Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
521
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

Основы микробиологии

Грибы

ВВЕДЕНИЕ. Грибам принадлежит важная роль в круговороте веществ в природе, в частности они участвуют в разрушении древесины и образовании гумуса. В симбиозе с высшими растениями (микоризы) грибы помогают им перерабатывать различные вещества. В то же время некоторые предствители грибов являются опасными патогенами растений (например, мучнистая роса). В биотехнологии грибы используют в производстве пищевых продуктов, при получении антибиотиков и ферментов; при утилизации биомассы важную роль играет способность грибов осуществлять разложение органических соединений. Среди 70 000 видов охарактеризованных грибов наиболее широко представлены сумчатые грибы аскомицеты (около 20 000 видов). В качестве примеров здесь рассмотрены Penicillium notatum и Aspergillus niger. Очень важны в биотехнологии представители фикомицетов – грибы родов Rhizopus и Mucor. Около 12 000 видов грибов базидиомицетов относятся к съедобным грибам (шампиньоны, лисички, белые грибы и т. д.), а некоторые другие их представители участвуют в разрушении древесины (белый и красный плесневые грибы). Среди грибов встречаются патогенные для человека виды (их около 300). Все грибы – гетеротрофы. Их клеточная стенка содержит хитин, глюкан и в некоторых случаях также целлюлозу.

РАЗМНОЖЕНИЕ ГРИБОВ. Типы размножения грибов чрезвычайно разнообразны, в качестве примера мы рассмотрим размножение сумчатых грибов аскомицетов. Вегетативное тело грибов (таллом) состоит из мицелия – системы ветвящихся нитей (гифы). При бесполом размножении на концевых выростах мицелия образуются конидиеносцы. В конидиях происходит деление и высвобождение спор, из которых формируется новый мицелий. Как и многие другие грибы, аскомицеты способны к половому размножению. У них существует две различающиеся по облику формы (явление диморфизма), что существенно затрудняет их классификацию. Гифы формируют мужские и женские половые органы (антеридии и аскогонии соответственно); после протекания плазмогамии образуются дикариотические гифы, дающие начало аскокарпу («плодовому телу»). Затем в концевых клетках дикариотических гиф два ядра сливаются и формируют диплоидную зиготу (этот процесс называется кариогамией). После мейоза образуются восемь аскоспор (у аскомицетов) или четыре базидиоспоры (у базидиомицетов), из которых в дальнейшем вырастает мицелий.

множается исключительно бесполым путем, поэтому для осуществления рекомбинации в лабораторных условиях проводят слияние протопластов с различными типами ядер (гетерокариоз, парасексуальный процесс). P. notatum и родственный гриб Cephalosporium acremonium – продуценты важнейших лактамных антибиотиков. Другим примером биотехнологического применения грибов рода Penicillium является использование Penicillium camamberti при изготовлении сыров. Геном P. notatum имеет размер 32 млн п.н., и к настоящему времени секвенирована лишь небольшая его часть.

ASPERGILLUS NIDULANS – другой представитель аскомицетов, морфологически отличающийся от Penicillium по форме конидий. Размер генома составляет 31 млн п.н. и его структура пока полностью не расшифрована (2005 г.). В биотехнологии штаммы Aspergillus находят широкое применение: A. oryzae часто служит в качестве организма-хозяина для экспрессии рекомбинантных белков, A. niger является промышленным продуцентом лимонной и глюконовой кислот. Другие штаммы Aspergillus используются для синтеза внеклеточных ферментов (амилаз и протеиназ), а также в пищевой промышленности (например, в азиатском регионе для приготовления соевого соуса и мисо). Как и в случае Penicillium, для усовершенствования штаммов Aspergillus проводят слияние протопластов с последующим отбором.

RHIZOPUS ORYZAE и R. nigricans – представители фикомицетов, растущие на рисе и хлебе соответственно. Гифы этих грибов растут чрезвычайно быстро и буквально пронизывают питательную среду. Бесполое размножение фикомицетов происходит с образованием спор в специализированном мицелии – спорангиях. Представители родов Rhizopus и Mucor находят широкое применение в биотехнологии, так как в процессе разложения органического субстрата они выделяют в среду разнообразные внеклеточные ферменты. Геном R. oryzae составляет около 39 млн п.н., его нуклеотидная последовательность будет определена в ближайшее время (2005 г.).

