Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
538
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

Биотехнология в сельском хозяйстве

Генетическая ферма и ксенотрансплантация

ВВЕДЕНИЕ. Для сельского хозяйства большой инте-

ре VIII (120 г). Пока, однако, получать медицинские

рес представляют трансгенные животные, обладаю-

препараты таким методом не разрешается.

щие «улучшенными» признаками. Однако из-за доро-

КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИЯ. Благодаря трансплантации

говизны методов и бурных общественных дискуссий

были спасены жизни более 200 000 человек. В США

об этических аспектах и мерах безопасности при раз-

трансплантации сердца ожидают около 45 000 чело-

ведении трансгенных животных в настоящее время

век, однако ежегодно лишь 2000 человек получают

их не используют для получения пищевых продуктов.

«новое» сердце. В качестве доноров органов могут

На генетических фермах выращивают трансгенных

быть использованы трансгенные животныe. Лучше

мышей, овец, коз или коров и получают важные с ме-

всего из домашних животных для этого подходят сви-

дицинской точки зрения белки в молоке, откуда их

ньи, поскольку их органы и органы человека имеют

легко выделить. Такой метод, как и в случае транс-

сходный размер, анатомию и физиологию. Основной

генных растений, позволяет значительно увеличить

проблемой при ксенотрансплантации является реак-

выход продукта и может конкурировать с методами

ция отторжения чужеродных органов. При этом раз-

синтеза рекомбинантного белка в клетках или в био-

личают 1) гиперострое отторжение (от секунд до не-

реакторе. Трансгенных свиней выращивают для полу-

скольких минут), которое вызвано быстрой

чения органов для ксенотрансплантации (прежде

активацией системы комплемента реципиента;

всего трансплантации сердца).

2) острое отторжение (сутки), обусловленное реак-

ЖИВОТНОВОДСТВО. Основной целью создания

цией Т-клеток, встречается также при пересадке ор-

трансгенных сельскохозяйственных животных явля-

ганов от одного человека другому; 3) хроническое от-

ется увеличение их веса, что достигается за счет эн-

торжение (до нескольких лет), точные причины

догенного синтеза соматотропина в результате пере-

которого пока не установлены. При пересадке орга-

носа генов. Кроме того, животноводы пытаются

нов из организма другого вида первоочередной зада-

повысить устойчивость животных к стрессу и болез-

чей является предотвращение гиперострого отторже-

ням, а также улучшить ряд качественных признаков.

ния. С этой целью были выведены трансгенные

У млекопитающих перенос генов осуществляется в

свиньи, у которых в каскаде реакций комплемента

основном путем микроинъекций в ядро яйцеклетки

принимают участие некоторые факторы человека.

или путем переноса эмбрионов, у домашней птицы –

В первую очередь речь идет о hCD55 (фактор усиле-

посредством рекомбинантных ретровирусов или оп-

ния распада, DAF). Приматы, которым пересаживали

лодотворения яйцеклеток сперматозоидами, несу-

сердца трансгенных свиней с этим фактором, жили

щими генные конструкции. Трансгенных рыб получа-

до 40 дней, тогда как контрольные животные с серд-

ют введением ДНК в яйцеклетки электропорацией.

цами от нетрансгенных доноров погибали в течение

В качестве примеров можно привести снижение вос-

нескольких минут.

приимчивости к болезням (например, ген устойчиво-

 

сти к стрессу ryr1 у свиней) и усиление холодостой-

 

кости за счет клонированного гена антифризного

 

белка.

 

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ФЕРМА. Ценные для медицины белки можно получать в молоке трансгенных животных. Для этого ген белка клонируют под контролем β- или αS1-казеинового промотора в ядре оплодотворенной яйцеклетки и переносят зиготу или выращенный ex vivo эмбрион в суррогатную мать. Выход трансгенных животных при таком подходе незначителен (< 0,1% использованных яйцеклеток), однако в случае успеха сразу получается трансгенное животное, синтезирующее необходимый белок (например, α1-антитрипсин, tPA, урокиназу, IGF-1, IL-2, лактоферрин или сывороточный альбумин человека) в количестве до 35 г/л молока. Продукт можно выделить из молока или употреблять непосредственно с молоком. Если считать, что одна дойная корова дает 10 000 л молока в год, то одной трансгенной коровы хватит, например, для того чтобы удовлетворить по-

170 требность системы здравоохранения США в факто-

Изменение свойств сельскохозяйственных животных

 

 

Мишень

Свиньи

Синдром злокачественной гипертермии:

Рианодиновый рецептор,

 

обмен Са в мышцах

6-я хромосома Cysx → Arg

Коровы

κ-Казеин: качество молока

Ген κ-казеина

Лосось

Антифризный белок: устойчивость

Клонирование гена антифризного белка

 

к экстремальным температурам

камбалы

 

 

 

Получение фармацевтических продуктов с использованием трансгенных животных

 

