная структура: стрептококки по полисахаридным антигенам клеточной стенки разделены на 20 серогрупп. В патологии человека основная роль принадлежит стрептококкам группы А.

Стрептококки входят в состав нормальной микробиоты организма человека, в частности, кожи, слизистых оболочек и кишечника, но при снижении резистентности организма могут вызывать заболевания.

Наиболее патогенным и эпидемиологически значимым для человека является вид S.pyogenes, обладающий значительным набором факторов патогенности:

1. Фактор адгезии: липотейхоевая кислота клеточной стенки;

2. Белок М подавляет фагоцитоз;

3. Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с тканью сердца и почек.

4. Ферменты инвазии:

• фибринолизин (стрептокиназа) вызывает растворение фибриновых тромбов, способствует распространению по кровеносному руслу;

• гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани, что способствует распространению стрептококков в организме; - ДНК-аза разрушает молекулы ДНК.

5. Экзотоксины:

• эритрогенный токсин является суперантигеном, действие которого подобно действию стафилококкового токсина СТШ, вызывает скарлатину и СТШ;

• гемолизины (О- и S-стрептолизины) оказывают гемолитическое и цитотоксическое действие на эритроциты, лейкоциты, тромбоциты;

Источники инфекции: больной человек, бактерионоситель, реже животные (коровы).

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, для S.agalactiae – интранатальный (во время родов).

80. Заболевания, вызываемые стрептококками, микробиологическая диагностика.

Основной метод диагностики – бактериологический. Иногда используют серологический метод для определения в сыворотке крови антител против стрептолизина О и т.д. (при ревматизме).

Специфическая профилактика и лечение стрептококковых инфекций не разработаны.

81. Характеристика пневмококков, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Пневмококки – Streptococcus pneumoniaе.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные диплококки ланцетовидной формы, образуют капсулу в организме, спор и жгутиков не имеют.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, растут на кровяном агаре, образуют гладкие, мелкие колонии с зонами α-гемолиза.

Антигенная структура: пневмококки дифференцируют по полисахаридным капсульным антигенам и выделяют 90 сероваров.

Факторы патогенности:

1. Капсула защищает от фагоцитоза.

2. Протеаза IgA разрушает секреторные IgA и способствует адгезии пневмококков на слизистых оболочках.

3. Гиалуронидаза и нейраминидаза разрушают основное вещество соединительной ткани.

4. Гемолизин.

Многие серовары пневмококков являются нормальными обитателями носоглотки, но могут вызывать патологию у человека, как при эндогенном, так и при экзогенном путях заражения и ослабленном иммунитете. Наиболее вирулентны пневмококки I, II и III сероваров. III серовар, имеющий мощную капсулу, является высоко вирулентным и вызывает тяжелые деструктивные поражения тканей.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.

Путь заражения: воздушно-капельный.

Заболевания, вызываемые пневмококками

Метод диагностики – бактериологический.

Специфическая профилактика: химическая (полисахаридная) вакцина на основе капсульных антигенов.

82. Возбудители сепсиса, микробиологическая диагностика.

Сепсис (от греч. sepsis – гниение) – системная воспалительная реакция в ответ на генерализацию местного инфекционного процесса с развитием бактериемии и токсемии. Сопровождается размножением возбудителя в крови и характерной клинической и патологоанатомической картиной.

Особенность сепсиса заключается в многообразии его возбудителей при достаточно общей клинической картине заболевания (табл. 5).

Таблица 5 Наиболее значимые возбудители сепсиса

Правила забора крови при подозрении на сепсис:

1. Кровь забирают в процедурном кабинете, соблюдая правила асептики и антисептики;

2. Лучше забирать кровь до назначения антибактериальной терапии, если антибиотики назначены, то перед очередным введением антибиотика;

3. Натощак или через 3 часа после еды;

4. Во время подъема температуры;

5. Количество крови: у взрослых 10 мл, 2 пробы из двух сосудов или двух участков одного сосуда (локтевой вены), у детей (в зависимости от возраста) – 1,5-5 мл. Кровь помещают во флаконы со специальной транспортной средой;

6. Кровь из подключичного катетера необходимо забирать только при подозрении на катетер-ассоциированную инфекцию.

Диагностика сепсиса проводится бактериологическим методом с посевом крови на специальные питательные среды в аэробных и анаэробных условиях культивирования. Посев крови необходимо проводить несколько раз.

83. Характеристика менингококков, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Менингококки – Neisseria meningitidis.

Морфо-тинкториальные свойства: грамотрицательные диплококки бобовидной формы, жгутиков и спор не имеют, в организме могут образовывать капсулу.

Культуральные свойства: аэробы, требовательны к условиям культивирования, растут на сывороточном агаре, образуют мелкие гладкие прозрачные колонии. Строгий температурный оптимум 37⁰С (при других температурах менингококки погибают) необходимо соблюдать как при культивировании, так

и при транспортировке материала от больного в лабораторию.

Антигенная структура: по капсульным полисахаридным антигенам выделяют 13 серогрупп, из которых наиболее патогенными для человека являются серогруппы А и С, вызывающие эпидемические вспышки.

Факторы патогенности менингококков:

1. Пили, белки наружной мембраны обеспечивают адгезию и инвазию в эпителий носоглотки;

2. Протеаза IgA расщепляет молекулы секреторных IgА, снижая местную

защиту слизистых оболочек носоглотки;

3. Капсула защищает от фагоцитоза;

4. Ферменты инвазии: гиалуронидаза, нейраминидаза и др.;

5. Эндотоксин (ЛПС), основной фактор патогенности, который вызывает поражение кровеносных сосудов, что проявляется кровоизлияниями во внутренние органы и геморрагической сыпью на коже.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель. Чаще (в 7080% случаев) болеют дети первых трех лет жизни.

Путь заражения: воздушно-капельный. Входные ворота инфекции слизистая оболочка носоглотки.

Заболевания, вызываемые менингококками, представлены в табл. 6.

Микробиологическая диагностика менингококковых инфекций.

1. Бактериологический метод (основной): выделение чистой культуры возбудителя на сывороточных средах и определение его антибиотикочувствительности.

2. Бактериоскопический метод используется как обязательный ориентировочный. В мазках из нативного материала с окраской по Граму выявляется внутриклеточное расположение менингококков с характерной картиной незавершенного фагоцитоза.

3. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

Специфическая профилактика менингококковой инфекции проводится только по эпидемическим показаниям менингококковой полисахаридной вакциной серогрупп А и С.

84. Характеристика гонококков, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Гонококки – Neisseria gonorrhoeae.

Морфо-тинкториальные свойства: грамотрицательные диплококки бобовидной формы, имеют микрокапсулу, неподвижны, спор не образуют.

Культуральные свойства: аэробы, требовательны к питательным средам и температуре инкубации, температурный оптимум 37⁰С, растут на сывороточных средах.

Факторы патогенности гонококков:

1. Пили, белки наружной мембраны обеспечивают адгезию и инвазию в цилиндрический эпителий мочеполовых путей, ингибируют фагоцитоз;

2. Капсула защищает от фагоцитоза;

3. Протеаза IgA расщепляет секреторные иммуноглобулины;

4. Эндотоксин (ЛПС) вызывает повреждение клеток и воспалительную реакцию ткани;

5. R-плазмиды (факторы множественной лекарственной устойчивости).

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: половой, контактный, контактно-бытовой, интранатальный (во время родов).

Клиническая классификация гонококковой инфекции (приведена в сокращенном варианте) основана на локализации патологического процесса (Клинические рекомендации «Гонококковая инфекция», 2020):

1. Гонококковая инфекция нижних отделов мочеполового тракта: уретрит,

2. цервицит, цистит, вульвовагинит и др. У женщин в 70% случаев без симптоматики;

3. Гонококковая инфекция мочеполовых органов: эпидидимит, орхит, простатит, эндометрит, сальпингоофорит и др.;

4. Гонококковая инфекция глаз: конъюнктивит, офтальмия новорожденных;

5. Гонококковый фарингит;

6. Гонококковая инфекция аноректальной области;

7. Гонококковая инфекция костно-мышечной системы: артрит, бурсит и др.;

8. Другие гонококковые инфекции: эндокардит, менингит, сепсис и др.

Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции.

1. Бактериоскопический метод: только при исследовании отделяемого уретры у мужчин с выраженными симптомами уретрита.

2. Молекулярно-биологический метод: определение специфических фрагментов ДНК N.gonorrhoeae с помощью ПЦР. Материал на исследование зависит от локализации: отделяемое уретры, моча, отделяемое влагалища, шейки матки, мазок со слизистой оболочки ротоглотки, отделяемое слизистой оболочки прямой кишки, отделяемое конъюнктивы.

3. Бактериологический метод: выделение чистой культуры возбудителя на сывороточных средах и определение его антибиотикочувствительности. Материал – в зависимости от локализации.

85. Характеристика гемофильных бактерий, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

В группу гемофильных (от греч. haima – кровь, philos – любить) объединены мелкие грамотрицательные бактерии, способные расти только на средах, содержащих кровь или ее производные. Многие гемофильные бактерии в норме обитают на слизистых оболочках дыхательных путей человека.

Основную роль в патологии человека играет Haemophilus influenzaе. В странах с тропическим климатом также регистрируют H.ducreyi.

Морфо-тинкториальные свойств: грамотрицательные мелкие палочки, жгутиков и спор не имеют. H.influenzae может образовывать капсулу в организме.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, для культивирования необходимы факторы роста, обозначенные буквами X и V: Xфактор: гемин, содержащийся в эритроцитах; V-фактор: кофактор окислительно-восстановительных ферментов (НАД). На шоколадном агаре (с прогретой кровью) образуют мелкие блестящие гладкие колонии.

Антигенная структура H.influenzae: по капсульному антигену подразделяют на 6 серотипов, из них наиболее патогенный H.influenzae типа b.

Факторы патогенности H.influenzae:

1. Пили обеспечивают адгезию к эпителиальным клеткам;

2. Капсула защищает от фагоцитоза, обладает антикомплементарным действием;

3. Протеаза IgA расщепляют секреторные IgA;

4. Эндотоксин (ЛПС) стимулирует инвазию и развитие воспаления;

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.

Путь передачи: воздушно-капельный.

Микробиологическая диагностика.

1. Бактериологический метод с определением антибиотикочувствительности возбудителя.

2. ПЦР.

Специфическая профилактика заболеваний, вызываемых гемофильными бактериями в России, не разработана, но разрешены к применению зарубежные вакцины против H.influenzae типа b.

86. Характеристика бордетелл, микробиологическая диагностика коклюша и паракоклюша, специфическая профилактика коклюша.

Род Bordetella включает 2 патогенных для человека вида:

B.pertussis – возбудитель коклюша;

B.parapertussis – возбудитель паракоклюша (коклюшеподобное заболевание у человека).

Морфо-тинкториальные свойства: грамотрицательные мелкие, короткие бактерии, спор не образуют, имеют микрокапсулу, неподвижны.

Культуральные свойства: строгие аэробы, требовательны к питательным средам. B.pertussis культивируют на специальных питательных средах: казеиново-угольный агар (КУА), среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с кровью человека), молочно-кровяной агар. На среде Борде-Жангу возбудитель коклюша растет в виде гладких мелких блестящих выпуклых колоний, напоминающих капельки ртути. B.parapertussis культивируют на МПА и в

МПБ.

Антигенная структура:

1. О-антиген – родоспецифический;

2. К-антигены (капсульные) имеют значение для идентификации видов бордетелл по антигенным свойствам в реакции агглютинации.

Факторы патогенности B.pertussis:

1. Комплекс адгезинов: филаментозный гемагглютинин (протективный антиген), пили, белок наружной мембраны (пертактин), капсула;

2. Токсины:

   • коклюшный экзотоксин вызывает повышенную чувствительность к гистамину, лимфоцитоз; трахеальный цитотоксин повреждает мерцательный эпителий респираторного тракта; дермонекротоксин вызывает воспаление и некроз эпителия респиратор-

ного тракта;

• аденилатциклаза подавляет функции фагоцитов; эндотоксин (ЛПС) повреждает эпителиальные клетки респираторного

тракта, обладает общетоксическим действием.

Коклюш – острое инфекционное заболевание. Чаще болеют дети дошкольного возраста.

Источник инфекции: больной человек (особенно в катаральном периоде заболевания), редко – бактерионоситель.

Путь передачи: воздушно-капельный.

Заболевание характеризуется высокой контагиозностью. После контакта неиммунизированного человека с больным коклюшем вероятность развития заболевания составляет 75-90%.

Клиника: инкубационный период длится в среднем 2 недели, затем следует катаральный период (наиболее контагиозный, проявляется симптомами сухого, постоянно усиливающегося кашля). Пароксизмальный период (период судорожного кашля), который характеризуется появлением приступов спазматического кашля, частые продолжительные приступы кашля могут приводить к перевозбуждению дыхательного центра и остановке дыхания (развитию апноэ), стадия выздоровления характеризуется постепенным уменьшением частоты приступов кашля, выздоровление наступает медленно (в течение 1-2 месяцев).

Паракоклюш имеет более легкое течение.

Материал на исследование: слизь с задней стенки глотки.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика (в начале заболевания): РИФ и ИФА для определения антигенов возбудителей в материале от больного.

2. Бактериологический метод, основной (наиболее эффективен в конце инкубационного периода и в катаральном периоде): посев слизи с задней стенки глотки на соответствующие среды с последующей идентификацией. Забор материала в пароксизмальный период чаще проводят методом «кашлевых пластинок» (во время приступа кашля подносят чашку с питательной средой ко рту на расстояние 10-12 см). Реже берут мазок тампоном с задней стенки глотки.

3. Молекулярно-биологический: ПЦР.

4. Серологический метод (используют с 3 недели заболевания): определение антител в сыворотке крови с помощью РА, РНГА, РИФ

(непрямая), ИФА.

Специфическая плановая профилактика коклюша.

В течение первого года жизни ребенку необходима трехкратная вакцинация убитой коклюшной вакциной в составе АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина) (Россия).

Разработаны и применяются бесклеточные вакцины, содержащие очищенные антигены возбудителей коклюша (филаментозный гемагглютинин, коклюшный анатоксин и др.) (Япония, Бельгия, США и др.).

Экстренная профилактика (для неиммунизированных людей при контакте с больным коклюшем): нормальный человеческий иммуноглобулин.

B.bronchiseptica представляют собой мелкие подвижные грамотрицательные палочки, которые являются паразитами млекопитающих. Они локализуются и размножаются среди ресничек эпителия дыхательных путей. B.bronchiseptica крайне редко вызывает у людей заболевание, напоминающее паракоклюш. Ее можно обнаружить в носоглотке людей со сниженным иммунитетом, а также людей, содержащих домашних животных (кроликов, собак и др.). Возможно бессимптомное носительство этих бактерий у человека.

87. Характеристика легионелл, роль в патологии. Микробиологическая диагностика легионеллеза.

Из 22 видов легионелл, патогенных для человека, 95% случаев заболеваний связаны с видом Legionella pneumophila. Бактерии получили название благодаря вспышке пневмонии со смертельными исходами среди участников съезда Американского Легиона в 1976 г. (болезнь легионеров, легионеллез).

Морфо-тинкториальные свойства: L.pneumophila – мелкие грамотрицательные палочки, спор и капсул не образуют, подвижны.

Культуральные свойства: аэробы, требовательны к питательным средам, размножаются только на сложных питательных средах (с добавлением железа и цистеина).

Факторы патогенности. Легионеллы – факультативные внутриклеточные паразиты. Активно размножаются в макрофагах, что приводит к их разрушению и выходу бактерий в легочную ткань. Этот процесс обеспечивается следующими факторами патогенности: цитотоксином и супероксиддисмутазой.

Эндотоксин (ЛПС) обусловливает симптомы общей интоксикации.

Источники инфекции и путь заражения. Легионеллы в природных условиях обитают в пресноводных водоемах, но способны успешно колонизировать искусственные водоемы системы водоснабжения, водопроводные трубы, краны, душевые установки, кондиционеры, медицинскую аппаратуру. На синтетических и резиновых поверхностях бактерии образуют биопленку, устойчивую к дезинфицирующим средствам. Путь заражения: аэрогенный, при вдыхании мелкодисперсного аэрозоля, содержащего возбудителя.

Патогенез и клиника. Ведущим фактором в патогенезе является накопление возбудителя в альвеолярных макрофагах. Высокая концентрация бактерий приводит к развитию острого воспалительного процесса в легочной ткани.

Болезнь легионеров сопровождается лихорадкой, болями в груди, кашлем, одышкой. В 20-30% случаев развивается острая дыхательная недостаточность. Могут развиться инфекционно-токсический шок, почечная недостаточность, поражения ЦНС. Летальность до 25%.

Второе клиническое проявление этой патологии – лихорадка Понтиак – ОРЗ без пневмонии. Течение легкое.

Материал на исследование: мокрота, материал при бронхоскопии.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика: РИФ биопсийного материала легких.

2. ПЦР.

3. Бактериологический метод: посев на соответствующие питательные среды.

4. Серологический метод: РИФ, ИФА.

88. Синегнойная инфекция в патологии человека, микробиологическая диагностика, роль в возникновении внутрибольничных инфекций.

Синегнойная палочка – Pseudomonas aeruginosa.

Морфо-тинкториальные свойства: грамотрицательные неспорообразующие палочки средних размеров, подвижны, вирулентные штаммы образуют капсулоподобное вещество.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, не требовательны к питательным средам, на МПА обычно растут в виде крупных плоских колоний с характерным запахом жасмина или карамели (образует триметиламин) и окраской сине-зеленого цвета (растворимый пигмент пиоцианин), в МПБ дает диффузномутящий рост с окрашиванием среды пигментом.

Факторы патогенности P.aeruginosa:

1. Пили обеспечивают адгезию на клетках;

2. Капсулоподобное вещество (внеклеточная слизь) препятствует фагоцитозу, способствует образованию биопленок и колонизации различных биотопов;

3. Ферменты патогенности: нейраминидаза, протеазы и др.;

4. Токсинопродукция:

• экзотоксин А (подобен гистотоксину) нарушает синтез белка;

• экзотоксин U – ведущий фактор вирулентности, вызывает тяжелое поражение легочной ткани, способствует тромбообразованию при синегнойной пневмонии, которая быстро переходит в сепсис;

• лейкоцидин обладает токсическим действием на лейкоциты;

• эндотоксин (ЛПС);

5. R-плазмиды (факторы множественной лекарственной устойчивости и устойчивости к дезинфектантам).

Источники инфекции и пути заражения многообразны.

P.aeruginosa является одним из основных возбудителей внутрибольничных инфекций. Гнойно-воспалительные заболевания, которые она вызывает, почти в 100% случаев связаны с экзогенным инфицированием при длительном нахождении в стационаре на фоне снижения резистентности организма.

Особенности P.aeruginosa, как возбудителя госпитальной инфекции:

• широкое распространение в окружающей среде (обитает в почве, воде, является факультативным симбионтом организма человека);

• минимальные пищевые потребности, хорошая выживаемость в окружающей среде;

• множественная устойчивость к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам.

Гнойно-воспалительные процессы, обусловленные P.aeruginosa могут иметь различную локализацию в организме и отличаются особым упорством и неблагоприятным прогнозом.

Выделяют несколько видов отделений стационаров, в которых внутрибольничная синегнойная инфекция занимает лидирующие позиции.

Материал на исследование берут в зависимости от формы заболевания (гной, кровь, отделяемое ран, моча, мокрота и др.) желательно до начала лечения больного антимикробными препаратами.

Микробиологическая диагностика: основной метод бактериологический с обязательным определением чувствительности выделенной культуры к антимикробным препаратам и бактериофагам.

Специфическая профилактика: корпускулярная поливалентная вакцина показана больным из групп риска (иммунодефицит, сахарный диабет и др.).

Также применяется для лечения, снижая риск развития сепсиса.

При тяжелых формах синегнойной инфекции и множественной лекарственной устойчивости культуры для специфического лечения используют противосинегнойную плазму человеческую. При наличии чувствительности к бактериофагам применяют: синегнойный бактериофаг, интестибактериофаг и пиобактериофаг.

89. Характеристика возбудителя бруцеллеза, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Род Brucella представлен единым видом B.melitensis.

Морфо-тинкториальные свойства: мелкие грамотрицательные палочки, спор и жгутиков не имеют, образуют капсулу в организме.

Культуральные свойства: требовательны к условиям культивирования, на сложных питательных средах (печеночный агар и др.) растут очень медленно (2-4 недели).