PENICILLUM NOTATUM растет как мицелий. Он образует плодовые тела с конидиями, из которых высвобождаются споры. Внутри асков созревают споры, прорастающие в новый мицелий. Как и другие пред- 194 ставители несовершенных грибов, P. notatum раз-

Морфологические признаки некоторых грибов

Плодовое тело

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Конидии

 

 

 

 

 

 

Споры

 

 

 

 

 

 

 

 

в спорангии

 

Конидиеносцы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Mucor

 

Aspergillus

Penicillium

 

 

 

 

Миксомицеты

Фикомицеты

Эумицеты

 

Базидиомицеты**

Базидия

 

 

Mucor, Rhizopus

Аскомицеты (сумчатые грибы)

 

Penicillium,

 

 

 

 

Базидиомицеты (базидиальные грибы)

 

* Не является таксономической группой

Aspergillus,

 

 

 

 

Saccharomyces

 

** Половая форма, преобладающая

 

Дейтеромицеты* (несовершенные грибы)

 

 

 

 

 

в жизненном цикле

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Aspergillus niger – представитель аскомицетов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ядро

 

Вторичная стенка

 

 

 

Гифы

 

Плазматическая

 

Первичная стенка

 

 

 

 

мембрана

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Цитоплазма

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Цитоплазмати-

 

 

 

 

 

 

 

ческая мембрана

 

 

 

 

Пора

 

 

Хитин

 

 

 

 

Септы

 

Белок

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Клеточная

 

Гликопротеин

 

 

 

 

стенка

 

Гликан

 

Конидиеносцы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

с конидиями

 

 

 

 

 

 

 

 

Репродуктивный цикл аскомицетов

 

 

Парасексуальный цикл

 

 

~1 мм

 

 

(на примере Aspergillus)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

две клетки

 

 

 

 

Гаплоидная

 

 

гиф

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

стадия (N + N)

Кариогамия

 

 

 

 

 

 

 

 

(слияние ядер)

 

 

 

 

 

 

 

 

Диплоидная

 

 

 

 

 

 

 

 

стадия (2N)

 

 

 

 

 

 

 

Аскокарп

 

 

 

 

 

 

 

 

«Плодовое тело»

Рекомбинация

 

 

 

 

 

Мейоз

 

 

 

 

 

 

Митоз

 

 

 

 

 

Аск

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

~10 мм

 

 

без

 

с

 

 

 

 

 

 

кроссинг-

кроссинг-

 

 

 

 

 

 

овера

 

овером

 

Мужская конидия

Митоз

 

 

 

 

 

 

Женская конидия

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8 Аскоспор

 

Потеря

 

Плазмогамия

 

Митоз

 

в аске (N)

 

хромосом

 

(слияние содержимого

 

 

 

 

 

 

 

цитоплазмы)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Бесполое размножение

 

 

Клетки

 

 

конидиями (N)

 

 

с рекомбинантным геномом

195

 

 

 

 

 

 

 

 

Основы микробиологии

196

Дрожжи

ВВЕДЕНИЕ. Дрожжи – это группа грибов, не имеющих типичного мицелия и размножающихся почкованием. К дрожжам относят представителей различных классов грибов. Дрожжи – гетеротрофные организмы, предпочитающие для роста кислые среды (рН 3,5– 5,0). Клеточная стенка этих организмов содержит хитин. В биотехнологии наиболее важные следующие дрожжи: Saccharomyces cerevisiae, Candida utilis, Candida albicans, Schizosaccharomyces pombe, Hansenula polymorpha и Pichia pastoris.