Выделение

 

 

оплодотворенных

 

 

эмбрионов

Тестирование

 

 

 

 

потомков

 

 

на содержание

ДНК

 

гена целевого

Микро-

белка

β-казеина

инъекция

редко

коз

вектора

 

 

в эмбрион

 

 

 

часто

 

Экспрес-

Важные для

Моло Молоко Молоко Молоко

ДНК гена

сирующий

медицины белки

 

 

 

вектор для

 

 

целевого

 

Рекомбинантный

гена целевого

 

белка

 

белок в молоке

белка

 

 

 

 

Определение экспрессии

гена целевого белка

Индукция лактации

Селекция и разведение животных – основателей породы

Трансгенное стадо

 

Регуляторные

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

последовательности

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ex1 ex2

h-tPA

кДНК

ex7 ex8 ex9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ex1, 2, 7–9: экзоны генов β-казеина коз

 

 

 

 

 

 

 

 

 

h-tPA: активатор тканевого плазминогена человека

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Экспрессия важных для медицины белков в молоке трансгенных лабораторных животных

Генная конструкция

Рекомбинантный белок

Выход продукта, мг/л

Трансгенное

 

 

 

животное

Кислый белок сыворотки

tPA (кДНК)

0–50

Коза

Кислый белок сыворотки

Белок С (кДНК)

1 000

Свинья

β-Лактоглобулин

α1-Антитрипсин (геномный)

35 000

Овца

β-Лактоглобулин

Сывороточный альбумин человека

10 000

Мышь

β-Казеин коз

tPA (кДНК)

3 000

Коза

αS1-Казеин коров

Урокиназа (геномная)

2 000

Мышь

αS1-Казеин коров

Инсулиновый фактор роста (IFG-1) (кДНК)

10 000

Кролик

 

 

 

 

Использование трансгенных животных в производстве медицинских препаратов

Белок

Потребность

Объем плазмы

Необходимое количество

 

в белке в США, кг/год

человека, л

молочных коров с удоем 10 000 л/год

 

 

 

 

Фактор VIII

0,120

1 200 000

1,2

Белок С

100

20 000 000

100

Фибриноген

200

500 000

20

α1-Антитрипсин

800

4 000 000

80

Сывороточный альбумин

100 000

2 000 000

5 000

171

Биотехнология в сельском хозяйстве

172

Растениеводство

ВВЕДЕНИЕ. Вот уже около 11 000 лет – со времен

растений. В Германии эта отрасль хозяйства прино-

«революционного неолита» – люди культивируют рас-

сит прибыль около 10 млрд евро в год.

тения и пытаются повышать их урожайность различ-

ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО. Уже в древности люди замети-

ными способами. В результате длительной селекции

ли, что варварское отношение к лесам приводит к

возникли современные культурные растения, которые

вымиранию и опустошению местностей, однако и в

отличаются от диких предков по количеству биомас-

наши дни человек продолжает вырубать лес, в част-

сы, продуктивности и количеству семян. Люди и до-

ности во влажных тропиках. В 1800 г. в странах

машние животные питаются преимущественно этими

средней и северной Европы впервые стали приме-

культурными растениями. Однако уже сегодня из

нять практику устойчивого лесопользования (возраст

6 млрд человек на Земле почти треть не получает

вырубаемых елей – примерно 100 лет, дубов – при-

полноценного питания. Если учесть прогнозируемое

мерно 300 лет). Древесина (годовое производство

удвоение населения Земли в последующие 50 лет,

составляет 7 107 т) – ценное сырье в химической и

становится очевидной необходимость увеличения ко-

целлюлозно-бумажной промышленности, из нее по-

личества выращиваемых растений.

лучают также пиломатериалы, обрезную доску, ме-

РАСТЕНИЕВОДСТВО. Успехи растениеводства оцени-

бель и т.д.