Факторы патогенности бруцелл:

1. Капсула, белки наружной мембраны;

2. Гиалуронидаза определяет высокие инвазивные свойства;

3. Эндотоксин.

Бруцеллы – факультативные внутриклеточные паразиты, способны проникать и размножаться в фагоцитах и вызывать хроническую инфекцию. Бруцеллы также размножаются в клетках РЭС, но могут находиться и внеклеточно.

Бруцеллез – инфекционное зоонозное заболевание с тенденцией к хроническому течению, характеризуется длительной лихорадкой, поражением опорно-двигательной, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем организма.

Источники инфекции: мелкий и крупный рогатый скот, свиньи. Больной человек не является источником инфекции.

Заболевание носит спорадический характер (единичные случаи) или встречается в виде отдельных эпидемических вспышек.

Пути заражения:

• алиментарный: через сырое молоко и непастеризованные молочные продукты (брынза, сыр и др.) и мясо больных животных;

• контактный: при уходе за больными животными, обработке шкур, приеме родов, разделке туш и др. Бруцеллы легко проникают в организм через неповрежденные слизистые оболочки и слегка поврежденные кожные покровы;

• воздушно-пылевой: при вдыхании загрязненных бруцеллами пылевых частиц с шерсти, земли, навоза.

Патогенез. Попав в организм, бруцеллы размножаются в регионарных лимфатических узлах, затем попадают в кровь и в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенка, лимфатические узлы), где, в результате внутриклеточного размножения, формируют очаги воспаления – гранулемы. При снижении резистентности организма бруцеллы выходят в кровь и могут поражать различные системы и органы.

Ведущим фактором в патогенезе бруцеллеза является формирование гиперчувствительности замедленного типа, что определяет особенность клиники заболевания – склонность к длительному течению и переходу в хроническую форму.

Основные клинические формы бруцеллеза.

Острый бруцеллез (первично-септическая форма): лихорадка, озноб, высокая потливость, генерализованная лимфаденопатия, увеличение печени и селезенки.

Хронический бруцеллез характеризуется вариабельностью клинических проявлений и развитием рецидивов: поражаются опорно-двигательный аппарат (полиартрит, миозит), нервная система (полиневриты, радикулиты) и половые органы (орхиты, сальпингиты и т.д.).

Микробиологическая диагностика бруцеллеза.

1. Серологический (основной) метод:

острая форма заболевания:

• ориентировочная РА Хеддльсона на стекле для массовых обследований;

• развернутая РА Райта – диагностический титр 1:200 для взрослых, 1:100 – для детей;

• ИФА для определения IgM и IgG;

  2. РНГА, РИФ (непрямая); латентная или хроническая форма заболевания в период ремиссии: реакция Кумбса для выявления неполных Ат (IgG, IgА).

  3. Аллергологический метод: внутрикожная проба Бюрне с бруцеллином. Проба положительна к концу 1-го месяца заболевания и сохраняется длительно; имеет значение для диагностики хронического бруцеллеза, чаще проводится при массовых обследованиях.

  4. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

Специфическая профилактика бруцеллеза по эпидпоказаниям проводится живой бруцеллезной вакциной. Для специфического лечения ранее применялась убитая бруцеллезная вакцина.

90. Характеристика возбудителя чумы, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Возбудитель – Yersinia pestis.

Морфо-тинкториальные свойства: мелкие грамотрицательные палочки с биполярным окрашиванием, спор и жгутиков не имеют, образуют капсулу.

Культуральные свойства: не требователен к питательным средам, температурный оптимум 28⁰С. Вирулентные штаммы на МПА образуют шероховатые колонии (R-форма), которые под малым увеличением микроскопа имеют плотный зернистый центр, прозрачную фестончатую периферию и напоминают «кружевные платочки», в МПБ растут в виде нежной пленки на поверхности, от которой в бульон опускаются тяжи – «чумные сталактиты».

Факторы патогенности чумного микроба:

1. Пили для адгезии.

2. Капсула.

3. Ферменты инвазии (гиалуронидаза, плазмокоагулаза, фибринолизин). Антифагоцитарной активностью обладают аденилатциклаза и супероксиддисмутаза.

4. «Мышиный» токсин обладает цитотоксическим действием, вызывает шок и смерть лабораторных животных.

Кроме того, возбудитель чумы продуцирует большой набор белковферментов, обладающих высокой антифагоцитарной активностью.

Все эти многочисленные факторы патогенности обеспечивают неудержимое распространение чумного микроба в организме, быстро приводящее к септицемии и летальному исходу.

Чума – особо опасное природно-очаговое заболевание, относящееся к группе карантинных инфекций, характеризуется тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, легких, сепсисом и высокой летальностью. Зооантропоноз.

Основными источниками и резервуаром инфекции в природе являются грызуны: суслики, сурки, крысы и др. Во время эпидемии источником чумы также является больной человек. Переносчики: блохи.

Пути заражения чумой многообразны. В зависимости от входных ворот инфекции формируются различные клинические формы заболевания, что определяет выбор материала для микробиологического исследования (табл. 10).

Патогенез. Возбудитель попадает в регионарные лимфатические узлы, размножается, вызывает их воспаление. Формируются бубоны. Лимфоузлы утрачивают барьерную функцию и процесс генерализуется. В органах и тканях возникают септико-пиемические очаги.

Чума может проявляться как первично-септической формой, так и вторично-септической, в которую переходят другие клинические формы (поэтому кровь забирают всегда, независимо от формы заболевания).

Микробиологическая диагностика.

1.Экспрессные методы:

• бактериоскопический;

• РИФ, ИФА (для определения антигенов возбудителя в исследуемом материале);

2. Бактериологический (основной) метод с идентификацией методом фаготипирования и в пробе на лабораторных животных. Проводится в специальных лабораториях противочумных учреждений.

3.Молекулярно-биологический: ПЦР.

Специфическая профилактика проводится по эпидемическим показаниям живой чумной вакциной из штамма EV.

91. Характеристика возбудителя туляремии, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Возбудитель – Francisella tularensis.

Морфо-тинкториальные свойства: мелкие грамотрицательные палочки, спор и жгутиков не имеют, в организме образуют капсулу.

Культуральные свойства: аэробы, требовательны к условиям культивирования, растут на специальных питательных средах (кровяной агар с цистеином или желточные среды), температурный оптимум 37⁰С. В связи со сложностями культивирования и высокой контагиозностью возбудителя бактериологическое исследование проводится только в специализированных лабораториях противочумных учреждений.

F.tularensis – факультативный внутриклеточный паразит.

Факторы патогенности:

1. Капсула;

2. Высокая инвазивность;

3. Эндотоксин (ЛПС) предотвращает лизис микроба при фагоцитозе.

Туляремия – природно-очаговая, зоонозная, особо опасная инфекция, характеризующаяся лихорадкой, интоксикацией, поражением лимфатических узлов и внутренних органов.

Основные источники инфекции: грызуны (водяные крысы, ондатры, зайцы, мыши). Больной человек не является источником инфекции.

Переносчики инфекции: клещи, комары, слепни.

Заражение человека происходит несколькими путями, которые определяют клинические формы туляремии (табл. 11).

Патогенез. Проникая в организм, возбудитель по лимфатическим путям попадает в регионарные лимфоузлы, где вызывает воспаление и развитие бубона. Затем он попадает в органы РЭС, возникают гранулемы. Процесс генерализуется, возможно образование очагов некроза в различных органах и тканях.

При отсутствии лечения летальность до 30%.

Микробиологическая диагностика туляремии.

1. Экспрессный метод: РИФ для определения туляремийных Аг в материале от больного (пунктат из бубонов, отделяемое конъюнктивы, мазок из ротоглотки, мокрота).

2. Серологический метод (основной): РА, РНГА, ИФА, РИФ.

3. Аллергологический метод: проба с тулярином, положительна с 3-5 дня заболевания и у людей, переболевших туляремией.

4. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

Специфическая профилактика проводится по эпидпоказаниям живой туляремийной вакциной (Эльберта-Гайского).

92. Характеристика возбудителя сибирской язвы, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель – Bacillus anthracis.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительная крупная палочка, жгутиков не имеет, образует белковую капсулу. В неблагоприятных условиях (в почве) формирует центрально расположенную спору. Диаметр споры не превышает диаметра клетки. В мазках из чистых культур и из нативного материала бациллы располагаются цепочкой.

Культуральные свойства: растет на простых питательных средах, на МПА образует волокнистые R-колонии с бахромчатыми краями, которые при просмотре под малым увеличении микроскопа напоминают «львиную гриву», в МПБ дает придонный рост в виде «комочка ваты». Возбудитель вирулентен в R-форме.

Факторы патогенности:

1. Капсула защищает от фагоцитоза и способствует адгезии бацилл на клетках организма.

2. Основной фактор патогенности экзотоксин, содержащий 3 фактора, которые по отдельности не проявляют токсическое действие:

летальный фактор обладает цитотоксическим действием, избирательно поражает макрофаги, может вызывать отек легких с летальным исходом;

отечный фактор повышает проницаемость сосудов и вызывает отек различных тканей;

протективный антиген координирует сборку отечного и летального факторов.

Сибирская язва – типичная зоонозная особо опасная инфекция, характеризующаяся воспалением кожи, поражением внутренних органов и тяжелой интоксикацией.

Источники инфекции для человека: больные животные (лошади, крупный и мелкий рогатый скот, свиньи и др.). Резервуаром инфекции является почва, содержащая споры B.anthracis. Больной человек не является источником инфекции.

Патогенез. После попадания в организм споры возбудителя фагоцитируются макрофагами, переходят в вегетативную форму микроба, начинается его размножение. Продукция отечного и летального факторов вызывает отеки и некротические повреждения в месте локализации микроорганизма. Затем развивается бактериемия и токсинемия.

Пути заражения могут быть различными, при этом формируются соответствующие клинические формы (табл. 9).

Все клинические формы заболевания сопровождаются генерализацией процесса (сепсис) с летальностью от 20% (при кожной форме) до 100% (при легочной форме).

Микробиологическая диагностика сибирской язвы.

1. Экспрессные методы: бактериоскопический, риф.

2. Молекулярно-биологический: ПЦР.

3. Бактериологический (основной) метод.

4. Аллергологический (вспомогательный): проба с антраксином, положительна с 6-7 дня заболевания.

Для определения сибиреязвенного антигена в объектах внешней среды (трупный материал, шкуры, шерсть, кости, почва и др.) используют реакцию термокольцепреципитации по Асколи.

Специфическая профилактика сибирской язвы проводится по эпидпоказаниям живой сибиреязвенной вакциной СТИ; для специфического лечения и экстренной профилактики используют иммуноглобулин противосибиреязвенный лошадиный.

93. Общая характеристика представителей семейства Enterobacteriaceae.

По современной классификации семейство Enterobacteriaceae включает 44 рода, часть из которых имеет медицинское значение: Escherichia, Klebsiella, Yersinia, Citrobacter, Enterobacter, Proteus, Shigella, Salmonella и др.

Энтеробактерии – грамотрицательные палочки, спор не образуют, есть подвижные и неподвижные варианты, не требовательны к питательным средам. В связи с различной биохимической активностью идентификацию энтеробактерий до рода проводят по биохимическим свойствам.

Генетическая изменчивость. Отличительной особенностью семейства энтеробактерий является чрезвычайно высокий диапазон генетической изменчивости, обусловленный плазмидными факторами: R-плазмиды (кодируют устойчивость к нескольким антибиотикам), плазмиды патогенности, F-плазмиды и др. В результате обмена плазмидами (внехромосомная изменчивость) у энтеробактерий могут появляться разнообразные новые признаки, в том числе, усиливающие их вирулентность.

Антигенная структура:

О – соматический антиген;

H – жгутиковый антиген (у подвижных форм); К – капсульные (поверхностные) антигены.

Изучение антигенной структуры энтеробактерий имеет диагностическое значение для их окончательной идентификации.

Факторы патогенности энтеробактерий:

1. Адгезины – структуры, осуществляющие прикрепление к эпителиальным клеткам кишечника (пили, ЛПС наружной мембраны).

2. Инвазины – структуры и вещества, способствующие проникновению в эпителиальные клетки кишечника, иногда с размножением в них (капсула, ферменты инвазии).

3. Токсинопродукция – выработка экзоэнтеротоксина и/или эндотоксина.

4. К-антигены – определяют устойчивость бактерий к фагоцитозу.

5. R-плазмиды.

6. Эклипсные антигены с тканью кишечника.

7. «Острова патогенности» – хромосомные и внехромосомные гены, отвечающие за синтез адгезинов, инвазинов, различных токсинов и факторов множественной устойчивости к антибиотикам.

94. Характеристика банальных эшерихий, их функции, роль в патологии.

К роду Escherichia относят банальные и диареегенные E.coli.

Банальные E.coli – представители облигатной (резидентной) микробиоты кишечника, условно-патогенные микроорганизмы.

Морфология эшерихий: грамотрицательные палочки, средних размеров, спор не образуют, некоторые могут формировать микрокапсулу, подвижны (перитрихи).

Культуральные свойства: на среде Эндо чаще образуют колонии, окрашенные в красный цвет (лактозопозитивные), реже – колонии бесцветные или цвета среды (лактозонегативные варианты банальных эшерихий при кишечном дисбиозе).

Биохимические свойства: эшерихии обладают высокой биохимической активностью, ферментируя углеводы до кислоты и газа. Изучение биохимических свойств эшерихий проводят с помощью специальных тест-систем.

Банальные эшерихии выполняют в макроорганизме важные физиологические функции, присущие нормальной микробиоте (см. учебно-методическое пособие по разделу «Физиология и экология микроорганизмов»).

Из них наиболее существенными являются:

• антагонистическая функция по отношению к некоторым патогенным бактериям, главным образом, возбудителям кишечных инфекций (сальмонеллы, шигеллы, вибрионы);

• иммуномодулирующая и иммуностимулирующая функции: оказывают постоянное антигенное стимулирующее действие, что способствует развитию лимфоидной ткани кишечника, синтезу секреторных и сывороточных IgA, активации фагоцитоза, формированию и нормальному функционированию иммунной системы;

• витаминообразующая функция: участвуют в энтеральном синтезе витаминов (группы В, К, никотиновая кислота и др.);

• участвуют в липидном и водно-солевом обмене, участвуют в обмене желчных кислот.

При снижении резистентности организма банальные E.coli могут вызывать эндогенные гнойно-воспалительные процессы различной локализации (парентеральные эшерихиозы).

Эшерихии, вызывающие инфекционный процесс внекишечной локализации, подразделяют на 3 группы:

• MENEC – менингиальные (имеют микрокапсулу, которая подав- SEPEC – септические ляет фагоцитоз)

• UPEC – уропатогенные (имеют специальные структуры для адгезии на клетках эпителия мочевыводящих путей).

Клинические формы вызываемых ими заболеваний полиморфны:

менингиты, сепсис, уретриты, циститы, пиелонефриты и др. При высокой обсемененности пищевых продуктов банальные кишечные палочки вызывают пищевые отравления (экзогенная инфекция). Банальные эшерихии, приобретая полирезистентность к антибиотикам, становятся возбудителями внутрибольничных инфекций.

95. Диареегенные эшерихии. Микробиологическая диагностика кишечных эшерихиозов.

Диареегенные E.coli являются облигатно-патогенными микроорганизмами. По морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам диареегенные эшерихии практически не отличаются от банальных E.coli. Их можно дифференцировать только по антигенным свойствам.

Антигенная характеристика:

• О-антиген (более 160 вариантов);

• Н-антиген (более 60 вариантов);

• К-антиген (более 100 вариантов).

Серологические варианты (серовары) диареегенных эшерихий обозначают антигенной формулой чаще по сочетанию О- и Н-антигенов. Например: E.coli О157:Н7. В практике идентификацию возбудителей кишечных эшерихиозов, как правило, проводят до серогруппы. Серогруппу обозначают по О-антигену, например, E.coli О157.

Диареегенные E.coli вызывают острые кишечные инфекции – кишечные эшерихиозы (коли-инфекции). Их относят к экзогенным инфекциям.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Путь заражения: алиментарный.

Факторы передачи: вода и пищевые продукты. Чаще болеют дети до 3-х лет.

В зависимости от механизма патогенного действия и клиники вызываемых заболеваний диареегенные E.coli подразделяют на 5 основных категорий.

Категория	Серо- группы	Клинические формы	Механизм патогенного действия
ЕРЕС (энтеропатогенные)	О55, О111 и др.	Продолжительная водянистая диарея (чаще у детей первого года жизни).	адгезия и размножение на энтероцитах; цитотоксическое действие.
ETEC (энтеротоксигенные)	О6, О8 и др.	Холероподобные эшерихиозы у детей и взрослых.	адгезия и размножение на энтероцитах; продукция экзоэнтеротоксина, сходного с экзотоксином возбудителя холеры.
EAggEC (энтероагрегативные)	О77, О86	Водянистая диарея с обезвоживанием у детей младшего возраста и путешественников.	диффузная адгезия на энтероцитах, секреция слизи за счет действия экзотоксинов.
EIEC (энтероинвазивные)	О28, О124 и др.	Дизентериеподобные эшерихиозы у детей старшего возраста и у взрослых.	адгезия на колоноцитах; инвазия, размножение в цитоплазме, разрушение колоноцитов, язвенное воспаление.
EHEC (энтерогеморрагические)	О157, О145	Кратковременная водянистая диарея, быстро сменяющаяся гемодиареей (кровавый понос). Болеют дети и взрослые.	адгезия на колоноцитах; инвазия; продукция экзоэнтеротоксина, сходного с экзотоксином шигелл.

Исследуемый материал: фекалии больного.

Методы диагностики.

1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо и др.). Идентификация выделенной культуры:

а) по биохимическим признакам (до вида) с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным признакам (чаще до серогруппы, реже – до серовара) с

помощью РА с соответствующими диагностическими сыворотками.

2. Молекулярно-биологический метод: ПЦР (определение генов вирулентности диареегенных эшерихий).

96. Характеристика клебсиелл, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Род Klebsiella относят к семейству энтеробактерий. Он включает 3 основных вида микроорганизмов, имеющих наибольшее значение в патологии человека: K.pneumoniae (с подвидами pneumoniae, rhinoscleromatis, ozaenae), K.oxytoca, K.granulomatis.

Морфология: грамотрицательные палочки, спор и жгутиков не образуют, формируют капсулу как в организме (in vivo), так и на питательных средах (in vitro).

Культуральные свойства: растут на обычных питательных средах. В МПБ – диффузное помутнение; на МПА – крупные слизистые колонии.

Факторы патогенности: адгезины, капсула, R-плазмиды, эндотоксин, βлактамазы.

Микробиологическая диагностика клебсиеллезных инфекций.

1. Бактериологический метод (основной): посев на среду Эндо с последующей идентификацией выделенной культуры до вида и подвида.

2. Микроскопический метод: окраска по Бурри-Гинсу с целью выявления капсулы.

3. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4. Цитологический метод (для диагностики склеромы): обнаружение гигантских клеток Микулича в срезах и отпечатках пораженных тканей. Клетки Микулича – это макрофаги, в вакуолизированной цитоплазме которых находятся фагоцитированные палочки склеромы.

97. Кишечный дисбиоз. Причины формирования.

Кишечный эубиоз – это эволюционно сложившееся качественное (видовое) и количественное соотношение симбионтной микрофлоры кишечника, поддерживающее гомеостаз здорового человека.

Кишечный дисбиоз – клинико-лабораторный синдром, характеризующийся изменением качественного и/или количественного состава нормофлоры толстого кишечника.

Этот синдром обычно вторичен, т.к. формируется на фоне какого-либо основного заболевания. Следовательно, тактика врача должна быть направлена на диагностику и лечение основного заболевания в сочетании с коррекцией дисбиоза.

В официальной международной классификации болезней (МКБ-10) заболевания с названием «дисбактериоз» нет. За рубежом существует диагноз «синдром избыточного бактериального роста». Он ставится при обнаружении в 1 мл содержимого тонкой кишки >10⁵ микроорганизмов и/или появлении в ней флоры, характерной для толстой кишки.

Основные причины формирования кишечных дисбиозов:

1. Недоношенность, внутриутробное инфицирование, бактериальные вагинозы у беременных женщин.

2. Позднее прикладывание ребенка к груди, раннее искусственное вскармливание, длительное пребывание в родильном роме, частые ОРВИ, аллергические заболевания; у взрослых – неправильный режим питания.

3. Патология желудочно-кишечного тракта микробной природы (кишечные инфекции, вирусный гепатит и др.) и немикробной природы (хронический гастрит, язвенная болезнь желудка, дисферментоз, заболевания печени, поджелудочной железы).