SACCHAROMYCES CEREVISIAE (пекарские дрожжи) могут размножаться как в гаплоидной, так и в диплоидной форме, поэтому они являются излюбленным объектом для генетических исследований. Гаплоидные штаммы, используемые в лабораторной практике, принадлежат одному из двух типов спаривания – MATa или MATα. Скрещивание возможно только между представителями разных типов спаривания. Бесполое (вегетативное) размножение осуществляется почкованием гаплоидных или диплоидных клеток. При половом размножении происходит слияние двух гаплоидных клеток, и в результате мейоза образуются четыре гаплоидные аскоспоры. Выводы о генетических изменениях можно делать, исходя из визуального (с помощью микроскопа) анализа аскоспор (тетрадный анализ). Поскольку и в гаплоидной, и в диплоидной формах эти дрожжи – неприхотливая и устойчивая культура, для которой в оптимальных условиях время удвоения составляет всего 90 мин, S. cerevisiae – очень ценный объект для молекуляр- но-генетических экспериментов. Нуклеотидная последовательность генома S. cerevisiae полностью расшифрована (12 млн п.н. находятся в 46 хромосомах). Наличие в клетках внехромосомных элементов (2 -плазмиды, присутствующей в количестве 60–100 копий на клетку) также является преимуществом этого вида дрожжей, так как открывает новые возможности для осуществления рекомбинации. Для трансформации клеток S. cerevisiae разработано множество векторных конструкций: при использовании одних векторов чужеродная ДНК реплицируется в клетке независимо (YRP – yeast replicating plasmid и YEP – yeast episomal plasmid), а другие векторы позволяют чужеродной ДНК встраиваться в дрожжевые хромосомы (YIP – yeast integrating plasmid). Искусственные дрожжевые хромосомы (YAC – yeast artificial chromosome) позволяют клонировать очень крупные фрагменты ДНК (600–1400 т. п. н.), поэтому их часто используют для создания геномных библиотек. Недостатком такой системы является высокая частота внутрихромосомной рекомбинации, поэтому в последнее время искусственные дрожжевые хромосомы все чаще заменяют на бактериальные искусственные хромосомы (ВАС). Около 6000 генов S. cerevisiae

ввысокой степени гомологичны генам человека, поэтому эти дрожжи часто служат в качестве модельной системы при изучении молекулярно-биологиче- ских механизмов обмена веществ. В биотехнологии они используются в пищевой промышленности, для производства алкогольных напитков, этанола, а также для промышленного получения рекомбинантных белков, например α-интерферона, и различных вакцин, в том числе поверхностного антигена вируса гепатита В. В отличие от систем экспрессии с использованием E. coli, в клетках S. cerevisiae белки претерпевают посттрансляционную модификацию (например, гликозилирование), поэтому дрожжи используют для получения эукариотических белков, для функционирования которых необходимы такие модификации.

CANDIDA UTILIS – представитель группы дрожжей, который формирует мицелий и размножается исключительно почкованием. В геноме C. utilis встречаются неканонические кодоны (например, CUG, обычно кодирующий лейцин, в этом организме кодирует серин), поэтому гетерологическая экспрессия в C. utilis крайне затруднена. Штаммы C. utilis применяют в биотехнологическом производстве внеклеточных ферментов, а в сельском хозяйстве – как кормовую добавку. Грибы рода Candida могут использовать в качестве источника углерода такие необычные вещества, как фракции нефти или сульфитсодержащие производные, поэтому они имеют особенно важное значение при утилизации различных отходов. Некоторые представители рода Candida для человека патогенные (Candida albicans).

PICHIA PASTORIS И HANSENULA POLYMORPHA – представители метилотрофных дрожжей, использующих

вкачестве единственного источника углерода метанол. Метилотрофные дрожжи активно изучаются с целью использования для экспрессии эукариотических генов. Так, в клетках Pichia pastoris удалось осуществить очень эффективный синтез различных белков: липаз, β-интерферона и фрагментов антител (до 12 г рекомбинантного белка на литр культуры).

SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE впервые были выделены из восточно-африканского пива (пиво на языке суахили – pombe). Геном S. pombe, распределенный всего между тремя хромосомами, полностью расшифрован: его размер составляет 12,6 млн п.н., что сравнимо с размером генома S. cerevisiae, но всего по трем хромосомам, несущим почти по 5000 генов.