ваются по числу сортов различных растений с ти-

СОВРЕМЕННЫЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

пичными признаками, передающимися по наследст-

Для получения стерильных мужских линий в растени-

ву. Новый сорт растения возникает как результат

еводстве можно использовать генетические методы,

скрещивания и отбора. По способу размножения и

например клонирование гена высокоактивной РНКазы

оплодотворения, генетической структуре и составу

из Вacillus amyloliquefaciens под контролем специфич-

различают линейные, популяционные, синтетиче-

ных для пыльцы промоторов, что приводит к засыха-

ские, клонированные и гибридные сорта. Генетиче-

нию пыльцы. Регуляция процесса осуществляется при

ски гомогенные линейные сорта получаются при са-

помощи Restorer-гена, продукт которого ингибирует

моопылении растений, таких как пшеница, рис,

РНКазы. Развитие методов получения каллусной, ме-

ячмень или сахарный тростник. Большинство цве-

ристемной, протопластной и гаплоидных культур и их

тковых растений, например кукуруза, картофель,

регенерации в целые ди- и гаплоидные организмы со-

соя и сахарная свекла, перекрестноопыляемые, их

вершило настоящую революцию в растениеводстве,

популяции чаще всего представлены гетерозигот-

значительно сократив затраты времени по сравнению

ными линиями. Если допустить вегетативное раз-

с классическими процедурами селекции. Трансгенные

множение, например, картофеля или сахарного тро-

растения могут экспрессировать факторы устойчиво-

стника можно получить клонированный сорт с

сти к вирусам, грибам, бактериям, гербицидам и ин-

выровненным генотипом. Близкородственное скре-

сектицидам, а также обладать различными полезны-

щивание позволяет получать гомозиготные гибрид-

ми или декоративными свойствами. Секвенирование

ные сорта перекрестноопыляемых растений. Для

геномов растений должно способствовать дальнейше-

этого у таких растений, как кукуруза, удаляют муж-

му развитию растениеводства.

ские соцветия, однако для цветков, несущих и муж-

 

ские и женские органы, это очень сложная опера-

 

ция. Решить проблему поможет использование

 

стерильных мужских линий растений, которые мож-

 

но получить двумя способами: из растений с цито-

 

плазматической мужской стерильностью (ЦМС, ко-

 

дируется митохондриальным геномом) или при

 

помощи самонесовместимых линий (СНЛ) – широко

 

распространенного в природе способа избежать са-

 

мооплодотворения. Гетерозиготные особи часто

 

значительно сильнее гомозиготных, вероятно за

 

счет того, что генные продукты обоих аллелей с

 

меньшей вероятностью инактивируются или прояв-

 

ляют большую реакционную способность. Это явле-

 

ние (гетерозис) достигается в сельском хозяйстве

 

путем возвратного скрещивания, так же как в слу-

 

чае штаммов продуцентов антибиотиков. Аналогич-

 

ные способы применяют в садоводстве: в настоя-

 

щее время выведено около 11 000 сортов садовых

 

Методы растениеводства

 

Классические

Генно-инженерные

Ресурсы

Растения

Растения, бактерии,

 

грибы, вирусы

 

 

 

Оценка исходного

Идентификация

 

растительного

и выделение

 

материала

генов

Вариации

Скрещивание

Перенос

 

в растительные

 

клетки

2–4 года

 

 

Регенерация функцио-

 

 

нального растения

 

Селекция

Селекция

Внутренний тест

 

8–11 лет

Официальный тест

 

 

 

Сорт

Этапы выведения сортов

Получение культурных растений (2000 г.)

Название

Мировой

 

 

урожай,

 

 

млн т

 

 

 

Тростниковый сахар

Saccharum officinale

1 260

Кукуруза

Zea mays

594

Рис

Oryzae sativa

594

Пшеница

Triticum aestivum

584

Лен

Linum usitatissimum

503

Картофель

Solanum tuberosum

321

Сахарная свекла

Beta vulgaris

246

Маниок

Manihot esculenta

175

Соевые бобы

Glycine max

161

Сладкий картофель

Ipomoea batatas

142

Ячмень

Hordeum vulgare

132

Томаты

Lycopersicon esculentum 98

Виноград

Vitis vinifera

64

Сорго

Andropogonoideae

58

 

 

 

Однодольные

 

 

Двудольные

 

 

 

 

 

 

Генная инженерия

 

 

(Самоопыление),

 

(Цветковые растения,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

например пшеница,

 

перекрестное опыление),

 

 

 

 

Культивирование клеток

 

 

 

рис, ячмень, сахарный

 

например кукуруза,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

тростник

 

картофель, сахарная

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ЦМС, СНЛ*

 

 

 

 

 

 

 

свекла и соя

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Разведение гибридов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Скрещивание и отбор

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Линейные сорта

 

Гибридные сорта

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1850

1900

1950

 

2000

(гомозиготы)

 

(со значительной долей

 

* ЦМС – цитоплазматическая мужская стерильность

 

 

 

 

 

гомозигот)

 

 

СНЛ – самонесовместимые линии

 

 

 

Сравнение растительных геномов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Вид

Число

Плоидность

Размер генома,

 

 

 

 

 

 

хромосом

 

1000 млн п. н.

 

 

 

Однодольные

 

 

 

 

 

 

 

 

Ячмень

Hordeum vulgare

7

2

4,8

 

 

 

Рис

Oryza sativa

12

2

0,42

 

 

 

Пшеница

Triticum aestivum

7

6

16

 

 

 

Кукуруза

Zea mays

10

2

2,5

 

 

 

Двудольные

 

 

 

 

 

 

 

 

Резуховидка

Arabidopsis thaliana

5

2

0,1

 

 

 

Рапс

Brassica napus

19

2

1,23

 

 

 

Томат

Lycopersicon exculentum

12

2

1

 

 

 

Табак

Nicotiana tabacum

12

4

4,4

 

 

 

Картофель

Solanum tuberosum

12

4

1,8

 

173