4. Микробные заболевания других органов и тканей (сепсис, пневмония, гнойная хирургическая инфекция и др.).

5. Длительная антибиотико-, химио- и гормонотерапия.

6. Облучение, лучевая терапия, прием цитостатиков и иммунодепрессантов.

7. Длительное пребывание в стационарах различного профиля, интернатах и, как следствие, колонизация (заселение) кишечника госпитальными штаммами микроорганизмов (золотистый стафилококк, клебсиеллы, синегнойная палочка и др.).

98. Микробиологическая диагностика кишечного дисбиоза, принципы коррекции.

Материал на исследование: фекалии.

Основной метод диагностики: бактериологический.

«Чтобы отличить так называемые временные вариации состава микробиоты от дисбиоза необходимо проведение 2-3-кратных исследований с интервалом 1-2 дня» (цит. по Меньшикову В.В. «Методики клинических лабораторных исследований», 2009). Фекалии забирают в стерильный контейнер при помощи стерильной ложки, впаянной в крышку контейнера из средней или последней порции фекалий после естественной дефекации, у новорожденных – с пеленки или памперса. Материал необходимо доставить в лабораторию не позднее 2 часов от момента забора. Фекалии (1 г) помещают в стерильную пробирку с тиогликолевым буфером, обеспечивающим оптимальные условия для сохранения анаэробов. Затем производят десятикратные разведения фекалий в этом буфере от 10^-1 до 10^-9. Из разведений производят высевы пипеткой по 0,1 мл на соответствующие питательные среды. После термостатирования производят макро- и микроскопическое изучение выросших колоний, а также определяют количество микроорганизмов в 1 г фекалий.

Принципы коррекции кишечных дисбиозов.

1. Дието-, ферменто- и витаминотерапия – для регулирования процессов пищеварения и стимулирования реактивности организма.

2. Препараты для восстановления нормальной микробиоты (эубиотики).

3. Фаготерапия.

4. Противогрибковые препараты.

5. Иммунотропные препараты. Бактериотерапия.

1. Пробиотики – препараты на основе живых микроорганизмов. Их назначают при значительном снижении количества резидентных микроорганизмов. К пробиотикам относят:

а) монокомпонентные препараты из представителей резидентной ки-

шечной микрофлоры:

- бифидумбактерин – из одного или нескольких штаммов бифидобактерий (для лечения детей и взрослых). Особенно показано применение бифидумбактерина детям первого года жизни.

Бифидобактерии:

▪ расщепляют молочный сахар до кислоты, и тем самым создают в кишечнике кислую реакцию среды, что подавляет размножение гнилостных бактерий;

▪ улучшают всасывание кальция и витамина Д в кишечнике, что способствует профилактике рахита у младенцев;

▪ участвует в энтеральном синтезе витаминов группы В, К и др.;

▪ стимулируют иммунную систему организма.

- лактобактерин – из одного или нескольких штаммов лактобактерий;

- колибактерин – из штамма бактерий E.coli М-17. Назначают детям старше 6 месяцев и взрослым. Особенно эффективен при наличии значительного количества лактозонегативных и гемолитических эшерихий, а также для лечения постдизентерийных дисбактериозов, длительной диареи. Обладает выраженным антагонистическим действием.

б) комбинированные препараты пробиотиков: например, линекс из лактобактерий и энтерококков; бификол из бифидобактерий и E.coli М-17.

в) препараты из напатогенных бацилл применяют для уменьшения из-

быточного роста микроорганизмов: бактисубтил содержит бактерии штамма Bacillus cereus IP 5832 (10⁹ спор). Препарат назначают при острой и хронической диареи различного генеза (включая инфекционную), кишечном дисбактериозе (особенно после лечения антибиотиками широкого спектра действия), энтерите, энтероколите; для профилактики и лечения нарушений функций кишечника, вызванных химио- или радиотерапией.

2. Пребиотики – вещества, являющиеся питательным субстратом для нормальной флоры кишечника и стимулирующие ее рост и размножение: хилак-форте, лактулоза и др. Эффективность действия пробиотиков значительно усиливается при совместном применении с пребиотиками.

2. Синбиотики – комбинация про- и пребиотиков.

Фаготерапия.

Используют при значительном увеличении в кишечнике условнопатогенных микроорганизмов. Назначение бактериофагов для лечения дисбиозов возможно только после предварительного определения чувствительности выделенной культуры к соответствующему бактериофагу. Все бактериофаги назначают по инструкции, прилагаемой к препарату.

Стафилококковый бактериофаг применяют при дисбактериозах со значительным выделением из фекалий стафилококка (более 10⁴ в 1 г). Назначают детям и взрослым.

Бактериофаг псевдомонас аэругиноза применяют при дисбактериозах, обусловленных синегнойной палочкой. Назначают детям и взрослым.

Клебсиеллезный поливалентный бактериофаг и бактериофаг клебсиелл пневмонии применяют при увеличении количества клебсиелл.

Коли-протейный бактериофаг – смесь бактериофагов, активных в отношении наиболее распространенных диареегенных эшерихий, а также протеев.

Пиобактериофаг содержит бактериофаги, активные в отношении стафилококков, стрептококков, энтерококков, клебсиелл, эшерихий, протеев, синегнойной палочки.

Интестибактериофаг содержит бактериофаги, лизирующие шигеллы, сальмонеллы, патогенные эшерихии, энтерококки, стафилококки, протей, синегнойную палочку.

Противогрибковые препараты: нистатин, флуконазол и др. применяют при грибковых (чаще кандидозных) дисбактериозах.

Иммунотропные препараты: комплексный иммуноглобулиновый препарат (КИП) содержит иммуноглобулины человека, в основном IgА, IgМ, IgG против патогенной и условно-патогенной микробиоты, эффективен при коррекции дисбиоза кишечника, обусловленного условно-патогенной микрофлорой.

99. Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов.

Возбудителей брюшного тифа относят к роду Salmonella, который включает более 2500 серотипов. Современная классификация сальмонелл основана на строении их ДНК и включает только 2 вида, из которых патогенным для человека является вид Salmonella enterica с 6 подвидами и множеством серотипов в каждом. Это связано с изменчивостью генов, кодирующих синтез белков (флагеллинов) жгутиков. По современной номенклатуре возбудителя брюшного тифа, как и возбудителей паратифов, относят к подвиду еntericа и обозначают как S.еntericа еntericа, серотип typhi. Однако, во избежание путаницы, используют следующие названия возбудителей, соответственно их серотипу:

• возбудитель брюшного тифа – S.typhi;

• возбудитель паратифа А – S.paratyphi A;

• возбудитель паратифа В – S.paratyphi B; - возбудитель паратифа С – S.paratyphi C.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, перитрихи, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: растут на простых питательных средах: МПА (S-колонии), МПБ, 20% желчном бульоне (диффузно-мутящий рост). На дифференциально-диагностических средах Плоскирева и Эндо все виды сальмонелл образуют бесцветные или цвета среды колонии, т.к. не ферментируют лактозу, на висмут-сульфитном агаре возбудители брюшного тифа растут в виде черных колоний с металлическим блеском и почернением подлежащей среды.

Биохимические свойства: сальмонеллы биохимически менее активны, чем эшерихии. S.typhi ферментирует углеводы до кислоты, S.рaratyphi А и В до кислоты и газа. Изучение биохимических свойств сальмонелл проводят с помощью энтеротест-систем.

Антигенная структура сальмонелл:

О – соматический антиген;

Н – жгутиковый антиген;

К – оболочечные антигены.

В системе оболочечных антигенов у S.typhi присутствует Vi-антиген (у вирулентных штаммов), являющийся рецептором для Vi-бактериофагов.

На основании определения основных антигенов сальмонелл Ф. Кауфман и рак. Уайт построили их классификацию (табл.1). Согласно этой классификации сальмонеллы делят на серогруппы (по наличию общих О-антигенов), которые обозначают буквами латинского алфавита: A, B, C и т.д.

Согласно схеме Кауфмана-Уайта, S.typhi относят к группе Д, S.рaratyphi A, S.paratyphi B, S.paratyphi C к группам А, В, С соответственно. Дифференциация серотипов сальмонелл внутри группы проводится по Н-антигену.

Факторы патогенности сальмонелл:

1. Адгезины для прикрепления сальмонелл к энтероцитам с помощью pili.

2. Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в макрофаги лимфоидной ткани тонкого кишечника (пейеровы бляшки) и размножение в них.

3. Vi и K-антигены обеспечивают защиту от фагоцитоза.

4. Эндотоксин (ЛПС).

5. R-плазмиды (кодируют формирование устойчивости к нескольким антибиотикам).

6. Острова патогенности (хромосомные гены, которые кодируют способность к адгезии, инвазии, защите от фагоцитоза).

Механизмы патогенного действия эндотоксина сальмонелл на макроорганизм:

1. Вызывает выработку в организме веществ, обусловливающих лихорадочное состояние.

2. Приводит к расстройствам гемодинамики, резкому снижению артериального давления.

3. Оказывает токсическое действие на нервную систему.

4. Вызывает выраженную лейкопению.

5. Активирует синтез простагландинов, что приводит к повышению цАМФ, гиперсекреции солей и воды из клеток в просвет кишечника. Возникает диарея.

Брюшной тиф – острое антропонозное кишечное инфекционное заболевание, характеризующееся поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника, паренхиматозных органов, бактериемией, лихорадкой с явлениями общей интоксикации (головная боль, помрачение сознания, бред, галлюцинации) и розеолезными высыпаниями на коже.

Особенности современного течения брюшного тифа:

• менее выраженная симптоматика;

• короткий период лихорадки;

• редко возникает status typhosis (помрачение сознания, бред, галлюцинации);

• частые рецидивы;

• преобладают стертые и абортивные формы (короткое течение, отсутствие розеолезных высыпаний и поражений внутренних органов).

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды и молочных продуктов.

Основную роль в заражении брюшным тифом играют бактерионосители, которые могут выделять сальмонеллы в течение многих лет.

Патогенез: из ротовой полости сальмонеллы попадают в тонкий кишечник, где внедряются в энтероциты, лимфатический аппарат тонкого кишечника, а затем попадают в кровь (бактериемия и интоксикация). С током крови сальмонеллы попадают в паренхиматозные органы: печень, почки, селезенка, костный мозг, где они размножаются в макрофагах. Далее происходит выделение сальмонелл с фекалиями, мочой и другими биологическими жидкостями. Выделение бактерий с желчью приводит к повторному попаданию их в тонкий кишечник и внедрению в лимфатический аппарат. Развивается аллергическая воспалительная реакция замедленного типа с образованием язвенных поражений стенки тонкой кишки.

Клиника: подъем температуры, лихорадка, интоксикация, увеличение печени и селезенки. Вследствие образования язвенных дефектов в стенке тонкой кишки – развитие кишечных кровотечений и перфорации стенки.

Клиника паратифов отличается более острым началом и менее тяжелым течением.

Материал на исследование: кровь (в стадии бактериемии на первой неделе заболевания), фекалии, моча, желчь, сыворотка крови (со второй недели заболевания).

100. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и брюшнотифозного носительства.

1. Бактериологический метод: посев крови производят на желчный бульон, фекалии, мочу и желчь засевают на плотные питательные среды. Идентификацию чистой культуры проводят:

а) по биохимическим признакам (до рода) с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным признакам (до серогруппы, а затем до серотипа) в РА на

стекле с диагностическими сыворотками;

в) фаготипированием (в эпидемиологических целях для установления ис-

точника инфекции).

2. Серологический метод: со 2-й недели заболевания сыворотку крови больного исследуют с помощью ИФА и в РНГА с O- и Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Брюшной тиф – это заболевание, при котором нередко после выздоровления формируется носительство в связи с длительным сохранением сальмонелл в различных органах, чаще в желчном пузыре.

Современной особенностью эпидемиологии брюшного тифа является:

▪ увеличение частоты завоза инфекции с эндемичных территорий;

▪ высокий эпидемиологический риск за счет лиц без определенного места жительства, среди которых регистрируется высокая заболеваемость брюшным тифом.

С целью выявления брюшнотифозных бактерионосителей обследуют: а) лиц, переболевших брюшным тифом и паратифом;

б) лиц, бывших в контакте с больными брюшным тифом и паратифом;

в) здоровых лиц (работников пищевых, детских и лечебных учреждений, а

также учреждений системы водоснабжения);

г) лиц с лихорадкой неясной этиологии более 5 дней.

Микробиологическая диагностика брюшнотифозного носительства.

1. Серологический метод:

а) ИФА – для определения IgG, как маркеров ранее перенесенного заболевания;

б) РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Vi-антитела быстро исчезают после полного выздоровления, но при наличии брюшнотифозного носительства присутствуют постоянно.

Все лица, сыворотки которых дали положительный результат в ИФА и РНГА, подлежат тщательному многократному бактериологическому обследованию.

2. Бактериологический метод проводится по обычной схеме (см. выше бактериологическую диагностику брюшного тифа). На исследование забирают фекалии и мочу 5-кратно с интервалом 1-2 дня и однократно желчь. Окончательный диагноз брюшнотифозного носительства может быть установлен только после выделения возбудителя из исследуемого материала.

Специфическая профилактика брюшного тифа проводится по эпидемическим показаниям химической сорбированной брюшнотифозной вакциной, обогащенной Vi-антигеном (малоэффективна).

Существует фагопрофилактика с использованием брюшнотифозного бактериофага.

101. Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

Основным возбудителем внутрибольничных сальмонеллезов является S.typhimurium, который отличается множественной устойчивостью к антибиотикам, дезинфектантам, антисептикам и не лизируется типовыми сальмонеллезными бактериофагами.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-пылевой: при вдыхании воздуха, содержащего пылевые частицы с адсорбированными на них сальмонеллами; контактнобытовой: через руки персонала и больных, аппаратуру (эндоскопы, зонды, аппараты для ИВЛ и др.), предметы ухода за больными; алиментарный. Наиболее восприимчивы к инфекции дети до 1 года, поэтому заболевания чаще регистрируют в детских стационарах среди новорожденных.

Клинические формы:

• гастроинтестинальная – гастроэнтериты с резким обезвоживанием организма и интоксикацией.

• генерализованная – септицемия, менингит с высокой летальностью.

102. Характеристика возбудителей дизентерии, микробиологическая диагностика.

Возбудителей бактериальной дизентерии относят к роду Shigella. По международной классификации выделяют 4 основных вида: S.dysenteriae (Григорьева-Шига), S.flexneri, S.sonnei, S.boydii.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, неподвижны, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: на средах Эндо и Плоскирева образуют лактозонегативные колонии, т.к. не ферментируют лактозу. На селенитовой (накопительной) среде – диффузное помутнение.

Биохимические свойства: биохимически менее активны, чем эшерихии и сальмонеллы. Изучение биохимических свойств проводят с помощью энтеротест-систем.

Антигенная структура шигелл:

О – соматический антиген;

К – оболочечные антигены.

Факторы патогенности шигелл:

1. Адгезины для прикрепления шигелл к колоноцитам с помощью pili, а также липополисахаридов наружной мембраны.

2. Инвазины (кодируются плазмидами) для проникновения в эпителиальные клетки толстого кишечника и размножение в них. В результате происходит разрушение эпителия и образование язв.

3. Белки внутриклеточного распространения вызывают лизис мембран колоноцитов, что обеспечивает межклеточное распространение шигелл.

4. Экзоэнтеротоксин. Его продукция наиболее выражена у S.dysenteriae (в 1000 раз выше, чем у других видов). Экзоэнтеротоксин шигелл состоит из 2 субъединиц: А и В. А-субъединица – собственно токсическая, нарушает синтез белка в клетках эпителия толстого кишечника и эндотелия капилляров; Всубъединица способствует прикреплению токсина к клеткам эпителия кишечника и проникновению в клетку А-субъединицы.

5. Эндотоксин (угнетает фагоцитоз и вызывает поражение слизистой оболочки толстого кишечника).

6. R-плазмиды кодируют формирование устойчивости к нескольким антибиотикам.

7. Эклипсные антигены с тканью толстого кишечника.

Дизентерия – кишечное инфекционное заболевание, характеризующееся поражением дистальных отделов толстого кишечника и интоксикацией. Классическими симптомами заболевания являются жидкий стул с примесью слизи и крови («инфекционный гемоколит»), а также тенезмы (резкие болевые ощущения в области ануса), которые создают ложные позывы к дефекации.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель. Болеют чаще дети в возрасте до 10 лет.

Путь заражения: алиментарный через инфицированную воду и пищевые продукты. Заболевание имеет выраженную сезонность – летне-осенний период.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика дизентерии.

1. Бактериологический метод (основной): из фекалий для посева забирают слизистые и гнойные комочки с примесью крови. Посев исследуемого материала производят на дифференциально-диагностическую среду Плоскирева и накопительную селенитовую среду.

Выделенную культуру идентифицируют:

а) по биохимическим признакам с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным свойствам (в РА на стекле с диагностическими сыворотками).

2. РНГА по Рыцаю, РИФ: для определения шигеллезного антигена в фекальном материале.

После перенесенных брюшного тифа и дизентерии у человека формируется стойкий кишечный дисбактериоз, требующий длительной корригирующей терапии. Специфическое лечение и профилактика не разработаны.

103. Микробиологическая характеристика хеликобактериозов.

Возбудителей хеликобактериозов относят к семейству Helicobacteriaceae, роду Helicobacter: H.pylori, H.fenneliae (вызывает гастроэнтериты, колиты, сепсис).

Морфология: спиральные грамотрицательные палочки, имеющие Sобразную форму. Спор и капсул не имеют. Лофотрихи.

Культуральные свойства сходны с кампилобактериями.

Факторы патогенности H.pylori:

1. Адгезины (для прикрепления к гастроцитам).

2. Ферменты инвазии: уреаза, муциназа и др.

3. Цитотоксины.

4. Острова патогенности (гены, кодирующие синтез цитотоксинов).

Источник инфекции: человек, а также домашние животные.

Пути передачи: алиментарный, контактный (со слюной), возможно заражение контактно-бытовым путем.

H.pylori причастен к возникновению гастритов, язв желудка и двенадцатиперстной кишки, аденокарциномы желудка.

Материал на исследование: биоптаты слизистой желудка.

Методы микробиологической диагностики.

1. Микроскопия биоптатов желудка.

2. Определение уреазной активности биоптатов желудка.

3. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4. Бактериологический метод (малоэффективен).

104. Характеристика кампилобактерий, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Возбудителей кампилобактериозов относят к роду Campylobacter, семейству Campylobacteriaceae: C.jejuni, C.coli, C.fetus, C.upsaliensis.

Морфология: тонкие, грамотрицательные изогнутые палочки, имеющие форму запятой, латинской буквы S, крыльев летящей чайки. Спор и капсул не образуют, монотрихи.

Культуральные свойства: микроаэрофилы, растут на специальных средах с добавлением крови при пониженной (5-10%) концентрации кислорода. Температурный оптимум 42⁰С. Патогенные виды культивируют в присутствии газовой смеси (5% О₂, 10% СО₂, 85% N₂). Рост на плотной среде в виде росинок или капель прозрачной воды.

Факторы патогенности кампилобактерий:

1. Адгезины (для прикрепления к эпителию кишечного тракта).

2. Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в эпителиальные клетки тонкого и толстого кишечника.

3. Токсинопродукция (выработка эндотоксина, экзоэнтеротоксина, цитотоксина).

Источником инфекции при всех кампилобактериозах являются сельскохозяйственные животные и птицы, в некоторых случаях – собаки и кошки.

Пути заражения: алиментарный (через инфицированную воду и пищевые продукты), контактный (при уходе за животными).

Основные клинические проявления:

- гастроэнтериты с диареей, лихорадкой и болью в животе; - колиты (боли в животе, имитирующие острый аппендицит); - внекишечные формы – чаще реактивный артрит.

C.fetus вызывает сепсис, тромбофлебит, менингоэнцефалит. Может вызвать самопроизвольные аборты с внутриутробным инфицированием плода.

Материал на исследование: фекалии, кровь, ликвор.

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов.

1. Бактериологический метод с идентификацией выделенной культуры по биохимическим и антигенным признакам.

Серологический метод: РСК, РИФ, ИФА

105. Характеристика возбудителей холеры, микробиологическая диагностика.

Возбудителями холеры являются: Vibrio cholerae, Vibrio El-Tor (основной) и Vibrio О-139 «Бенгал», относящиеся к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio, виду V.choleraе.