Морфологическое разнообразие дрожжей

 

 

 

 

 

 

Endomycopsis

Candida

Saccharomyces

Torulopsis

Образование асков

Образование асков

Образование мицелия

Образование мицелия

Почкование

Почкование

Почкование

Почкование

 

 

 

 

 

 

Молекулярная генетика дрожжей

 

 

Диплоидная стадия

 

 

Размер гаплоидного

Количество

 

 

 

 

 

генома, млн п.н.

хромосом

 

Saccharomyces cerevisiae

15

16

 

 

Candida utilis

 

14–18

8

 

 

Pichia pastoris

 

Неизвестен

6–8

 

 

Hansenula polymorpha

Неизвестен

4–6

 

 

Репродуктивный цикл Saccharomyces cerevisiae

 

Тетрадный

Гаплоидная стадия

 

 

 

 

 

 

анализ:

 

 

 

 

 

наследование

 

 

 

 

 

в соответствии

 

 

 

 

Зигота

с законами

 

 

 

 

Менделя

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Аск,

 

 

 

 

 

окруженный

 

 

 

Аскоспоры

оболочкой

Дрожжевые векторы

 

 

 

Точка начала репликации (ori)

Вектор YEP (yeast expression plasmid) –

Селективный

для S. cerevisiae

дрожжевая экспрессирующая плазмида

маркер 2

Гены, обеспечивающие

Полилинкер (MCS)

 

для S. сerevisiae

функционирование

 

 

 

центромеры

Промотор

Терминатор

Селективный

 

Селективный

 

 

маркер для E. coli

 

маркер 1

 

Точка начала

Точка начала

для S. сerevisiae

 

 

репликации (ori)

репликации (ori)

 

 

 

в E. coli

 

 

 

в E. coli

 

Точка начала

 

 

 

 

 

 

 

 

репликации (ori)

Селективный

 

 

 

в дрожжах

 

 

 

 

 

маркер

Теломеры

 

 

 

для E. coli

Расщепление рестриктазами,

 

 

 

 

 

лигирование с чужеродной

 

 

 

 

 

ДНК

Селективный маркер

 

 

 

Вставка

 

 

чужеродной ДНК

для дрожжей

 

Вектор YAC

 

 

 

(двухцепочечная)

 

 

 

 

 

(yeast artificial chromosome) –

> 100 т.п.н.

 

 

дрожжевая искусственная хромосома

 

 

 

 

 

 

197

микробиологии

Микроорганизмы: выделение и хранение штамма.

Техника безопасности

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ. В научных исследованиях, как правило,

щимися кристаллами льда. Метод широко применя-

 

используют чистые культуры микроорганизмов.

ется для сохранения бактериальных и дрожжевых

 

Для биотехнологического применения штаммы усо-

штаммов; 3) высушивание клеточной суспензии на

 

вершенствуют в соответствии с поставленными зада-

носителе (силикагеле, песке) в вакууме. Эту опера-

Основы

чами, осуществляя мутагенез и последующий отбор

цию проводят в присутствии эмульгаторов (обезжи-

мутантов. Для сохранения чистых штаммов микроор-

ренное молоко, сыворотка), а полученные препараты

ганизмов создают специальные коллекции. Пересев

хранят при температуре –70 °С. Перед помещением

клеток микроорганизмов на жидкие или твердые

в коллекцию необходимо убедиться в том, что клетки

питательные среды проводится в стерильных услови-

не потеряли способности к росту. В настоящее время

 

ях. Большинство используемых в биотехнологии мик-

в большинстве стран созданы богатые коллекции

 

роорганизмов являются гетеротрофами и культивиру-

штаммов микроорганизмов, из которых можно полу-

 

ются в аэробных условиях. Анаэробные организмы

чать чистые культуры. Существуют как универсаль-

 

выращивают в бескислородной среде, а для культиви-

ные коллекции штаммов, например ATCC – амери-

 

рования фотосинтезирующих микроорганизмов под-

канская коллекция штаммов (American Type Culture

 

бирают специальные условия освещенности.

Collection) или DSMZ – коллекция микроорганизмов

 

ЧИСТЫЕ МИКРОБНЫЕ КУЛЬТУРЫ хранятся в коллек-

и клеток Германии, так и коллекции, специализирую-

 

циях штаммов. Чтобы получить чистую культуру из

щиеся на определенных группах микроорганизмов,

 

природной среды обитания (почвы, воды, пищевых

например CBS – центральная коллекция плесневых

 

продуктов, других организмов), проводят посев штри-

грибов. Многие промышленные предприятия имеют

 

хом (метод истощающего штриха) на стерильную ага-

собственные коллекции важных штаммов микроорга-

 

ризованную питательную среду (агар – сложный по-

низмов.

 

лисахарид, получаемый из морских водорослей).

ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ. Почти в любом роде мик-

 

Условия культивирования выбирают так, чтобы выде-

роорганизмов есть представители, патогенные

 

ляемый микроорганизм имел преимущество роста по

для человека: например, в биотехнологии Bacillus

 

сравнению с другими микроорганизмами, обитающи-

subtilis – непатогенный продуцент ферментов, а вот

 

ми в той же природной среде. Например, цианобакте-

Bacillus anthracis – возбудитель сибирской язвы; As-

 

рии культивируют в анаэробных условиях на свету, в

pergillus oryzae используется для приготовления

 

качестве источника углерода пропускают СО2, а в ка-

соевого соуса, а Aspergillus flavus продуцирует ток-

 

честве источника азота – N2. Для выращивания гри-

сичное вещество (афлатоксин), обладающее канце-

 

бов используют слабокислую, обогащенную сахарами

рогенными свойствами. По этой причине при любых

 

среду, для отбора термофильных микроорганизмов

операциях с микроорганизмами необходимо строго

 

повышают температуру культивирования, а для выде-

соблюдать правила техники безопасности при работе

 

ления микроорганизмов-продуцентов протеаз в каче-

с биологическими объектами. В соответствии со сте-

 

стве единственного органического источника азота в

пенью риска для пользователя все микроорганизмы

 

среду добавляют казеин. По данным 16S-рРНК-ана-

разделены на четыре группы. Оборудование лабора-

 

лиза удается выделить лишь 1% всех микроорганиз-

тории и правила работы должны соответствовать

 

мов, обитающих в воде или почве.

правилам техники безопасности при работе с микро-

 

КОЛЛЕКЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ служат для хране-

организмами каждой группы. К первой группе риска

 

ния чистых штаммов, обладающих определенными

относятся микроорганизмы, которые традиционно ис-

 

свойствами. Для поддержания штамма в лаборатор-

пользуются для приготовления пищевых продуктов

 

ных условиях его пересевают на агаризованную сре-

(например, пекарские дрожжи). Подавляющее боль-

 

ду: в пробирку со скошенной средой или на чашку

шинство микроорганизмов, использующихся в био-

 

Петри, однако в результате многократного пересева

технологии, также относятся к первой группе.

 

может произойти вырождение. По этой причине для

 

 

сохранения особенно важных штаммов предпочти-

 

 

тельнее использовать один из следующих методов:

 

 

1) хранение под химически инертной жидкостью, на-

 

 

пример парафином (рекомендуется для сохранения

 

 

штаммов гифообразующих грибов); 2) заморажива-

 

 

ние при –196 °С и последующее хранение в жидком

 

 

азоте или при температуре –70 °С. Замораживание и

 

 

размораживание в этом случае должны происходить

 

198

очень быстро и в присутствии глицерина, чтобы пре-

 

дотвратить разрушение клеточной стенки образую-

 

Чистые культуры

 

Получение обогащенных культур микроорганизмов

 

 

Посев штрихом на пита-

Бактерии

 

 

Источник энергии, питательные вещества

 

тельную среду (агар)

 

 

 

Фототрофы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Отдельный клон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Rhodospirillen

 

Свет, Н2 или органические кислоты, СО2

 

 