Морфология: грамотрицательные, слегка изогнутые в виде запятой палочки средних размеров, монотрихи, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, хорошо растут на щелочных средах (pH 8,5-9,0). В 1% пептонной воде через 6-8 часов образуют нежную пленку. На щелочном агаре образуют гладкие прозрачные с голубоватым оттенком колонии.

Биохимические свойства: по классификации Хейберга, на основании способности ферментировать сахарозу, маннозу и арабинозу, представители рода Vibrio разделены на 8 групп. Возбудителей холеры относят к 1 группе Хейберга: расщепляют сахарозу и маннозу, не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О – соматический антиген (специфический);

Н – жгутиковый антиген (неспецифический).

По различию строения О-антигена представители вида Vibrio cholerae подразделяют на 206 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются серогруппы О1 и О139«Бенгал». V.cholerae и V.El-Tor относят к О1 серогруппе.

Они представлены 3 сероварами: Огава, Инаба и Гикошима. Чаще холеру вызывают серовары Инаба и Огава.

Несмотря на общность морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, V.cholerae и V.El-Tor являются разными биологическими вариантами (биоварами), т.к. отличаются по некоторым биологическим (фено- и генотипическим) свойствам. Серогруппа О1 (V.El-Tor) вызывает холерные пандемии с высокой смертностью в развивающихся странах. Серогруппа О139«Бенгал» вызывает холероподобные заболевания.

Факторы патогенности возбудителей холеры:

1. Адгезины – pili для прикрепления к энтероцитам.

2. Нейраминидаза способствует прикреплению фракции В холерного экзотоксина к рецепторам энтероцитов.

3. Экзоэнтеротоксин – белок, состоящий из двух субъединиц: А и В. Субъединица В взаимодействует с рецепторами энтероцитов и обусловливает проникновение в них субъединицы А. А-субъединица – собственно токсическая, активирует аденилатциклазу, что приводит к увеличению цАМФ, гиперсекреции солей и воды в просвет кишечника. Развивается диарея, сопровождающаяся резким обезвоживанием организма.

Холера – особо опасное инфекционное заболевание.

Источники инфекции: больной человек или вибрионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды или пищевых продуктов.

Микробиологические и эпидемиологические особенности современной холеры

1. Основной возбудитель (95-99%) V.El-Tor (серогруппы О1).

2. Антисанитарные условия окружающей среды в эндемичных районах и местах поселения мигрантов, беженцев и др., где не удовлетворяются потребности в чистой воде и средствах гигиены.

3. Последствия технических катастроф с разрушением систем водоснабжения.

4. Высокая скорость распространения заболевания (обусловлена скоростными транспортными средствами).

5. Значительный процент вибрионосительства в эндемичных очагах (ЮгоВосточная Азия, Африка, Латинская Америка) с легким клиническим течением холеры.

Клиническая картина заболевания: основными клиническими формами заболевания является холерный энтерит и гастроэнтерит. Первым клинически выраженным признаком является диарея. Частота стула от 3-10 раз (при легких формах) до 200-300 раз в сутки (при тяжелых формах). Может быть обильная рвота фонтаном, не сопровождающаяся тошнотой. Потеря жидкости без лечения может достигать до 10-15% от массы тела больного и приводит к резкому нарушению водно-электролитного баланса организма. В результате возникает холерный алгид – клиническая форма, которая характеризуется снижением тургора кожи, нарушением функции сердечно-сосудистой, дыхательной и мочевыделительной системы, падением температуры тела ниже нормы. Отсюда название этой формы заболевания от лат. algidus – холодный.

Материал на исследование: испражнения и рвотные массы.

Микробиологическая диагностика холеры.

1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала на 1% пептонную воду и щелочной агар.

Идентификация выделенной культуры:

1. по морфологическим признакам;

2. по культуральным и биохимическим признакам;

3. по антигенным признакам: постановка ориентировочной РА на стекле, а затем развернутой РА (в пробирках) с О1-холерной сывороткой, сыворотками Инаба, Огава и О-139;

4. для дифференциации V.cholerae от V.El-Tor и V.О-139 «Бенгал» проводят фаготипирование и посев исследуемой культуры на среду с полимиксином.

2. Экспресс – диагностика:

• РИФ (прямая);

• реакция иммобилизации вибрионов (РИВ) – утрата подвижности возбудителей в присутствии диагностических сывороток (О1 или О139).

3. Молекулярно-биологический: ПЦР (для определения гена, кодирующего синтез экзоэнтеротоксина).

Лечение холеры основано на восстановлении водно-солевого баланса с незамедлительным введением специальных солевых растворов и антибиотикотерапии.

Специфическая профилактика холеры: вакцины пероральные, содержащие убитые холерные вибрионы О1 серогруппы.

106. Микробиологическая характеристика вибриозов.

Вибриозы – это заболевания, вызываемые представителями рода Vibrio. Возбудителями вибриозов являются вибрионы различных серогрупп (кроме О1 и О139), а также галофильные вибрионы (12 видов), обитающие в морской воде. Название этих микробов отражает их способность размножаться только в присутствии высокой концентрации NaCl (hals – соль, philus – любить).

Из галофильных вибрионов наибольшее медицинское значение имеют V.parahaemolyticus и V.vulnificus.

Источники инфекции: морские гидробионты (моллюски, крабы, рыбы, устрицы).

Пути заражения: алиментарный – при употреблении сырых или слабо термически обработанных гидробионтов, контактный – при попадании в рану инфицированной морской воды.

Клинические формы заболевания:

1. Гастроэнтериты (возбудитель V.parahaemolyticus).

2. Сепсис (возбудитель V.vulnificus).

3. Раневая инфекция (возбудитель V.vulnificus).

Основной метод диагностики вибриозов: бактериологический.

107. Возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, микробиологическая диагностика.

В семействе энтеробактерий к роду Yersinia относят 15 видов, из них патогенны для человека 3 вида: Y.pestis, Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica.

Возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

Морфология: мелкие, грамотрицательные палочки с биполярным окрашиванием, перитрихи, в организме образуют капсулу.

Культуральные свойства: температурный оптимум 28⁰С; хорошо растут на простых питательных средах и среде Эндо.

Антигенная структура: О-антиген и Н-антиген.

Факторы патогенности:

1. Адгезины (pili, белок наружной мембраны);

2. Капсула;

3. Инвазины (белки, обеспечивающие трансцитоз через слизистую кишечника);

4. Цитотоксин, энтеротоксин;

5. Плазмиды (кодируют адгезивные и инвазивные свойства).

Y.pseudotuberculosis – возбудитель псевдотуберкулеза.

Источники инфекции: грызуны, дикие и домашние животные, птицы, выделяющие микроорганизмы с испражнениями. Возбудители накапливаются в почве и воде.

Путь заражения: алиментарный – через овощи и воду. В овощах (морковь, капуста, зеленый лук) иерсинии размножаются и накапливаются даже в условиях хранения при температуре +4⁰С. Характерны сезонные подъемы заболеваемости (февраль-март).

Клиника: острый гастроэнтерит, брыжеечный лимфаденит (псевдоаппендицит), артриты.

Y.enterocolitica – возбудитель кишечного иерсиниоза.

Источники инфекции: домашние (свиньи и др.) и дикие животные, грызуны, больной человек.

Путь заражения: алиментарный – через мясо, молоко, воду.

Y.enterocolitica может быть причиной внутрибольничной инфекции.

Клиника: энтероколит с продолжительной диареей (до нескольких месяцев), возможно развитие сепсиса, артрита.

Материал на исследование: фекалии, кровь, суставная жидкость.

Микробиологическая диагностика.

1. Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

2. Бактериологический метод.

3. Серологический метод имеет значение для эпидемиологической расшифровки заболеваемости, т.к. антитела в диагностически значимых количествах появляются у больных на 2-й неделе заболевания.

108. Этиологическая структура пищевых отравлений, микробиологическая диагностика.

Пищевые отравления – острые кишечные инфекции. Для их возникновения необходимым условием является предварительное попадание, размножение и накопление микроорганизмов в пищевых продуктах. К возбудителям относят обширную группу грамотрицательных бактерий (энтеробактерии, вибрионы, кампилобактерии и др.), а также представителей грампозитивной микрофлоры (стафилококки, бациллы, клостридии и др.).

Характерные признаки пищевых отравлений:

1. больной человек не является источником инфекции для окружающих;

2. короткий инкубационный период, острое начало;

3. короткое течение с преимущественным поражением желудочнокишечного тракта (за исключением ботулизма) и соответствующими симптомами заболевания: тошнота, рвота, резкие боли в животе, диарея;

4. групповой характер заболевания;

Пищевые отравления микробной природы подразделяются:

1. Пищевые токсикоинфекции – возникают в результате размножения и накопления бактерий в пищевых продуктах. Важным условием развития клиники пищевого отравления является массивная обсемененность пищевых продуктов микроорганизмами (более 10⁵ КОЕ в 1 г или 1 мл). Возбудителями заболеваний являются различные виды условно-патогенных энтеробактерий (кишечные палочки, протеи, сальмонеллы, кроме возбудителей брюшного тифа и паратифов), галофильные вибрионы, энтерококки и др.

2. Пищевые интоксикации – при накоплении в пищевых продуктах экзотоксинов бактерий (S.aureus, C.botulinum, C.perfringens и др.) и микотоксинов микроскопических грибов (Aspergillus, Fusarium и др.).

3. Смешанные пищевые отравления.

Материал на исследование: промывные воды желудка, рвотные массы, фекалии, остатки пищевых продуктов (для эпидемиологического расследования).

Микробиологическая диагностика: бактериологический метод.

При подозрении на пищевую интоксикацию необходимо определение соответствующего экзотоксина.

109. Характеристика возбудителя дифтерии, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriаe.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные полиморфные палочки, спор, жгутиков не имеют, образуют микрокапсулу. В мазках располагаются в виде «растопыренных пальцев» или латинских букв V, X, Y. Имеют включения, представленные двумя полярно расположенными зернами волютина (полирибитилметафосфаты), которые выявляют окраской по Нейссеру.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, растут на 5% кровяном и 10% сывороточном агаре. Образуют R-формы колоний: шероховатые, исчерченные, крошковидные, иногда с зонами гемолиза. На кровянотеллуритовом агаре образуют 3 типа колоний: gravis (крупные, сухие, черные, шероховатые с радиальной исчерченностью и неровными краями), mitis (мелкие, гладкие, блестящие, черные, с ровными краями), intermedius (мелкие, сухие, черные колонии с более прозрачной периферией и неровными краями).

Биохимические свойства: дифференциация C.diphtheriae от других видов коринебактерий основана на способности ферментировать глюкозу, сахарозу и наличии ферментов уреазы и цистиназы (табл. 1).

Факторы патогенности:

1. Факторы адгезии: микрокапсула и другие липидно-белковые вещества (обеспечивают прикрепление к клеткам эпителия верхних дыхательных путей);

2. Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейраминидаза;

3. Токсинопродукция: гистотоксин, гемолизин, дермонекротоксин (вызывает некроз клеток в месте размножения возбудителя).

Основной фактор патогенности – гистотоксин (экзотоксин). Нетоксигенные штаммы C.diphtheriae не вызывают развития заболевания. Гистотоксин состоит из двух белковых фрагментов:

Фрагмент А представляет собой фермент, блокирующий фактор элонгации трансферазу-2, ответственную за удлинение полипептидной цепи на рибосоме, что приводит к подавлению синтеза клеточного белка и гибели клеток.

Фрагмент В взаимодействует с клеточными рецепторами, облегчая проникновение в клетку фрагмента А.

Токсинопродукция возбудителя дифтерии обусловлена одним из видов генетической изменчивости – лизогенной (фаговой) конверсией. Умеренный коринефаг содержит в своем геноме ген tox, кодирующий синтез гистотоксина. При интеграции ДНК умеренного фага с хромосомой дифтерийной палочки она становится токсигенной, что проявляется выработкой гистотоксина.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-капельный, реже контактный, алиментарный.

Входные ворота инфекции: слизистые оболочки ротоглотки, носа, гортани, глаз, половых органов, поврежденные кожные покровы и др.

Дифтерия, как инфекционный процесс, развивается по интоксикационному механизму.

Патогенез: в месте внедрения возбудителя происходит его размножение и выделение гистотоксина, который обладает как местным, так и общим действием. На слизистых оболочках формируются пленчатые фибринозные налеты, прочно спаянные с подлежащей тканью. Повышается сосудистая проницаемость и возникает отек ткани ротоглотки и подкожной клетчатки шеи. Экзотоксин поступает в кровь и связывается с мембранами клеток органов-мишеней (миокардиоциты, почечный эпителий, клетки коркового и мозгового вещества надпочечников, периферические нервы). Ингибирование токсином белкового синтеза в клетках миокарда приводит к структурным и функциональным нарушениям тканей, способным вызвать смерть больного. В нервной ткани происходит демиелинизация волокон, приводящая к развитию параличей и парезов. В почечной ткани развивается токсический нефроз.

Клинические формы дифтерии различают по локализации, характеру течения и степени тяжести. По локализации выделяют следующие клинические формы:

1. Дифтерия ротоглотки (90-95%).

2. Дифтерия гортани.

3. Дифтерия редких локализаций (носа, глаз, кожи, уха, половых органов и др.).

При поражении нескольких органов выделяют комбинированную форму заболевания.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: слизь или отделяемое пораженного органа (ротоглотка, нос и др.) забирают стерильным тампоном не позднее 12 часов с момента обращения больного, до назначения антибиотиков.

1. Бактериологический метод: посев исследуемого материала на 5% кровяной агар, выделение чистой культуры на 10% сывороточном агаре. Идентификацию возбудителя проводят по морфо-тинкториальным, культуральным, биохимическим свойствам и по определению продукции экзотоксина (гистотоксина).

2. ПЦР: определяют ДНК C.diphtheriae и наличие гена tox⁺.

Специфическая профилактика дифтерии:

АКДС-вакцина (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина).

АДС-анатоксин (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин).

АДС-м-анатоксин (дифтерийно-столбнячный анатоксин с пониженным содержанием антигенов).

АД-м-анатоксин (очищенный адсорбированный дифтерийный анатоксин с пониженным содержанием антигена).

Препараты с пониженным содержанием антигенов предназначены для профилактики у детей старше 6 лет, подростков и взрослых.

В настоящее время для профилактики дифтерии также используются зарубежные препараты.

Для выявления уровня коллективного противодифтерийного иммунитета определяют его напряженность серологическим методом в РНГА, ИФА.

Специфическое лечение дифтерии: сыворотка противодифтерийная антитоксическая лошадиная очищенная. Сыворотку вводят дробно (см. учебнометодическое пособие «Учение об инфекции и иммунитете. Основы иммунологии»).

110. Характеристика возбудителей туберкулеза, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика.

Микобактерии широко распространены в окружающей среде и могут вызывать различные заболевания: туберкулез, туберкулезоподобные заболевания, другие микобактериозы, проказу.

Вызывающие туберкулез виды микобактерий объединены в комплекс Mycobacterium tuberculosis, включающий: M.tuberculosis (92%), M.bovis (5%) (возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота), M.africanum (3%).

Морфо-тинкториальные свойства: тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки. Реже встречаются зернистые и нитевидные формы. Спор, капсулу, жгутиков не имеют. Кислотоустойчивы за счет наличия в клеточной стенке высокого содержания липидов и миколовых кислот. По методу Циля-Нильсена окрашиваются в красный цвет.

. Культуральные свойства: аэробы, требовательны к условиям культивирования, длительно (3-8 недель) растут на плотных (среда Левенштайна) и жидких питательных средах с обязательным присутствием различных факторов роста. На плотных питательных средах образуют сухие морщинистые кремового цвета колонии

(R-форма).

Основной фактор патогенности: корд-фактор (токсический гликолипид клеточной стенки). Его действие:

вызывает гибель фагоцитов; подавляет миграцию лейкоцитов; оказывает токсическое действие на ткани.

Возбудитель сенсибилизирует ткани и вызывает характерную для туберкулеза аллергическую реакцию гиперчувствительности замедленного типа.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: аэрогенный, алиментарный, контактно-бытовой.

Основная клиническая форма заболевания: туберкулез легких.

Патогенез: в зоне проникновения микобактерий возникает первичный туберкулезный комплекс, состоящий из воспалительного очага некроза, пораженных регионарных лимфатических узлов и «дорожки» измененных лимфатических сосудов между ними. Распространение микробов может происходить бронхогенно, лимфогенно и гематогенно. При заживлении очаг воспаления рассасывается, некротические массы уплотняются, а вокруг формируется соединительнотканная капсула (очаг Гона), микобактерии трансформируются в L-формы. Активация этих очагов ведет к развитию вторичного туберкулеза.

Иммунитет нестерильный, обусловлен наличием в организме L-форм микобактерий. Основной механизм иммунитета – клеточный.

В развитии болезни выделяют первичный, диссеминированный и вторичный туберкулез.

Различают 3 клинические формы заболевания: первичная туберкулезная интоксикация у детей и подростков, туберкулез органов дыхания, туберкулез других органов и систем.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: мокрота (3 раза с интервалом 2-3 дня), промывные воды бронхов и др.

1. Бактериоскопический метод:

• световая микроскопия в окраске по Цилю-Нильсену;

• люминесцентная микроскопия.

Для повышения концентрации возбудителя в исследуемом материале используют методики обогащения, например, флотацию: мокроту гомогенизируют, затем добавляют ксилол, толуол или бензин, смесь встряхивают, добавляют дистиллированную воду. Ксилол вместе с микобактериями всплывает наверх в виде пленки. Из нее готовят мазки.

2. Бактериологический (основной) метод:

   • посев на плотные питательные среды;

   • использование автоматизированных систем (BACTEC и др.) – сочетание плотной и жидкой питательных сред.

3. ПЦР.

4. Аллергологический (туберкулинодиагностика) метод: ранняя диагностика туберкулеза у детей и подросток (внутрикожная проба Манту с туберкулином). Проба свидетельствует не о заболевании, а об инфицировании.

В дополнение к пробе Манту применяют диаскинтест с аллергеном туберкулезным рекомбинантным, который содержит антигены только вирулентных штаммов M. tuberculosis. Положительная реакция на этот аллерген бывает только у лиц, инфицированных возбудителем туберкулеза, и отсутствует у лиц, вакцинированных БЦЖ.

Специфическая профилактика – живая туберкулезная вакцина BCG, живая туберкулезная вакцина BCG-м.

111. Характеристика возбудителя лепры, микробиологическая диагностика.

Возбудитель проказы (лепры) – Mycobacterium leprae.

Морфо-тинкториальные свойства: прямые или слегка изогнутые палочки, неподвижны, спор и капсулу не имеют. Кислотоустойчивы, окрашиваются по ЦилюНильсену в красный цвет. В мазках из очагов поражения располагаются внутриклеточно шаровидными скоплениями или параллельными группами («пачки сигар»).

Культуральные свойства: не растут на питательных средах. Являются облигатными внутриклеточными паразитами.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный.

Для проказы характерен очень длительный инкубационный период (в среднем 3-7 лет, но может удлиняться до 15-20 лет).

Патогенез: возбудитель проникает через слизистые оболочки и кожу в лимфатические и кровеносные капилляры, нервные окончания и медленно распространяется по организму. M.leprae обладает тропизмом к тканям с низкой температурой (<30⁰C). Это приводит к формированию гранулем различной поверхностной локализации.

Основные клинические формы:

• туберкулоидная – характеризуется поражениями кожи (одиночные, слегка пигментированные пятна), периферических нервов (нарушается температурная, болевая и тактильная чувствительность);

• лепроматозная – характеризуется высыпаниями на коже и слизистых оболочках носа и ротовой полости, которые затем превращаются в инфильтраты (лепромы). При диффузной инфильтрации лицо больного напоминает морду льва. На поздней стадии болезни образуются множественные лепромы, выпадают брови и ресницы, формируются парезы, параличи;

• недифференцированная (сочетанная) форма характеризуется кожными высыпаниями и поражением периферических нервных стволов (моно- и полиневриты).

Микробиологическая диагностика.

1. Бактериоскопический метод при лепроматозной форме заболевания – окраска мазков из исследуемого материала по Цилю-Нильсену. Материал на исследование: соскобы с кожи и со слизистых оболочек носа, пунктаты лимфатических узлов.

2. Серологический метод: ИФА.

3. ПЦР.

112. Неклостридиальные анаэробы в патологии человека, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Неклостридиальные (неспорообразующие) анаэробы являются представителями симбионтной микробиоты ротовой полости, верхних дыхательных путей, кишечника, влагалища и др. биотопов макроорганизма. По таксономической характеристике они относятся к различным родам (табл. 2).