 

 

 

Цианобактерии

 

Свет, СО2, N2 в качестве источника N

 

 

 

 

 

Хемолитотрофы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Nitrosomonas

 

NH + – донор H, O

2

– акцептор Н

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

 

 

Thiobacillus

 

 

H2S, S или S2O32– как акцептор H, орг. кислоты

 

 

 

 

Метанообразующие бактерии

H2 как донор Н, СО2 как акцептор Н

 

 

 

 

 

Гетеротрофы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Псевдомонады

 

2% KNO3 как акцептор Н, органические кислоты

 

 

 

 

Клостридии

 

 

Крахмал, NH

+, пастеризованный посевной

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

Пересев отдельных клонов

 

 

 

 

материал

 

 

 

 

 

Энтеробактерии

 

Глюкоза, NH

+

 

 

 

 

в жидкую среду, а затем

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

посев на твердую

Молочнокислые бактерии

Глюкоза, дрожжевой экстракт, рН 5

 

 

питательную среду

Бациллы

 

 

 

Крахмал, NH4+

 

 

 

 

 

 

 

 

Стрептомицеты

 

Маннит, NH4+

 

 

 

 

 

 

 

 

Бактерии, использующиеся

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

для получения некоторых

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ферментов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Аэробные бактерии,

 

Глюкоза, NH4+, казеин

 

 

 

 

 

 

секретирующие протеиназы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Аэробные бактерии,

 

Глюкоза, NH4+, трибутирин

 

 

 

 

 

 

секретирующие липазы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

– аэробные условия

– анаэробные условия

 

 

Разнообразие сред обитания микроорганизмов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Грибы

 

 

 

Бактерии

 

 

pH 2

3

4

5

 

6

7

8

9

 

10

11

 

 

Ацидофилы

 

 

 

Нейтрофилы

 

Алкалофилы

 

 

Thiobacillus thiooxidans

 

 

Alcaligenes

Rhizobium

 

 

 

Natronobacterium

Sulfolobus acidocaldarius

 

 

Pseudomonas

Азотфикси-

 

 

Ectothiorhodospira

Pyrodictium occultum

 

 

 

 

 

рующие бактерии

Bacillus

 

 

 

Acetobacter

 

 

 

Актиномицеты

 

 

Бактерии, расщеп-

 

 

 

 

Lactobacillus

 

 

 

 

 

 

 

ляющие мочевину

°С

0

10

20

30

40

50

60

70

80

 

90

100

110

 

Психрофилы (криофилы)

 

 

Термофилы

 

 

 

Гипертермофилы

 

 

 

 

 

Мезофилы

 

 

 

Экстремальные термофилы

 

Gallionella

 

Escherichia coli

 

Bacillus stearo-

Thermococcus

 

Pyrodictium occultum

Leptothrix

 

Alcaligenes

 

thermophilus

Thermotoga

 

Pyrodictium brockii

 

Bacillus

 

Pseudomonas

 

Thermoactino-

Sulfolobus

 

 

Methanopyrus

 

Flavobacterium

Staphylococcus

 

myces vulgaris

Thermoproteus

 

Pyrobaculum

 

islandicum

 

 

 

 

Thermus aqua-

Desulfurolobus

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ticus

 

Acidianus

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Разделение микроорганизмов на группы в соответствии со степенью риска для человека

 

 

 

Группа 1

 

Группа 2

Группа 3

 

Acetobacter acetii,

 

Acinetobacter calcoaceticus,

Bacillus anthracis,

 

Agrobacterium tumefaciens,

 

Escherichia coli,

Mycobacterium tuberculosis,

 

Bacillus subtilis, Lactobacillus casei

Pseudomonas aeruginosa

Yersinia pestis

 

Penicillium notatum,

 

Aspergillus flavus, Candida albicans,

Histoplasma capsulatum

 

Rhizopus oryzae, Aspergillus niger,

Trichophyton rubrum,

 

 

 

Candida tropicalis

 

Histoplasma capsulatum

 

 

 

 

Бактерии

 

Грибы, дрожжи

 

199