Неклостридиальные анаэробы (НА): условно-патогенные микроорганизмы, которые могут вызывать различные эндогенные инфекции при снижении иммунного статуса организма.

Факторы патогенности для большинства НА:

1. Факторы адгезии.

2. Капсула.

3. Ферменты патогенности (гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин).

4. Эндотоксин, цитотоксин.

НА чаще вызывают заболевания в ассоциациях, что приводит к более быстрому и тяжелому течению заболевания.

В се НА, за исключением бифидо- и лактобактерий, могут вызывать следующие гнойно-септические заболевания: послеоперационные абдоминальные инфекции: перитонит, аппендицит, абсцесс

печени;

гинекологические инфекции: септический аборт, эндометрит; аспирационную пневмонию, абсцесс легкого; сепсис, эндокардит;

флегмоны, абсцессы кожи и мягких тканей, остеомиелит (при ушибах и травмах); одонтогенные инфекции после удаления или пломбирования зубов.

Лактобактерии значительно реже, чем другие НА, вызывают заболевания и могут быть причастны к формированию кариеса, острого язвенного стоматита, язвенного вульвита.

Бифидобактерии чрезвычайно редко, на фоне глубокого иммунодефицита, могут вызывать септицемию.

Микробиологическая диагностика.

Микробиологическая диагностика необходима для этиологической расшифровки заболеваний и определения чувствительности возбудителей к антибиотикам.

Материал на исследование (в зависимости от клинической формы): кровь, гной, пунктаты абсцессов и полостей, отделяемое из глубоких отделов ран, язв, свищей и др.

1. Экспресс-методы:

микроскопия нативных мазков в окраске по Граму;

газовая хроматография, основанная на обнаружении продуктов метаболизма анаэробов (летучие жирные кислоты – муравьиная, уксусная, пропионовая).

2. Бактериологический метод (основной). Материал доставляют в одноразовых шприцах или в стерильных пробирках с транспортной средой для анаэробных микроорганизмов. Необходимое условие: быстрая (не позднее 2-х часов) доставка исследуемого материала в лабораторию. Производят посев на специальные для анаэробов питательные среды. Посевы инкубируют в анаэростатах, заполненных газовой смесью (80% N₂, 10% H₂ и 10% CO₂), или с помощью AnaeroHiGas Pak, с дальнейшей идентификацией выделенных возбудителей и определением чувствительности к антибиотикам. Специфическая профилактика и специфическая терапия не разработаны. .

113. Характеристика возбудителей газовой гангрены, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Основной возбудитель газовой гангрены Clostridium perfringens (70-80%). Реже заболевания вызывают: Clostridium novyi (20-40%), Clostridium septicum (до 20%), Clostridium histolyticum (4-6%) и др.

Морфо-тинкториальные свойства: C.perfringens крупные, неподвижные грамположительные палочки, имеют капсулу, образуют спору, расположенную центрально или субтерминально. Диаметр споры превышает диаметр клетки.

Культуральные свойства: факультативный анаэроб. На среде Китта-Тароцци – помутнение, на среде Вильсона-Блера – рост в виде черных колоний. Характерной особенностью роста возбудителя на этих средах является интенсивное газообразование с разрывами агара. На кровяном агаре Цейсслера растут в виде гладких сероватых колоний с зонами гемолиза.

Антигенная структура: выделяют 6 сероваров (A-F). Заболевания человека чаще связаны с сероваром А.

Ф акторы патогенности: характерной особенностью возбудителей газовой гангрены является многообразие продуцируемых токсинов, обозначаемых буквами греческого алфавита. Причем, у каждого вида и серовара свой набор токсических факторов, которые представляют собой не только экзотоксины, но и различные ферменты патогенности: α-токсин (лецитиназа С) обладает дермонекротическим действием, что приводит

к некрозу мышечной ткани. Лецитиназа также вызывает лизис эритроцитов и повреждает липидные мембраны нервных клеток;

коллагеназа, гиалуронидаза, ДНК-аза, гемолизин – усиливают действие αтоксина;

энтеротоксин (экзотоксин) – вызывает пищевые отравления при массивном обсеменении пищевых продуктов (см. учебно-методическое пособие «Основная бактериальная патология желудочно-кишечного тракта»).

Газовая гангрена чаще возникает при различных травмах вследствие инфицирования ран почвой, содержащей споры возбудителя. Признаки газовой гангрены.

1. Некроз мышечной ткани.

2. Интенсивное накопление газов (H₂, CO₂, H₂S, аммиак и др.) в пораженных тканях, что определяется при пальпации кожных покровов (симптом крепитации).

3. Обширный отек тканей. Из раны выделяется серозно-геморрагический экссудат с гнилостным запахом.

4. Сепсис и синдром токсического шока, что обычно приводит к летальному исходу.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: мазки-отпечатки из раны, кусочки некротизированных тканей, отечная жидкость, перевязочный материал, кровь (при подозрении на сепсис).

1. Бактериоскопический метод: микроскопия мазков-отпечатков в окраске по Граму.

2. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала на специальные среды с целью выделения и идентификации возбудителя.

3. ПЦР.

Специфическая профилактика: при ранениях и травмах – поливалентная противогангренозная антитоксическая сыворотка (против C. perfringens, C.novii, C.septicum). Специфическое лечение: поливалентная противогангренозная антитоксическая сыворотка (против C. perfringens, C.novii, C.septicum).

114. Характеристика возбудителя псевдомембранозного колита. Микробиологическая диагностика.

Clostridium difficile – возбудитель энтерального клостридиоза (антибиотикоассоциированная диарея). Это острое инфекционное заболевание, проявляющееся симптомами токсикоза, диарейным синдромом с развитием псевдомембранозного колита.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные палочки с овальными субтерминальными спорами, перетрихи.

Культуральные свойства: облигатные анаэробы, растут на специальных питательных средах лучше в анаэробных условиях.

Факторы патогенности: токсин А (энтеротоксин) – вызывает диарею, токсин В (цитотоксин) – нарушает функцию мембран и синтеза белка.

Патогенез и клиника: заболевание развивается, как правило, на фоне приема антибиотиков. Антибиотики, подавляя резидентную микробиоту кишечника, способствуют его колонизации C.difficile, который нередко является симбионтом этого биотопа. Бактерия синтезирует токсины, поражающие толстую кишку с образованием пленки из фибрина и слизи. Заболевание проявляется приступообразными болями в животе, диареей, повышенной температурой.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследовании: фекалии

1. Бактериологический метод: выделяют на специальных средах чистую культуру, которую тестируют на токсигенность.

2. ПЦР.

3. ИФА (определение токсинов).

Специфическая профилактика и специфическая терапия не разработаны.

115. Характеристика возбудителя столбняка, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель столбняка – Clostridium tetani.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительная тонкая палочка, перитрих, капсулу не имеет. Спора круглой формы, больше диаметра клетки, располагается терминально и придает клетке сходство с барабанной палочкой.

Культуральные свойства: анаэробы, растут на соответствующих питательных средах.

Антигенная структура: О- и Н-антигены, по жгутиковому (Н) антигену выделяют 10 сероваров C.tetani.

Факторы патогенности: все серовары возбудителя продуцируют экзотоксин, состоящий из двух фракций: тетаноспазмин (нейротоксин) и тетанолизин. Основной фактор патогенности – тетаноспазмин, который блокирует все типы синаптического торможения. Тетанолизин обладает гемолитическим, кардиотоксическим и летальным действием.

Заражение происходит при попадании спор возбудителя с почвой через поврежденные кожные покровы (небольшие царапины, ссадины, проколы на конечностях) и слизистые оболочки вследствие бытовых, производственных и сельскохозяйственных травм. У новорожденных заражение происходит через пупочную ранку.

Патогенез: возбудитель размножается и остается в воротах инфекции (колотые раны). Клиника заболевания развивается только за счет экзотоксина, выделяемого возбудителем. Экзотоксин (тетаноспазмин) проникает в нервные клетки и посредством аксонного транспорта попадает в ЦНС. При этом развивается сначала местное, а затем и генерализованное подавление синаптического торможения на уровне двигательных нейронов, так как токсин препятствует выходу тормозных медиаторов в синаптическую щель. В связи с этим в мионевральных синапсах распространяются только процессы возбуждения. Это приводит к гипертонусу скелетных мышц больного и судорогам.

Клиника: симптомы столбняка развиваются по нисходящему типу (tetanus descendens) и начинаются со спазма жевательной мускулатуры (тризм), затем наступают судороги мимической мускулатуры. Позже судороги переходят на мышцы шеи, туловища и конечностей. Вследствие резкого сокращения мышц спины больной выгибается в виде дуги с опорой на затылок и пятки (опистотонус). Смерть чаще наступает от асфиксии из-за паралича мышц грудной клетки и диафрагмы.

Столбняк новорожденных (tetanus neonatorum). Протекает по типу генерализованной инфекции. Вначале у ребенка нарушается акт сосания и глотания, а затем начинаются судороги. Вследствие резкого сокращения мышц-сгибателей у ребенка отмечается характерная поза.

Микробиологическая диагностика столбняка обычно проводится посмертно.

Материал на исследование берут из предполагаемых ворот инфекции.

Бактериологический метод (основной) – посев на среды для анаэробов.

Дополнительный метод – бактериоскопия мазков-отпечатков из входных ворот инфекции.

Специфическая профилактика:

• плановая (массовая) – столбнячный анатоксин самостоятельно или в составе АКДС-вакцины, АДС-анатоксина, АДС-м-анатоксина.

• экстренная – проводится при травмах, ранениях, ожогах, обморожениях, укусах животных и др. Если пострадавший был вакцинирован более пяти лет назад или не был вакцинирован, то в одну руку вводят столбнячный анатоксин, а в другую – противостолбнячный иммуноглобулин человеческий или противостолбнячную антитоксическую сыворотку лошадиную. Если пострадавший был вакцинирован менее 5 лет, то вводят только столбнячный анатоксин.

Специфическое лечение – противостолбнячный иммуноглобулин человеческий или противостолбнячная антитоксическая сыворотка лошадиная.

116. Характеристика возбудителя ботулизма, микробиологическая диагностика, специфическое лечение.

Возбудитель ботулизма – Clostridium botulinum.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные палочки, перитрихи, капсулы не имеют. Образуют терминально расположенную спору овальной формы (ее диаметр больше диаметра клетки), которая придает палочке сходство с теннисной ракеткой.

Культуральные свойства. Анаэробы, растут на соответствующих питательных средах.

Антигенная структура: в зависимости от типа продуцируемого токсина, выделяют 8 сероваров возбудителя. Заболевания у человека чаще вызывают серовары A, B, E и F.

Факторы патогенности: основным фактором патогенности является продуцируемый возбудителем экзотоксин – это самый сильный из бактериальных токсинов, летальная доза для человека – 0,005 мг. Несмотря на антигенные различия, биологическая активность экзотоксинов различных сероваров одинакова. Ботулотоксин является типичным нейротоксином.

Пути заражения:

• алиментарный (основной) – при употреблении рыбных, мясных и овощных консервов домашнего приготовления, копченой и вяленой рыбы. У детей младшего возраста заражение может происходить при употреблении меда, соков и сиропов домашнего приготовления;

• контактный (встречается редко) – при попадании почвы со спорами возбудителя в рану (раневой ботулизм).

Патогенез: при алиментарном пути инфицирования ботулотоксин всасывается в желудке и в верхних отделах тонкой кишки, с током крови попадает в органы и ткани, вызывая их поражение. Наиболее чувствительна к действию токсина нервная ткань. Токсин блокирует выброс ацетилхолина в синапсах мотонейронов спинного и продолговатого мозга с развитием бульбарного (расстройство глотания и речи) и паралитического синдрома.

Клинические проявления: начало заболевания острое. У больных возникает тошнота, рвота, диарея, затем появляются типичные симптомы: сухость во рту, нечеткость зрения, двоение в глазах (диплопия), опущение верхних век (птоз). Затем присоединяются нарушения глотания и речи. В заключительной стадии происходит расстройство дыхания за счет паралича дыхательной мускулатуры. Смерть наступает от остановки дыхания.

Микробиологическая диагностика направлена на обнаружение и определение типа токсина, а также выделение возбудителя.

Материал на исследование: кровь, фекалии, промывные воды желудка, рвотные массы, моча и остатки пищевых продуктов.

1. Определение типа ботулинового токсина:

Классический метод – реакция нейтрализации (РН) на белых мышах (см. учебнометодическое пособие «Учение об инфекции и иммунитете. Основы иммунологии»).

Экспресс-методы – РНГА по Рыцаю, ИФА.

2. Выделение возбудителя:

Бактериологический метод – посев исследуемого материала на соответствующие для анаэробов питательные среды.

Специфическое лечение: до установления типа токсина вводят поливалентную антитоксическую сыворотку типов A, B, E, после установления типа токсина – моновалентную антитоксическую сыворотку.

117. Характеристика возбудителя сифилиса, клинические формы.

Возбудитель сифилиса – Treponema pallidum.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты) спиралевидной формы, имеют мелкие равномерные первичные завитки, спор и капсулу не образуют. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. При неблагоприятных условиях (действие антибиотиков и антител) трепонемы способны сохраняться в виде цист или переходить в L-форму. Подвижность трепонем связана с наличием фибрилл, которые обеспечивают различные виды движения: сгибательное, поступательное, вращательное и др..

Культуральные свойства: строгие анаэробы, плохо растут на искусственных питательных средах.

Факторы патогенности:

факторы адгезии; факторы инвазии; цисты и L-формы, способствующие длительной персистенции.

Сифилис – заболевание чаще передаваемое половым путем. Сифилис – «великий» имитатор», так как имеет множество клинических проявлений.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: половой, трансплацентарный, интранатальный, трансфузионный, контактно-бытовой.

Патогенез: возбудитель размножается в месте внедрения (слизистые оболочки половых путей, ротовой полости, прямой кишки), мигрирует в регионарные лимфатические узлы (первичный сифилис). Далее, при гематогенном и лимфогенном распространении трепонем, процесс генерализуется (вторичный сифилис). Последующее размножение микробов в различных органах приводит к их грубым органическим поражениям (третичный сифилис).

Клинические формы.

Первичный сифилис проявляется формированием в месте внедрения возбудителя твердого шанкра (безболезненной язвы с плотным основанием), увеличением и воспалением регионарных лимфатических узлов (регионарный лимфаденит). Продолжительность течения первичного сифилиса – 6 недель. Затем эти признаки исчезают.

Вторичный сифилис характеризуется появлением на коже и слизистых оболочках розеолезно-папулезных высыпаний и генерализованным лимфаденитом. Эти проявления носят рецидивирующий характер. Продолжительность вторичного сифилиса колеблется от двух до пяти лет.

При отсутствии лечения возникает третичный сифилис. Во внутренних органах и костях наблюдается формирование гумм (висцеральный сифилис). Гуммы – это сифилитические гранулемы в виде плотных узлов, склонных к распаду и рубцеванию.

У пациентов без лечения и также у ВИЧ-инфицированных, может развиться нейросифилис – тяжелое поражение ЦНС (сифилитический менингит, прогрессивный паралич и др.).

При трансплацентарном инфицировании плода от больной матери развивается врожденный сифилис, который подразделяется на ранний (проявляется у детей до 2 лет) и поздний (проявляется у детей старше 2 лет).

118. Микробиологическая диагностика сифилиса. Микробиологическая диагностика.

Для выявления возбудителя при первичном и вторичном сифилисе с клиническими проявлениями используют:

1. Бактериоскопический метод (темно-полевая микроскопия);

2. Иммуногистохимическое исследование (ИГХ);

3. ПЦР.

Для выявления антител основным методом диагностики является серологический. Существуют нетрепонемные и трепонемные тесты.

Нетрепонемные тесты: применяют для проведения массового скрининга населения. Это отборочные тесты. Предусматривают использование неспецифического антигена (например, экстракта липидов мышц бычьего сердца, так как он идентичен липоидному антигену трепонем).

К нетрепонемным тестам относят:

1. Реакцию микропреципитации (РМП);

2. Другие экспресс-тесты: аналоги реакции микропреципетации (RPR, VDRL).

Трепонемные тесты – для подтверждения положительных результатов нетрепонемных тестов, но с использованием специфического трепонемного антигена:

1. ИФА;

2. Иммуноблоттинг (модификация ИФА);

3. РИФ;

4. РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем);

5. РПГА (РНГА);

6. ИХЛ (иммунохемилюминесцентное исследование)

Микробиологическая диагностика врожденного сифилиса.

Представляет собой комплекс нетрепонемных и двух трепонемных тестов:

1. Нетрепонемные тесты: РМП, RPR, VDRL;

2. Трепонемные тесты: РПГА, ИФА

Специфическая профилактика и лечение на разработаны.

119. Характеристика возбудителей возвратного тифа, микробиологическая диагностика.

Возбудитель эпидемического возвратного тифа – B.recurrentis.

Источник инфекции: больной человек.

Путь заражения: трансмиссивный.

Переносчики: головные и платяные вши. Заражение происходит в результате втирания в кожу гемолимфы раздавленных вшей при расчесывании места укуса.

Патогенез: попавшие в организм боррелии поглощаются фагоцитами, размножаются в них и попадают в кровь. Затем они разрушаются и выделяют эндотоксин, что вызывает лихорадку, сосудистые расстройства, головные боли. Под действием антител большинство возбудителей погибает. Однако, часть боррелий сохраняется в паренхиматозных органах, размножается и образует новую антигенную разновидность возбудителя, которая вновь поступает в кровь. Возникает рецидив. В течение заболевания формируется иммунитет против нескольких антигенных разновидностей возбудителя и наступает выздоровление.

Клинические проявления характеризуются чередованием лихорадочных приступов с периодами апирексии, когда температура нормализуется. Это повторяется от 3 до 20 раз, причем каждый последующий период апирексии удлиняется. Прогноз заболевания благоприятный.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: кровь в период подъема температуры.

Основной метод диагностики – бактериоскопический с обнаружением в мазках крови боррелий в окраске по Романовскому-Гимзе. Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

Резервуар инфекции в природных очагах: различные виды грызунов и хищников, а также аргасовые клещи.

Путь заражения: трансмиссивный (при укусе клещей).

Патогенез, клинические проявления и микробиологическая диагностика сходны с эпидемическим возвратным тифом.

Для дифференциальной диагностики возвратных тифов используют биологическую пробу на морских свинках, так как животные резистентны к возбудителю эпидемического возвратного тифа. Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

120. Характеристика возбудителя боррелиоза Лайма, микробиологическая диагностика.

Возбудители боррелиоза Лайма – B.burgdorferi, на евро-азиатском континенте –

B.garini и B.afzelii.

Источники инфекции: мелкие млекопитающие.

Путь заражения: трансмиссивный (при укусе переносчика – иксодового клеща).

Патогенез заболевания связан с распространением возбудителя из места укуса с током крови в различные органы, чаще сердце, ЦНС и суставы.

Клинические проявления: на месте укуса появляется мигрирующая кольцевидная эритема в виде овальной или круглой папулы. Если больные остаются без лечения, то микроорганизм гематогенным путем распространяется в организме, вызывая артриты, миокардит, менингит.

Микробиологическая диагностика.

1. Микроскопический метод: из биоптатов кожи, ликвора и синовиальной жидкости готовят мазки в окраске по Романовскому-Гимзе.

2. Серологический метод: определение IgM и IgG в сыворотке крови больного с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции, ИФА.

3. ПЦР. Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

121. Характеристика возбудителей лептоспироза, микробиологическая диагностики и специфическая профилактика.

Все патогенные лептоспиры объединены в один вид – Leptospira interrogans, который включает более 200 сероваров.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты), имеют мелкие равномерные первичные завитки и крючкообразные концы. Вторичные завитки образуются при движении и формируют дополнительные изгибы, придающие лептоспирам сходство с латинскими буквами S и C. Спор и капсул не имеют. Подвижность за счет наличия фибрилл. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в розово-фиолетовый цвет.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, температурный оптимум 2830⁰С. Растут на жидких и полужидких средах с добавлением сыворотки.

Ф акторы патогенности:

высокая инвазивность – способны проникать через микротравмы кожи и неповрежденные слизистые оболочки носа, ЖКТ за счет активной подвижности и спиралевидной формы;

эндотоксин.

Источники инфекции: многочисленные виды диких (более 100 видов) и домашних животных.

Пути заражения:

• контактный – при купании и использовании для бытовых нужд воды из водоемов, загрязненных мочой больных животных;

• алиментарный (через инфицированные пищевые продукты).

Патогенез и клиника заболевания: возбудители внедряются в организм, затем проникают в кровь и размножаются в ней (лептоспиремия). Под действием лептоспир и их эндотоксинов повреждаются капилляры кожи, печени, почек, ЦНС, что приводит к возникновению многочисленных кровоизлияний в этих органах.

Клинически у больного отмечаются лихорадка, интоксикация, желтуха, почечная недостаточность, менингит. Летальность 3-40%.

Материал на исследование: кровь, моча, ликвор.

Микробиологическая диагностика.

1. Бактериоскопический метод (только в первые дни заболевания до начала лечения): исследование мазков крови, мочи, ликвора в темном поле или в окраске по Романовскому-Гимзе.

2. ПЦР.

3. Бактериологический метод: посев исследуемого материала на соответствующие питательные среды.

4. Серологический метод: реакция агглютинации и лизиса лептоспир (РАЛ) с эталонным набором живых культур, ИФА.

Специфическая профилактика – инактивированная лептоспирозная вакцина (по эпидемическим показаниям).

Специфическое лечение – иммуноглобулин противолептоспирозный из сыворотки крови волов.

122. Характеристика возбудителей сыпного тифа, микробиологическая диагностика.

Риккетсии – очень мелкие палочковидные бактерии. Могут иметь кокковидную и нитевидную форму. Спор и капсул не образуют. Неподвижны. Являются облигатными внутриклеточными паразитами. Размножаются в цитоплазме и (или) в ядрах клеток.

Особенностью химического состава риккетсий является высокое содержание липидов, что определяет их устойчивость во внешней среде и тинкториальные свойства.

Методы окраски:

а) ослабленный вариант окраски по Цилю-Нильсену. Риккетсии окрашиваются в красный цвет, а цитоплазма инфицированных клеток – в голубой;

б) метод Романовского – Гимза.

Культивируют риккетсии:

1. в организме лабораторных животных;

2. в желточном мешке куриных эмбрионов;

3. в культуре клеток;

Факторы патогенности:

факторы адгезии; факторы инвазии; токсические факторы, входящие в состав клеточной стенки.

Большинство риккетсий (кроме возбудителя эпидемического сыпного тифа) являются возбудителями природно-очаговых зоонозных инфекций, поражающих теплокровных животных, птиц и членистоногих, а человек является случайным звеном в цепи циркуляции возбудителя.

Риккетсии группы сыпного тифа.

Возбудителем эпидемического сыпного тифа и болезни Брилля является

Rickettsia prowazekii.

Источник инфекции: больной человек.

Переносчики: в основном платяные вши, реже – головные.

Основной путь заражения: трансмиссивный (втирание экскрементов вшей при расчесывании мест укусов).

Возбудителем эндемического сыпного тифа является Rickettsia typhi.

Источник инфекции: крысы.

Переносчики: крысиные блохи и вши.

Основной путь заражения: трансмиссивный. Заболевание встречается в портовых городах теплых морей.

Патогенез и клиника: возбудитель размножается в эндотелии кровеносных сосудов, особенно капилляров. При этом происходит формирование периваскулитов и тромбов. Наиболее выражены поражения сосудов головного мозга, что проявляется сильными головными болями, бредом, повышением температуры до 39-40⁰С. На 4-6 день от начала заболевания на коже появляется розеолезно-петехиальная сыпь, связанная с поражением эндотелия капилляров кожи. Симптомы интоксикации обусловлены действием токсических факторов риккетсий.

Материал на исследование: сыворотка крови больного.

Ведущий метод диагностики – серологический: ИФА, РИФ.

У некоторых людей, переболевших в прошлом эпидемическим сыпным тифом, риккетсии могут длительно сохраняться в организме и при ослаблении резистентности вызывать рецидив сыпного тифа – болезнь Брилля (повторный сыпной тиф). Болезнь Брилля характеризуется более легким течением, чем первичный сыпной тиф. Однако, больные при наличии завшивленности (педикулез) могут быть источниками инфекции для окружающих.

Специфическая профилактика: живая сыпнотифозная вакцина, химическая сыпнотифозная вакцина.

123. Характеристика возбудителя Ку-лихорадки, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Возбудитель Ку-лихорадки – Coxiella burnetii.

Морфо-тинкториальные свойства: очень мелкие (0,2-0,7 мкм) коккобактерии. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красный цвет.

.

Культуральные свойства: облигатные внутриклеточные паразиты, культивируются в культуре клеток, курином эмбрионе, организме животных.

Высокоустойчивы в окружающей среде, могут образовывать спороподобные формы, в том числе и в инфицированных клетках.

Заболевание получило название (от англ. «quer» – вопрос), так как причины его возникновения были неизвестны.

Источники инфекции:

1. домашние животные (мелкий и крупный рогатый скот, лошади, свиньи и др.);

2. дикие животные, грызуны, птицы; 3) клещи.

Пути заражения:

1. аэрогенный – основной;

2. алиментарный – при употреблении молока и мяса инфицированных домашних животных;

3. контактный – при уходе за больными животными;

4. трансмиссивный – в природных очагах инфекции при укусах клещей.

Патогенез: проникая через слизистые оболочки или кожу, возбудитель попадает в лимфу и кровь. Размножение возбудителя происходит в гистиоцитах и макрофагах.

Клинические проявления: Ку-лихорадка протекает как острое лихорадочное заболевание с очень разнообразной клинической симптоматикой, что крайне затрудняет клиническую диагностику. При аэрогенном заражении, как правило, развивается атипичная (интерстициальная) пневмония, характеризующаяся поражением соединительной ткани легкого, сухим кашлем, выраженными симптомами интоксикации и длительным течением.

Материал на исследование: сыворотка крови больного.

Основной метод диагностики: серологический (РСК, ИФА, РИФ).

Специфическая профилактика: живая вакцина М-44 для лиц из группы риска.

124. Характеристика возбудителей хламидиозов.

Хламидии – мелкие грамотрицательные бактерии, шаровидной или овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, капсулы. Основной метод выявления в клетках – окраска по Романовскому-Гимзе.

Жизненный цикл хламидий включает образование двух основных форм: элементарные тельца (ЭТ) и ретикулярные тельца (РТ) (табл.3).

Цикл внутриклеточного паразитизма хламидий.

1. В клетку проникают ЭТ, которые затем превращаются в РТ.

2. РТ размножаются в цитоплазме клетки путем бинарного деления, формируя включения, которые обычно располагаются околоядерно.

.

3. РТ превращаются в ЭТ, выходят из клетки, что приводит к гибели последней. В дальнейшем ЭТ инфицируют другие клетки и повторяют цикл развития.

Хламидии культивируют в желточном мешке куриных эмбрионов и в культуре клеток.

Ф акторы патогенности:

мембранные белки, которые обладают адгезивными и антифагоцитарными свойствами;

факторы инвазии;

экзо- и эндотоксины.

Семейство Chlamidiaceae включает 2 рода:

род Chlamydia представлен видом C.trachomatis (18 сероваров); род Chlamydophila включает два вида: C.pneumoniae и C.psittaci.

Специфическая профилактика и специфическое лечение хламидиозов не разработаны.

125. Заболевания, вызываемые c.Trachomatis, микробиологическая диагностика.

Различные серовары C.trachomatis вызывают следующие заболевания:

трахому;

урогенитальный хламидиоз; хламидийную инфекцию у новорожденных; венерическую лимфогранулему.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.

Трахома.

Трахома – хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением конъюнктивы и роговицы, приводящее, как правило, к слепоте. Передается контактно-бытовым путем. Заболевание встречается в странах Азии, Африки, Центральной и Южной Америки с низким уровнем жизни и санитарной культуры населения.

Урогенитальный хламидиоз.

Пути заражения: половой, контактно-бытовой.

Это острое или хроническое инфекционное заболевание, поражающее мочеполовую систему у женщин и мужчин. Характеризуется малосимптомным течением с возможным развитием бесплодия. Урогенитальный хламидиоз с легким течением без соответствующего лечения может формировать синдром Рейтера с классической триадой: уретрит – конъюнктивит – артрит.

Хламидийная инфекция новорожденных.

Путь заражения: интранатальный (во время родов).

Клинические формы: конъюнктивит, атипичная (интерстициальная) пневмония.

Венерическая лимфогранулема.

Путь заражения: половой. Эндемичное заболевание для стран тропического и субтропического пояса.

Клинические проявления: паховый лимфаденит с нагноением и изъязвлением. Чаще болеют мужчины.

126. Характеристика возбудителей респираторного хламидиоза и орнитоза, микробиологическая диагностика.

Респираторный хламидиоз. Возбудитель: Chlamidophila pneumoniae. Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-капельный, для детей возможен контактный.

Заболевание проявляется фарингитом, бронхитом, пневмонией.

Микробиологическая диагностика:

1. микроскопический метод – в мазках со слизистой оболочки верхних дыхательных путей и мокроте определяют включения хламидий в окраске по Романовскому-Гимзе;

2. РИФ – определение в исследуемом материале антигенов C.pneumoniae;

3. генетический метод – ПЦР;

4. серологический метод – с помощью ИФА определяют IgM в сыворотке больного.

Орнитоз (от греч. Оrnithos – птица).

Возбудитель: Chlamidophila psittaci.

Источники инфекции: более 170 видов домашних, декоративных и диких птиц. Основную опасность представляют индейки, утки, гуси, реже – голуби и попугаи.

Основной путь заражения: воздушно-пылевой. Типичным проявлением орнитоза является поражение респираторного тракта с развитием атипичной (интерстициальной) пневмонии.

Клинические симптомы: высокая температура, головная и мышечные боли, сухой кашель, длительное течение.

Микробиологическая диагностика:

1. основной метод – серологический: определение IgM в сыворотке крови с помощью РСК, РИФ, ИФА, а также исследование парных проб сыворотки для выявления динамики нарастания титра антител;

2. дополнительный метод – аллергологический (кожная проба с орнитином) для ранней и ретроспективной диагностики.

Специфическая профилактика и специфическое лечение хламидиозов не разработаны.

127. Характеристика микоплазм, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Отличительной особенностью микоплазм является отсутствие клеточной стенки, поэтому их выделяют в особый класс Mollicutes (мягкая кожа).

Основными видами патогенных для человека микоплазм являются: Mycoplasma pneumoniae, M.hominis, M.genitalium и Ureaplasma urealyticum.

Морфо-тинкториальные свойства: очень мелкие полиморфные (от кокковидных до палочковидных) грамотрицательные бактерии. Спор не образуют, имеют микрокапсулу.

Культуральные свойства: на сложных питательных средах образуют характерные мелкие круглые колонии с приподнятым центром, напоминающие яичницуглазунью.

Факторы патогенности:

адгезины; микрокапсула;

ферменты патогенности (нейраминидаза, ДНК-аза, РНК-аза и др.); экзо- и эндотоксины; способность длительно паразитировать на мембранах эукариотических клеток. Могут вырабатывать H₂O₂, повреждающую мембрану клетки-хозяина.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: воздушно-капельный, половой, контактный.

M.pneumoniae вызывает атипичную (интерстициальную) пневмонию, бронхит.

Микоплазмы урогенитального тракта (M.hominis, M.genitalium, U.urealyticum) относят к факультативной микрофлоре. При снижении резистентности они могут быть причастны к развитию хронических воспалительных заболеваний: уретрита, вагинита, эндометрита, простатита и др., а также могут быть причиной бесплодия.

Материал на исследование – в зависимости от клинической формы микоплазмоза: мокрота, отделяемое уретры, влагалища, моча, сыворотка крови.

Микробиологическая диагностика.

1. ПЦР.

2. Обнаружение Аг возбудителя с помощью РИФ.

3. Серологический метод: ИФА.

4. Бактериологический метод.

Специфическая профилактика и лечение не разработаны.

2. раздел

128. Вирусы – возбудители острых респираторных заболеваний.

Острые респираторные заболевания вызывают как бактерии, так и вирусы. Для вирусных респираторных инфекций существует собственное название – ОРВИ (острые респираторные вирусные инфекции).

Количество возбудителей ОРВИ огромно (табл.1), поэтому человек на протяжении жизни многократно болеет респираторными заболеваниями. Практически все вирусы, вызывающие ОРВИ, за исключением адено- и бокавирусов, РНК-содержащие.

Основной путь заражения: воздушно-капельный.

Клинические проявления ОРВИ: ринит, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, иногда – в сочетании с конъюнктивитом и пневмонией. Симптомы общей интоксикации чаще выражены умеренно. Помимо ОРВИ, коронавирусы, реовирусы, бокавирусы и энтеровирусы вызывают заболевания ЖКТ.

*Описано множество коронавирусов, поражающих животных (летучие мыши, мангусты, сурикаты, собаки, кошки и др.). Некоторые варианты патогенны для человека. Коронавирусы передаются аэрогенным и контактным путями. Инфекция распространена по всему миру, регулярно возникает в детском возрасте в виде вспышек в зимнее время с 2-3-годичной цикличностью. В 2002 г. этот вирус вызвал новое заболевание – тяжелый острый респираторный синдром в виде пневмонии (SARS – severe acite respiratory syndrom), который из Китая распространился во многие страны мира. Летальность составила 9%.

В декабре 2019 г. выделен новый вирус и назван коронавирусом 2019. 11 февраля 2020 г. ВОЗ объявила о новом названии заболевания – COVID-19. В 2020 г. международный комитет по таксономии дал название: дистресссиндром коронавирус-2 (SARS-COV2). Заболевание началось в Китае, распространившись по странам и континентам. 11 марта 2020 г. ВОЗ объявила о пандемии COVID-19.

129. Характеристика вирусов гриппа, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Вирусы гриппа: РНК-содержащие, имеют суперкапсидную оболочку. На ее поверхности находятся гликопротеиновые шипы: гемагглютинин (H) и нейраминидаза (N), являющиеся протективными антигенами.

Культивирование вирусов: оптимальной моделью является куриный эмбрион, что используют для диагностики и приготовления гриппозных вакцин. Вирус культивируют также в культурах клеток и в организме лабораторных животных.

Гриппозные вирусы имеют 3 типа: А, В и С.

По структуре поверхностных антигенов вирус гриппа А подразделяют на различные подтипы (Н₁N₁, Н₃N₂, и др.).

Вирусы гриппа А обладают наибольшей антигенной изменчивостью, т.к. сегментированная РНК вируса предрасположена к постоянным генетическим рекомбинациям. Выделяют две формы изменчивости: антигенный дрейф и антигенный шифт.

Антигенный дрейф обусловлен точечными мутациями в геноме вируса, что приводит к частичным изменениям в структуре поверхностных антигенов, в основном – гемагглютинина. При этом появляются новые штаммы вируса в пределах подтипов вируса гриппа А. Антигенный дрейф происходит непрерывно и приводит к новым эпидемиям гриппа.

Антигенный шифт (от англ. shift – скачок) – результат рекомбинации генов, приводящей к полному изменению H и N, появлению нового подтипа вируса гриппа А и возникновению пандемии. Антигенный шифт возникает редко и обычно является результатом рекомбинаций, происходящих при попадании в клетку двух разных гриппозных вирусов (например, от человека и от животного). В результате образуется гибридный вирус, который может адаптироваться к существованию в организме человека.

Вирусы гриппа А имеют наибольшее эпидемиологическое значение, т.к. поражают не только человека, но и животных и становятся причиной пандемий. Известны 3 гриппозные пандемии, которые вызывали вирусы гриппа:

A (H1N1) – «испанка» (1918-1920 гг.);

A (H2N2) – «азиатский» (1957-1959 гг.); A (H3N2) – «гонконг» (1968-1970 гг.).

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: воздушно-капельный, реже – контактный.

Патогенез: с помощью гемагглютинина вирус соединяется с рецепторами эпителиальных клеток респираторного тракта, в которых происходит репродукция вирусов, нейраминидаза способствует выходу размножившихся вирусов из клетки, затем вирусы попадают в кровь (виремия), поражают клетки эндотелия кровеносных сосудов, а при попадании в ЦНС могут вызывать менингоэнцефалит.

Инкубационный период: 1-2 дня.

Грипп, в отличие от других ОРВИ, характеризуется более выраженными симптомами интоксикации и тяжелыми осложнениями: пневмония, отек легких, менингит и др.

Материал на исследование: отделяемое из носоглотки, мазки-отпечатки со слизистой оболочки носа, парные пробы сыворотки.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика: РИФ, ИФА (для определения антигенов вирусов в исследуемом материале).

2. Вирусологический метод: отделяемым из носоглотки больного заражают куриные эмбрионы с последующей идентификацией вирусов в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

3. Серологический метод: РСК и РТГА. Диагноз ставят при 4-х кратном увеличении титра антител в парных пробах сыворотки, полученных с интервалом в 10-14 дней.

4. ПЦР.

Специфическая профилактика.

Проводится перед началом эпидемического сезона (октябрь, ноябрь). Для поддержания напряженного иммунитета требуется ежегодная ревакцинация. В России используют различные варианты вакцин: живые, инактивированные, а также химические из протективных антигенов вирусов гриппа (гемагглютинина и найраминидазы). Современные химические вакцины содержат H и N вирусов, имеющих эпидемиологическое значение: A (H1N1), A (H3N2), В.

130. Характеристика вирусов парагриппа, микробиологическая диагностика.

Вирусы парагриппа: РНК-содержащие, имеют суперкапсидную оболочку, культивируются в культуре клеток.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: воздушно-капельный (основной), реже – контактный.

Патогенез: попадая в верхние дыхательные пути, вирус размножается и разрушает клетки цилиндрического эпителия, развивается отек слизистой оболочки гортани, затем поражаются нижние отделы дыхательных путей (бронхи, альвеолярный аппарат).

Инкубационный период: 3-6 дней.

Клинические формы: у взрослых чаще наблюдается ларингит; у детей – ларинготрахеобронхит, нередко с развитием ложного крупа (отек гортани), а также пневмония.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика: РИФ и ИФА (для определения антигенов вирусов в исследуемом материале).

2. Вирусологический метод: отделяемым из носоглотки заражают культуру клеток с последующей идентификацией вирусов в РН и др.

3. Серологический метод: РСК, РН и др. Диагноз ставят при 4-х кратном увеличении титра антител в парных пробах сыворотки, полученных с интервалом в 10-14 дней.

4. ПЦР.

131. Характеристика аденовирусов, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Аденовирусы: ДНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Известно более 100 серологических типов аденовирусов, 49 из которых являются патогенными для человека. Аденовирусы культивируют в культуре клеток.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: воздушно-капельный (основной), а также контактный (чаще через воду в плавательных бассейнах) и алиментарный.

Инкубационный период: 4-5 дней.

Клинические формы: ОРВИ, пневмония, бронхит, конъюнктивит, фарингоконъюнктивит, гастроэнтерит.

Материал на исследование зависит от нозологической формы заболевания.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика: обнаружение аденовирусных антигенов в мазкахотпечатках со слизистой оболочки носа с помощью РИФ, а также в отделяемом носоглотки и конъюнктивы с помощью ИФА.

2. Вирусологический метод: выделение аденовирусов в культуре клеток с последующей идентификацией в РН и др.

3. Серологический метод: РСК, РН. Диагноз ставят при 4-х кратном увеличении титра антител в парных пробах сыворотки, полученных с интервалом в 10-14 дней.

4. ПЦР.

132. Характеристика вируса кори, вызываемые заболевания, специфическая профилактика.

Вирус кори: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку, вызывает 2 формы заболеваний: корь и подострый склерозирующий панэнцефалит.

Корь (лат. morbilli) – острая инфекция преимущественно детского возраста.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: воздушно-капельный, реже – контактный.

Патогенез заболевания: вирус размножается в клетках эпителия верхних дыхательных путей, затем проникает в кровь (виремия) и поражает клетки эндотелия сосудов.

Инкубационный период: 10-14 дней.

Клинические проявления: симптомы ОРВИ, нередко конъюнктивит. За сутки до появления сыпи на слизистой оболочке щек появляются пятна Филатова-Коплика (мелкие беловатые точки, окруженные венчиком гиперемии). На 4-5 день болезни появляется яркая пятнисто-папулезная сыпь вначале за ушами и на переносице, а затем по всему телу. В этот период выражены симптомы интоксикации, отмечается высокая температура.

Диагностика кори основывается на характерных клинических симптомах заболевания.

Специфическая профилактика.

Плановая (активная): проводится живой коревой вакциной (производства России, Франции) или тривакциной против кори, эпидемического паротита и краснухи (производства США).

Экстренная (пассивная): иммуноглобулин нормальный человеческий.

Подострый склерозирующий панэнцефалит (ПСПЭ) – медленная коревая инфекция. Заболевание возникает через 2-30 лет после перенесенной кори в связи с длительной персистенцией вируса в клетках ЦНС в дефектной форме (без суперкапсида), в результате чего он не может завершить собственную репликацию. Накопление большого количества дефектных вирусов в нейронах приводит к их разрушению.

ПСПЭ – прогрессирующее заболевание нервной системы с характерной клинической картиной: нарушение речи, зрения, дискоординация движений, психические расстройства. Затем наступает коматозное состояние и летальный исход.

Микробиологическая диагностика ПСПЭ проводится серологическим методом. Наличие высоких титров антител к вирусу кори в ликворе и сыворотке крови подтверждает клинический диагноз заболевания. Широкая иммунизация коревой вакциной приводит к резкому сокращению случаев ПСПЭ.

133. Характеристика вируса эпидемического паротита, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Вирус эпидемического паротита: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Источник инфекции: больной человек.

Путь передачи: воздушно-капельный.

Эпидемическим паротитом обычно болеют дети в возрасте 3-15 лет.

Инкубационный период: 14-20 суток.

Патогенез и клиника: вирус размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки носоглотки, затем попадает в кровь и гематогенным путем проникает в железистую ткань. Заболевание сопровождается воспалением слюнных желез, чаще околоушных (они увеличены в размерах и болезненны). Отмечается умеренное повышение температуры. Реже поражаются другие железистые органы (поджелудочная железа, яички, яичники), а также ЦНС.

Осложнения при паротите: острый панкреатит, орхит (может быть причиной бесплодия, т.к. tunica albuginea яичка препятствует его гипертрофии и вызывает компрессионный некроз сперматоцитов), оофорит, серозный менингит.

Микробиологическая диагностика в случаях типичного течения болезни не проводится.

При атипичных формах заболевания используют:

1. РИФ для обнаружения антигенов вируса в материале от больного (слюна, моча, при серозном менингите – ликвор).

2. Серологический (ИФА): для выявления в сыворотке крови больного антител (IgM, IgG).

Специфическая профилактика эпидемического паротита проводится живой паротитной вакциной (Россия) или тривакциной против кори, эпидемического паротита и краснухи (США).

134. Характеристика вируса краснухи и его значение в патологии человека. Микробиологическая диагностика при подозрении на врожденную краснуху и краснуху у беременных, специфическая профилактика.

РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: воздушно-капельный (основной), реже – контактный, трансплацентарный.

Краснуха – высококонтагиозная детская инфекция. Чаще болеют дети в возрасте 1-7 лет, но могут болеть и взрослые. Особенно опасно заражение беременных.

Патогенез заболевания: вирус проникает через слизистые оболочки носоглотки в регионарные лимфатические узлы, размножается, а затем попадает в кровь и различные органы.

Инкубационный период: 14-21 день.

Приобретенная краснуха: начало заболевания характеризуется ринитом, сухим кашлем, гиперемией ротоглотки, увеличением шейных и затылочных лимфоузлов, лихорадкой, затем появляется характерный признак заболевания – обильна пятнисто-папулезная сыпь розового цвета.

У беременных в период вирусемии возбудитель проникает через плаценту и инфицирует плод. Особенно опасно заражение краснухой в I триместре, т.к. частота пороков развития плода составляет 60%, во II и III триместрах частота пороков снижается. Это связано со сроками формирования плаценты. В более поздние сроки беременности плацента в большинстве случаев не пропускает вирус краснухи. Развивается воспалительная реакция в самой плаценте (плацентит) и поэтому плод (II-III триместр) реже подвержен риску инфицирования, чем эмбрион (I триместр).

Врожденная краснуха: при врожденной краснухе чаще наблюдается триада пороков развития: катаракта, пороки сердца и глухота. Реже развивается микроцефалия (с нарушением умственного развития).

Диагноз приобретенной краснухи устанавливают на основе клиникоэпидемиологических данных.

Микробиологическая диагностика проводится при подозрении на врожденную краснуху и беременным, контактировавшим с больными краснухой.

С этой целью используют серологический метод (ИФА) для определения IgM против вируса краснухи. Для женщин, инфицированных вирусом в I триместре беременности, обнаружение IgM в сыворотке крови является показанием к прерыванию беременности.

Специфическая профилактика краснухи проводится живой краснушной вакциной или тривакциной против кори, эпидемического паротита и краснухи.

135. Характеристика вирусов полиомиелита, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика. Роль отечественных исследователей в развитии вакцинации.

Вирусы полиомиелита: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки, имеют три антигенных типа (I, II, III).

Культивирование вирусов: в культуре клеток, что используют для диагностики и приготовления полиомиелитных вакцин.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Пути передачи: чаще – алиментарный (факторы передачи – молоко, молочные продукты, овощи и др.), реже – воздушно-капельный, контактнобытовой.

Патогенез: вирус попадает в глотку, кишечник, прикрепляется к рецепторам эпителиальных клеток и размножается в регионарных лимфатических узлах глотки и кишечника, затем вирус попадает в кровь.

При наличии в крови антител к вирусу вирусемия переходит в инаппарантную или абортивную формы болезни.

При отсутствии в крови антител к вирусу происходит его проникновение в ЦНС и поражение двигательных нейронов спинного и продолговатого мозга. Чаще это приводит к развитию вялых параличей мышц туловища и конечностей, реже – к возникновению серозного менингита и параличу дыхательной мускулатуры. Паралитические формы в основном возникают у детей в возрасте от 3 до 10 лет (чаще вызваны I антигенным типом вируса).

Инкубационный период: в среднем 7-14 дней.

Классификация полиомиелита с учетом клинических признаков.

1. Без поражения цнс:

   • вирусоносительство: форма, при которой наблюдается выделение вируса из кишечника;

   • инаппарантная (бессимптомная) форма: ее диагностируют только в очагах инфекции;

   • абортивная форма: кратковременные катаральные явления в ротоглотке и/или дисфункция ЖКТ.

2. С поражением цнс:

   • паралитическая форма: с развитием вялых парезов и параличей (спинальная форма) и/или поражениями ядер черепно-мозговых нервов (синдром полиоэнцефалита);

   • непаралитическая форма: серозный менингит.

В 91-96% случаев инфекция протекает бессимптомно, в 4-8% – в виде абортивных или непаралитических форм, в 0,1-1% случаев – в виде паралитических форм.

Материал на исследование берут в зависимости от клинической формы заболевания (табл. 2).

*Фекалии при подозрении на полиомиелит берут дважды: 1 проба – в стационаре в день установления диагноза; 2 проба – через 24-48 часов после 1 пробы.

Микробиологическая диагностика.

1. ПЦР.

2. Серологический метод: РСК, РН для определения динамики нарастания титра антител.

3. Вирусологический метод: заражение исследуемым материалом культуры клеток с идентификацией вируса в РН.

Специфическая профилактика.

Плановая (активная):

1) живая полиомиелитная пероральная вакцина I, II, III типов (Россия); 2) инактивированная вакцина из вирусов полиомиелита I, II, III типов (Франция).

Экстренная (пассивная): нормальный человеческий иммуноглобулин вводят

однократно непривитым детям после контакта с больными паралитической формой полиомиелита.

Роль отечественных исследователей в развитии вакцинации.

На основе полученных А. Сэбиным аттенуированных штаммов полиовирусов I, II и III типов в конце 50-х гг. XX века отечественными вирусологами А.А. Смородинцевым и М.П. Чумаковым было налажено производство живой вакцины в нашей стране. С 1959 г. в России проводится плановая массовая вакцинация детей против полиомиелита, что позволило предотвратить эпидемии этой инфекции.

136. Характеристика неполиомиелитных энтеральных вирусов (Коксаки и echo), вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика

К неполиомиелитным энтеральным вирусам относят вирусы Коксаки А, Коксаки В, ECHO (enteric cytopathogenic human orphan), РНК-содержащие вирусы, не имеют суперкапсидной оболочки. Культивирование вирусов: Коксаки А – в организме новорожденных мышей, Коксаки В и ЕСНО – в культуре клеток. Имеют много антигенных типов. Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель. Пути передачи: алиментарный (через инфицированную воду и продукты питания), воздушно-капельный.

Материал на исследование забирают в зависимости от клинической формы заболевания: фекалии (схема забора как при подозрении на полиомиелит), отделяемое из носоглотки, ликвор (при серозном менингите).

Микробиологическая диагностика.

1. ПЦР.

2. Серологический метод: РСК, РН для определения антител в парных пробах сыворотки больного (с интервалом не менее 14 дней). Диагностическим является 4-кратное нарастание титра антител у взрослых и 2-кратное – у детей.

3. Вирусологический метод: заражение исследуемым материалом культур клеток и новорожденных мышей с последующей идентификацией в реакции нейтрализации (РН).

137. Характеристика ротавирусов, норовирусов и астровирусов, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Ротавирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Сферическая форма и наличие трехслойной капсидной оболочки придает им вид «колеса» (лат. rota – колесо).

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Пути передачи: алиментарный (через воду и инфицированные продукты), реже – контактно-бытовой.

Патогенез и клинические проявления: ротавирусы вызывают гибель зрелых эпителиоцитов тонкого кишечника, что приводит к гиперсекреции воды и электролитов в просвет тонкого кишечника. В результате у больного возникает острый гастроэнтерит, который характеризуется лихорадкой, обильным водянистым стулом желтого цвета до 10-15 раз в сутки, рвотой и обезвоживанием организма.

Чаще болеют дети первых трех лет жизни. Ротавирусы преобладают в этиологической структуре гастроэнтерита у детей младшего возраста. Ротавирусы нередко являются возбудителями внутрибольничной кишечной инфекции, особенно среди новорожденных и детей раннего возраста.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика: иммунохроматографический тест,

ИФА, РИФ для обнаружения антигенов вируса.

Норовирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Вызывают гастроэнтерит с некротическими поражениями эпителиоцитов, болями в животе и диареей. Эти вирусы являются основной причиной небактериальных гастроэнтеритов детей старше 4 лет и взрослых.

Источник инфекции: больной человек.

Путь передачи: алиментарный (через воду и пищевые продукты).

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика: ПЦР.

Астровирусы: РНК-содержащие, имеют форму икосаэдра и звездчатую поверхность с 5-6 отростками, без суперкапсидной оболочки. Вызывают гастроэнтерит с диареей, тошнотой и рвотой.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: алиментарный.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика: ПЦР.

Парэховирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки.

Вызывают гастроэнтерит. Основной группой риска являются дети до 5 лет.

Источник инфекции: больной человек.

Пути передачи: алиментарный, реже – воздушно-капельный.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика: ПЦР.

138. Характеристика вирусов гепатитов а и е, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита а.

Вирус гепатита А (HAV): РНК-содержащий, не имеет суперкапсидной оболочки.

Источник инфекции: больной человек.

Путь передачи: алиментарный (через инфицированные пищевые продукты и воду).

Патогенез: из кишечника вирус попадает в кровоток и переносится в печень. Инфицируя гепатоциты, вирус не вызывает цитотоксического эффекта. Повреждение зараженных гепатоцитов возникает в результате атаки на них ЦТЛ. Клетки, содержащие вирус, уничтожаются, повреждения восстанавливаются.

Инкубационный период: в среднем 30 дней.

Клиника: заболевание имеет острое начало, наблюдается повышение температуры, тошнота, рвота. На 5-7 день болезни возможно появление желтухи. Встречаются варианты бессимптомного течения заболевания. Хронические формы гепатита и вирусоносительство не развиваются.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА:

   • определение в сыворотке крови IgM к вирусу гепатита А на ранних стадиях болезни (основной метод);

   • определение IgG в парных пробах сыворотки крови к HAV. Диагностическим является 4-кратное нарастание тира антител.  обнаружение HAV в фекалиях больного.

2. ПЦР: обнаружение РНК вируса в фекалиях.

Специфическая профилактика гепатита а.

Активная: инактивированная культуральная вакцина;

Пассивная (экстренная): иммуноглобулин нормальный человеческий. Проводится лицам, контактировавшим с больными.

Вирус гепатита Е (HEV): РНК-содержащий, не имеет суперкапсидной оболочки.

Источник инфекции: больной человек.

Путь передачи: алиментарный, в основном через инфицированную воду.

Патогенез: репродукция вируса происходит в гепатоцитах и сопровождается гибелью клеток.

Инкубационный период: от 2 до 6 недель.

Клиника: заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией, реже – желтухой.

Наибольшую опасность гепатит Е представляет для беременных во II и III триместрах. Заболевание у них может приобретать злокачественное течение с быстрым развитием острой печеночной и почечной недостаточности. Летальность до 20%. При трансплацентарной передаче вируса могут происходить выкидыши.

Вирус гепатита Е может поражать диких и домашних животных (свиней, крупный рогатый скот, птиц и т.д.) и передаваться от них к человеку.

Материал на исследование: фекалии, сыворотка крови больного.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА: определение IgM и IgG к вирусу гепатита Е в сыворотке крови больного.

2. ПЦР: обнаружение РНК вируса в фекалиях и крови больного.

139. Возбудители парентеральных вирусных гепатитов (в, d, c, g), микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита в.

Вирус гепатита В (HBV): сложноорганизованный ДНК-содержащий вирус. Он состоит из сердцевины – капсида, являющегося его НВс-антигеном и суперкапсидной оболочки, содержащей поверхностный НВs-антиген. Суперкапсидная оболочка двухслойная, что определяет чрезвычайно высокую устойчивость вируса во внешней среде. Для его уничтожения требуется автоклавирование при давлении 1,5 атм в течение 40 минут.

Антигены вируса гепатита В:

HBsAg: поверхностный, или австралийский (впервые обнаружен в сыворотке крови австралийских аборигенов), находится в суперкапсидной оболочке вируса. Обнаруживается в крови не только в составе вирионов, но и в виде самостоятельных фрагментов, которые неинфекционны, но высокоиммуногенны, т.е. стимулируют образование анти-НВs-нейтрализующих антител. HBsAg также обнаруживают в слюне, моче, сперме, влагалищном секрете;

HBcAg: «сердцевинный антиген», никогда не определяется в свободном состоянии в крови. Его обнаруживают только в зараженных вирусом гепатоцитах;

HBeAg: является производным HBcAg. Появление HBeAg в крови связано с репликацией вируса в гепатоцитах;

HBxAg: появляется при развитии первичного рака печени.

Источник инфекции: вирусоноситель или больной человек. Главными источниками заболевания являются вирусоносители, количество которых в мире превышает 400 миллионов человек.

Пути передачи:

• парентеральный (основной) – при переливании крови и ее препаратов, при инъекциях, зубоврачебных манипуляциях и т.д.;

• половой (через сперму и влагалищный секрет);

• интранатальный;

• трансплацентарный;

• трансплантационный.

Патогенез: вирус гепатита В размножается в гепатоцитах без их. Для HBV характерно взаимодействие с гепатоцитами как по типу интегративной, так и по типу продуктивной инфекции. Интегративная инфекция сопровождается встраиванием вирусной ДНК в хромосому гепатоцита. При этом наблюдается синтез HBsAg. В процессе продуктивной инфекции происходит формирование новых вирусных частиц. Репликация вируса протекает в цитоплазме гепатоцита. Маркером репликации является появление в крови HBеAg. Сам вирус не разрушает клетки. Повреждение и лизис гепатоцитов вызывают CD8⁺ Тлимфоциты, что провоцирует клеточное воспаление и развитие острого гепатита.

Инкубационный период: от 30 до 90 дней.

Клинические формы:

• острая: может протекать как с клиническими проявлениями (желтушный и безжелтушный варианты), так и без них (инаппарантная форма);

• хроническая (у 10-15% больных): формируется в результате интегративной вирусной инфекции и проявляется рецидивирующей симптоматикой с нарушениями функции печени в периоды репликации вируса.

Осложнения: острая печеночная энцефалопатия (печеночная кома), цирроз печени, первичный рак печени.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА:

   • определение HBs- и HBeAg в крови больного. Показателем активной репликации вируса (при острой инфекции и рецидиве хронической формы) является одновременное присутствие в крови HBs- и HВeAg. При хронической форме в стадии ремиссии в крови длительно и стабильно обнаруживается только HBs-антиген.

   • определение IgM к HBcAg, что свидетельствует об острой форме заболевания.

2. ПЦР: определение ДНК вируса гепатита В в крови, что свидетельствует об остром течении гепатита.

Активная (плановая) специфическая профилактика гепатита В: рекомбинантная генно-инженерная вакцина (Россия) – содержит HBsAg (входит в календарь прививок). Длительность поствакцинального иммунитета не менее 7 лет.

Вирус гепатита D (дельта вирус): дефектный РНК-содержащий вирус (не имеет суперкапсидной оболочки), является сателлитом (спутником) вируса гепатита В, т.к. способен к репродукции только в HBV-инфицированных клетках. Дельта-вирус использует HBsAg в качестве своего оболочечного белка для защиты собственного генома.

Источник инфекции: больной или вирусоноситель.

Пути передачи: аналогичные гепатиту В.

Клиническая картина аналогична проявлениям гепатита В, но с преобладанием более тяжелого течения.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА: определение IgM и IgG к вирусу гепатита D.

2. ПЦР: обнаружение РНК вируса в крови больного.

Вирус гепатита С (HCV): РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку. Нуклеиновая кислота вируса обладает высокой генетической изменчивостью вследствие частых мутаций.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Пути передачи: парентеральный (основной) – при инъекциях и гемотрансфузиях, реже – трансплацентарный и половой.

Каждый второй пациент с HCV-инфекцией относится к лицам, вводившим внутривенно наркотики (гепатит наркоманов). В мире более 1/3 населения инфицированы HCV.

Инкубационный период: от 6 до 120 недель.

Клиническое течение: В связи с высоким уровнем генетической изменчивости в течение заболевания, HCV «ускользает» от иммунного надзора организма. Эта особенность определяет значительное количество (до 85%) хронических форм заболевания. Острое заболевание протекает, как правило, в виде стертой или бессимптомной (инаппарантной) форм, но в 50% случаев переходит в хроническую форму.

Осложнения: цирроз печени, первичный рак печени.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА: определение IgM и IgG к HCV в сыворотке крови больного.

2. ПЦР: определение РНК вируса гепатита С в крови больного.

Вирус гепатита G: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Гепатит G в большинстве случаев протекает как микст-инфекция с гепатитом C.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Основной путь передачи: парентеральный.

Репродукция вируса происходит по типу продуктивной инфекции.

Клиническое течение: заболевание протекает в острой (как правило, бессимптомно) или в хронической форме.

Микробиологическая диагностика.

1. ИФА: определение IgM и IgG к вирусу гепатита G в сыворотке больного.

2. ПЦР: выявление вирусной РНК в крови больного.

140. Общая характеристика представителей семейства герпетических вирусов.

Семейство Herpesviridae разделено на 3 подсемейства (,  и -virinae), которые включают 8 типов герпесвирусов человека (табл.3).

Герпесвирусы (греч. herpes – ползучий): ДНК-содержащие, имеют суперкапсидную оболочку.

141. Характеристика вирусов простого герпеса, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Вирусы простого герпеса (HSV) подразделяют на 2 антигенных типа:

HSV-1 и HSV-2.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Заражение HSV-1 происходит обычно в раннем возрасте (от 6 месяцев до 3 лет) контактным (через инфицированную слюну при поцелуях или попадании на кожу) и воздушно-капельным путями. Около 90% населения земного шара инфицированы HSV-1.

Патогенез: после проникновения в организм вирус размножается в клетках эпителия зон первичного инфицирования (слизистые оболочки ротовой полости и кожи), а затем через нервные окончания проникает в паравертебральные ганглии и ганглии тройничного нерва, где длительно (чаще пожизненно) персистирует в нейронах и находится в латентном состоянии.

Под действием активирующих факторов (УФ-излучение, лихорадка, переохлаждение, эмоциональный стресс, иммуносупрессия и др.) геном вируса мигрирует по аксону в эпителиальные клетки, латентная инфекция переходит в острую и сопровождается различными клиническими симптомами.

Клинические формы:

• герпес кожи: пузырьковые высыпания на губах, крыльях носа, щеках, ягодицах и др.;

• герпетический стоматит;

• офтальмогерпес (кератит): при этой форме заболевания возможна необратимая потеря зрения вследствие развития язв роговицы с последующим рубцеванием;

• энцефалит (редкая форма заболевания) с высокой летальностью.

Заражение HSV-2 происходит преимущественно половым путем.

Патогенез: HSV-2 из первичного очага поражения (слизистые половых путей) мигрирует в поясничные и крестцовые ганглии, где, подобно HSV-1, длительно персистирует и формирует латентную инфекцию. HSV-2 нередко активируется под действием тех же факторов, что и HSV-1, а также при менструации, что приводит к манифестации инфекции.

Клинические формы:

• генитальный герпес при половом пути заражения. Заболевание характеризуется пузырьково-язвенными высыпаниями на коже и слизистой оболочке половых органов, сильным зудом и болевым синдромом;

• герпес новорожденных: тяжелая генерализованная инфекция, которая чаще проявляется в форме герпетической экземы или менингоэнцефалита.

Инфицирование происходит во время родов (интранатально);

• HSV-2 причастен к возникновению рака шейки матки и карциномы простаты.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-методы: РИФ и ИФА для определения вирусных антигенов в содержимом везикул, слюне и соскобах из области поражений.

2. ПЦР.

3. Серологический: ИФА, РИФ, РСК – для диагностики первичной инфекции.

4. Вирусологический: заражение культуры клеток или куриных эмбрионов исследуемым материалом;

Ввиду значительной инфицированности населения, обнаружение сывороточных антител не имеет существенной диагностической ценности.

Специфическая профилактика рецидивирующего герпеса осуществляется в период ремиссии многократным введением инактивированной культуральной герпетической вакцины, содержащей HSV-1 и HSV-2.

142. Характеристика Herpesvirus varicella-zoster, вызываемые заболевания.

Herpesvirus varicella-zoster (HVZV):

ДНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

H.varicella-zoster вызывает:

• ветряную оспу – при первичном инфицировании;

• опоясывающий герпес – в случае активации оставшегося в организме вируса после переболевания ветряной оспой.

Ветряная оспа – острая детская инфекция.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Основной путь передачи: воздушно-капельный. Реже передача HVZV может происходить трансплацентарно и приводить к развитию тяжелой формы врожденной ветряной оспы.

Патогенез: после попадания в организм вирус размножается в клетках эпителия слизистой оболочки верхних дыхательных путей, затем попадает в кровь (виремия) и распространяется по всему организму, главным образом в эпителий кожи и слизистых оболочек.

Инкубационный период: 11-23 дня.

Клинические проявления: лихорадка, интоксикация и папулезновезикулезная сыпь на коже и слизистых оболочках.

После выздоровления вирус персистирует в нейронах паравертебральных ганглиев и ганглиях тройничного и лицевого нервов. У некоторых переболевших людей вирус периодически активируется, обычно в возрасте старше 40-50 лет, и вызывает опоясывающий герпес, который характеризуется везикулезными высыпаниями на коже, чаще по ходу межреберных нервов, и резкими болями (невралгии) в очаге поражения.

143. Характеристика Herpesvirus cytomegalus, вызываемые заболевания, диагностика.

H.cytomegalus (HCMV): ДНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку, вызывает цитомегаловирусную инфекцию (ЦМВИ).

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.

Инфицирование вирусом распространено повсеместно (антитела против HCMV выявляют у 80% людей старше 30 лет).

Вирус содержится во всех биологических жидкостях организма (слюна, вагинальный секрет, сперма, кровь, грудное молоко и др.), что приводит к многообразию путей заражения.

Пути заражения:

1. воздушно-капельный;

2. контактно-бытовой;

3. половой;

4. гемотрансфузионный (фактор передачи – кровь инфицированного донора);

5. трансплацентарный и интранатальный; 6. алиментарный (чаще через грудное молоко);

7. трансплантационный.

Патогенез: вирус обладает выраженным тропизмом к эпителию слюнных желез и почечных канальцев, где происходит его репродукция и персистенция при латентной инфекции. Вирус активируется при ослаблении Т-клеточного иммунитета с развитием манифестированной формы заболевания. В связи с этим, ЦМВИ относится к наиболее частой СПИД-ассоциированной инфекции.

Клинические проявления характеризуются поражением многих органов и тканей с разнообразной симптоматикой – от пожизненной латентной инфекции до генерализованной формы.

Беременность может приводить к реактивации вируса.

Наибольшую опасность представляет врожденная ЦМВИ, характеризующаяся гепатоспленомегалией, желтухой, микроцефалией и другими пороками развития с частым летальным исходом. Врожденные аномалии наиболее типичны в случаях, когда плод инфицируется в I триместре, т.к. в этот период идет закладка органов. Заражение плода происходит при первичном инфицировании беременной, у которой нет антител, способных нейтрализовать вирус.

Поэтому врожденная ЦМВИ возникает редко (≈1%).

Реактивация вируса из латентного состояния в шейке матки иногда приводит к интранатальному заражению новорожденного.

Материал на исследование: моча, слюна, ликвор (при поражении ЦНС), кровь, отделяемое цервикального канала, уретры.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-методы: микроскопический: выявление в мазках, окрашенных гематоксилинэозином, гигантских клеток («совиный глаз») с внутриядерными включениями вируса;

РИФ: выявление вирусных антигенов в исследуемом материале.

2. ПЦР.

3. Серологический метод: ИФА – определение IgM и IgG. Доказательством врожденной ЦМВИ является наличие в сыворотке новорожденного

IgM, которые не передаются через плаценту.

144. Характеристика вируса Эпштейна-Барр, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

Вирус Эпштейна-Барр (HEBV): ДНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель. Возбудитель выделяется со слюной.

Пути передачи: контактный (при поцелуях), воздушно-капельный, реже – гемотрансфузионный.

Патогенез: HEBV поражает лимфоидную ткань всего организма и имеет тропизм к В-лимфоцитам, где происходит репродукция вирусов. Вследствие этого происходит размножение В-лимфоцитов без их гибели, но с преобладанием незрелых клеток.

Вирус Эпштейна-Барр вызывает:

Инфекционный мононуклеоз: чаще болеют в детском и юношеском возрасте. Антитела к вирусу имеются у большинства людей. Заболевание характеризуется лихорадкой, болями в горле, фарингитом, лимфоаденопатией (увеличение всех групп лимфоузлов, особенно затылочных, подчелюстных, заднешейных), гепатоспленомегалией. В крови появляется большое количество атипичных мононуклеаров (бластоподобные лимфоциты и моноциты).

Лимфопролиферативные заболевания. Вирус является митогеном для Влимфоцитов и способствует развитию опухолей, особенно у пациентов с дефектом Т-клеточного иммунитета, а также опухолей, имеющих эндемичный характер: африканская лимфома Беркитта у детей, в Юго-Восточной Азии – карцинома носоглотки у молодых мужчин.

Диагностика.

1. Общий анализ крови: обнаружение атипичных мононуклеаров (95,5%).

2. ПЦР.

145. Характеристика вируса иммунодефицита человека, пути заражения и контингенты риска.

СПИДассоциированные заболевания

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ): РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

ВИЧ вызывает инфекцию, сопровождающуюся быстрым эпидемическим распространением и заканчивающуюся синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД). СПИД характеризуется тяжелым поражением иммунной системы, длительным течением, полиморфностью клинических симптомов, абсолютной летальностью.

Характерная особенность вируса – наличие обратной транскриптазы – РНК-зависимой ДНК-полимеразы. Обратная транскриптаза (или ревертаза) обеспечивает обратную направленность передачи генетической информации от РНК к ДНК. Это свойство вирусов придает им способность к интегративной инфекции в клетках организма хозяина.

На поверхности вируса находятся 2 типа вирусных гликопротеинов. Одни из них (gp 120) взаимодействуют с рецепторами CD4⁺ клеток организма человека (Т-хелперы, макрофаги и моноциты). Наиболее чувствительны к ВИЧ – Тхелперы, т.к. содержат на своей поверхности большое количество рецепторов CD4.

Выделяют 2 антигенных варианта вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые различаются по строению генома.

ВИЧ-1 обладает высокой антигенной изменчивостью. Она касается постоянно мутирующего гена, продуцирующего синтез gp120-гликопротеина. В результате образуется много антигенных вариантов. Это затрудняет создание эффективных вакцин.

Патогенез: взаимодействие ВИЧ с клетками организма происходит по типу интегративной инфекции. В интегрированном с ДНК клетки состоянии вирус может длительно персистировать в организме (до 10 и более лет). При активации вируса интегративная инфекция переходит в продуктивную, что приводит к клиническим проявлениям ВИЧ-инфекции.

ВИЧ обладает тремя механизмами уклонения от действия иммунной системы: 1) интеграция вирусной нуклеиновой кислоты с ДНК клетки хозяина, что приводит к длительному сохранению инфекции; 2) вирус нарушает работу МНС I, в результате ЦТЛ не распознает и не уничтожает ВИЧ-инфицированные клетки; 3) ВИЧ инфицирует и убивает CD4⁺ Th, что приводит к нарушению работы как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета в целом. Наступает состояние иммунодефицита.

Источник инфекции: больной человек или ВИЧ-инфицированный.

Наибольшая концентрация вируса, опасная для заражения, присутствует в крови, семенной жидкости, вагинальном секрете, более низкая – в грудном молоке.

Исследуемый материал: кровь больного.

146. Методы диагностики вич-инфекции. Спид-ассоциированные заболевания. Микробиологическая диагностика.

1. ИФА: определение вирусных антигенов (ранняя диагностика) и суммарных антител к ВИЧ (через 2 недели от начала острой инфекции);

2. Иммуноблоттинг (blot (англ.) – пятно): комбинированный метод (электрофорез + ИФА). Блоттинг – перенос разделенных электрофорезом белков ВИЧ на фильтровальную бумагу для дальнейшего определения антител к данным белкам с помощью ИФА. Первые недели после инфицирования представляют собой период «серонегативного окна», когда антитела к ВИЧ не выявляются, его длительность около 3 месяцев, иногда 6-10 месяцев;

3. ПЦР: определение РНК ВИЧ в крови в остром периоде.

ВИЧ-инфекция характеризуется длительным течением и прогрессирующим снижением иммунитета. Это приводит к развитию тяжелых форм оппортунистических инфекций и заканчивается гибелью больного.

Основные спид-ассоциированные заболевания, приводящие к смерти больных с вич-инфекцией.

1. Оппортунистические инфекции:

   • вызванные простейшими (токсоплазмы и др.);

   • вызванные грибками (Pneumocystis сarinii – возбудитель пневмоцистной пневмонии; Candida и др);

   • вызванные бактериями (микобактерии, условно-патогенные бактерии и др.);

   • вызванные вирусами (герпетические вирусы).

2. Опухолевые процессы:

   • саркома Кáпоши: множественная злокачественная опухоль сосудистой ткани. Характеризуется кожными поражениями в виде пятен красносинего цвета;

   • лимфома мозга и других локализаций.

147. Характеристика вирусов бешенства, микробиологическая диагностика, лечебнопрофилактическая иммунизация.

Вирус бешенства: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Выделяют 2 варианта вируса: «уличный», вызывающий бешенство и «фиксированный», аттенуированный (получен Л. Пастером путем многократных пассажей уличного вируса через мозг кроликов) – применяется для получения антирабической вакцины.

Бешенство (rabies) – древняя зоонозная инфекция. Резервуарами возбудителя могут быть практически все теплокровные животные.

Основные источники инфекции для человека: среди диких животных – хищники, в России – чаще лисы и волки; из домашних животных – собаки и кошки.

Заражение в большинстве случаев происходит через укусы больными животными или при попадании их слюны на поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки. Животные заразны с конца инкубационного периода, в среднем в течение 10 дней, до появления у них клинических симптомов заболевания.

Инкубационный период варьируется от нескольких дней до нескольких месяцев. Длительность инкубационного периода зависит от близости места укуса к головному мозгу. Наиболее короткий инкубационный период регистрируется при укусах в области головы, шеи, кистей рук.

Патогенез и клиника: при попадании в организм вирус бешенства размножается в тканях на месте укуса. Затем по аксонам периферических нервов достигает клеток головного и спинного мозга, где размножается. В цитоплазме нейронов продолговатого мозга и гиппокампа происходит накопление вируса с образованием включений Бабеша-Негри. Под действием вируса наступает гибель нейронов, что вначале приводит к повышению рефлекторной возбудимости, а затем к развитию судорог и параличей. Из мозга вирус центробежно попадает в различные ткани, в том числе в слюнные железы, откуда выделяется со слюной.

Выделяют 3 стадии заболевания:

1. начальная: неприятные ощущения в области укуса, бессонница, беспокойство, депрессия;

2. возбуждения: основным признаком заболевания является гидрофобия (водобоязнь), т.к. при попытке выпить воду у больного возникают судороги мышц глотки и гортани. Судороги могут быть спровоцированы громким звуком (фонофобия), ярким светом (фотофобия), движением воздуха (аэрофобия);

3. параличей: судороги и приступы фобий прекращаются. Смерть наступает от паралича дыхательного или сердечно-сосудистого центров. Летальность составляет ≈100%.

Микробиологическая диагностика.

Прижизненная диагностика основана на клинических проявлениях заболевания.

Посмертная диагностика.

1. Микроскопический метод: определение в мазках-отпечатках из области гиппокампа вирусных включений в окраске по Селлерсу. В пораженных вирусами нейронах обнаруживают розово-красные включения Бабеша-Негри на голубом фоне цитоплазмы.

2. РИФ: определение вирусного антигена в том же исследуемом материале.

3. Вирусологический: внутримозговое заражение белых мышей. Материал на исследование: кусочки мозга из области гиппокампа и ткань слюнных желез.

Лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве проводится после укусов больными или подозрительными на бешенство животными, при ослюнении поврежденных кожных покровов и слизистых оболочек, при повреждении кожи в процессе вскрытия трупов.

Активная лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве:

концентрированная очищенная культуральная инактивированная антирабическая вакцина.

Пассивная лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве:

иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошадей (Россия), иммуноглобулин антирабический человеческий донорский (Франция).

Иммуноглобулин используют одновременно с вакциной в случаях короткого инкубационного периода (при укусах в области головы, кистей рук, шеи).

148. Общая характеристика арбовирусов, роль отечественных исследователей в их изучении.

Название «арбовирусы» происходит от лат. arthropoda – членистоногие и англ. borne – передающийся. Животные и человек заражаются при укусах кровососущих членистоногих (клещи, комары) в природных очагах инфекции. Около 100 видов арбовирусов способны вызывать заболевания у людей. Это

РНК-содержащие вирусы, имеют суперкапсидную оболочку, за исключением Reoviridae.

В группу арбовирусов включены представители 4 семейств:

1. Togaviridae (от лат toga – плащ, накидка);

2. Bunyaviridae (название дано по местности Буньямвера в Уганде);

3. Reoviridae, помимо ОРВИ, некоторые представители относятся к арбовирусам;

4. Flaviviridae (от лат. flavis – желтый).

Арбовирусные инфекции в подавляющем большинстве природно-очаговые заболевания, связанные с местами обитания диких животных – прокормителей членистоногих.

Клинически проявляются в виде следующих основных заболеваний:

• энцефалиты и энцефаломиелиты (весенне-летний клещевой энцефалит, японский энцефалит, венесуэльский энцефаломиелит и др.);

• геморрагические лихорадки (конго-крымская геморрагическая лихорадка, омская геморрагическая лихорадка, желтая лихорадка, лихорадка денге и др.).

Материал на исследование – в зависимости от заболевания.

Микробиологическая диагностика.

1. Вирусологический.

2. Серологический.

3. ПЦР.

Роль отечественных исследователей в изучении арбовирусов.

Учение о природной очаговости инфекционных заболеваний было создано отечественным эпидемиологом Е.Н.Павловским в начале XX века. В открытие и изучение вирусов клещевого и японского энцефалитов, крымской и омской геморрагических лихорадок большой вклад внесли отечественные ученыевирусологи Л.А. Зильбер, М.П. Чумаков, А.А. Смородинцев.

149. Вирусы весенне-летнего клещевого энцефалита, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Вирус клещевого энцефалита: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.

Клещевой энцефалит – природно-очаговое инфекционное заболевание, которое встречается на территории России (в Сибири, на Дальнем Востоке, на Урале), а также в Центральной и Северной Европе, в регионах с хвойными лесами. Характерна весенне-летняя сезонность.

Основной резервуар и переносчики вируса: иксодовые клещи. Поддержание циркуляции вируса осуществляется за счет «прокормителей» клещей – грызунов, птиц, диких и домашних животных.

Пути передачи: трансмиссивный (основной) – через укусы клещей, алиментарный (при употреблении сырого молока коз и овец).

Инкубационный период: 8-20 дней.

Патогенез и клиника: в месте проникновения вирусов происходит их репродукция и накопление. Затем гематогенным или лимфогенным путем вирусы проникают в спинной и головной мозг, поражая все отделы ЦНС, особенно двигательные нейроны спинного мозга и стволовой части головного мозга. Заболевание начинается остро, с внезапного подъема температуры до 39-40⁰С. Различают несколько клинических форм заболевания: лихорадочную, менингеальную и паралитическую. Летальность составляет 15-20%.

Материал на исследование: кровь, ликвор, парные пробы сыворотки.

Микробиологическая диагностика.

1. ПЦР.

2. Серологический метод: РСК, РТГА и ИФА с парными пробами сыворотки больного с интервалом 2-3 недели.

3. Вирусологический метод: материалом от больного (кровь, ликвор) заражают белых мышей интрацеребрально с целью выделения и идентификации вируса (широкого применения метод не имеет).

Активная специфическая профилактика: инактивированная культуральная вакцина (по эпидпоказаниям).

Экстренная (пассивная) специфическая профилактика и специфическое лечение: иммуноглобулин против клещевого энцефалита человеческий донорский, иммуноглобулин против клещевого энцефалита лошадиный.

150. Геморрагические лихорадки, характеристика возбудителей, микробиологическая диагностика.

Возбудители геморрагических лихорадок: РНК-содержащие вирусы, имеют суперкапсидную оболочку.

Геморрагические лихорадки – острые лихорадочные заболевания, характеризующиеся поражением кровеносных сосудов с развитием геморрагического синдрома (кровоизлияния и кровотечения).

В России встречаются: конго-крымская геморрагическая лихорадка

(ККГЛ), лихорадка Западного Нила (ЛЗН), омская геморрагическая лихорадка (ОГЛ), геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) и др. Геморрагические лихорадки относят к природно-очаговым зоонозным инфекциям. ККГЛ чаще встречается в южных регионах, включая Ростовскую область. ЛЗН регистрируется в Западной Сибири, Краснодарском крае, Астраханской, Волгоградской областях. ОГЛ распространена в Западной Сибири. ГЛПС регистрируется на Урале, в Поволжском и Волго-Вятском районах.

Резервуарами возбудителей являются животные (грызуны, крупный и мелкий рогатый скот) клещи, для ЛЗН – дикие и домашние птицы.

Геморрагические лихорадки характеризуются общими симптомами: высокая температура, интоксикация, на 3-4-й день присоединяется геморрагический синдром (кожные кровоизлияния, носовые и маточные кровотечения, геморрагический конъюнктивит и др.)

Основной путь передачи (кроме ГЛПС): трансмиссивный (через укусы клещей, комаров и москитов), для ККГЛ возможен контактный путь при проведении медицинских манипуляций.

Вирусы – возбудители ГЛПС не относятся к арбовирусам, и выделены в отдельную группу робовирусов (от англ rodent borne viruses – «вирусы, рожденные грызунами»).

Источник инфекции: лесные и степные грызуны.

Пути передачи: аэрогенный, алиментарный (через продукты, инфицированные выделениями грызунов), контактный.

Микробиологическая диагностика.

1. Экспресс-диагностика: обнаружение в крови вирусных антигенов с помощью РИФ, ИФА, РНГА и др.

2. ПЦР.

3. Серологический метод: РСК, ИФА, РИФ, РНГА и др.

151. Характеристика папилломавирусов человека, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Вирусы папилломы человека (ВПЧ): ДНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Описано около 200 папилломавирусов.

Папилломавирусы человека инфицируют кожу, слизистые оболочки и размножаются там, вызывая доброкачественные папилломы (ВПЧ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 27, 57, 60). ВПЧ 5 и 8 связаны с развитием некоторых (немеланомных) разновидностей рака кожи.

Различают низкоонкогенные ВПЧ, вызывающие бородавки. Существуют и высокоонкогенные ВПЧ, способные вызывать рак шейки матки (ВПЧ 16, 18, 31,

33, 35, 45, 51, 52, 58).

Источники инфекции: больной человек и вирусоноситель.

Пути передачи: контактный, половой, интранатальный.