- •Содержание
- •Предисловие
- •Предисловие ко 2-му изданию
- •Введение
- •Этапы развития биотехнологии
- •Биотехнология сегодня
- •Биотехнологическое производство пищевых продуктов
- •Алкогольные напитки
- •Пивоварение
- •Ферментация в пищевой промышленности
- •Пищевые продукты и молочнокислое брожение
- •Этиловый спирт
- •1-Бутанол, ацетон
- •Уксусная кислота
- •Лимонная кислота
- •Молочная и глюконовая кислоты
- •Аминокислоты
- •L-Глутаминовая кислота
- •D,L-Метионин, L-лизин и L-треонин
- •Антибиотики
- •Антибиотики: источники, применение и механизмы действия
- •Антибиотики: получение. Устойчивость к антибиотикам
- •β-Лактамные антибиотики: промышленное получение
- •Гликопептидные, полиэфирные и нуклеозидные антибиотики
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Тетрациклины, хиноны, хинолоны и другие ароматические антибиотики
- •Поликетидные антибиотики
- •Получение новых антибиотиков
- •Специальные продукты
- •Витамины
- •Нуклеозиды и нуклеотиды
- •Биодетергенты и биокосметика
- •Микробные полисахариды
- •Биоматериалы
- •Биотрансформация
- •Биотрансформация стероидов
- •Ферменты
- •Ферменты
- •Ферментативный катализ
- •Ферменты в клинических анализах
- •Тесты с помощью ферментов
- •Применение ферментов в промышленных технологиях
- •Ферменты в производстве моющих средств
- •Ферменты, расщепляющие крахмал
- •Ферментативное расщепление крахмала в промышленности
- •Ферментативное превращение сахаров
- •Утилизация целлюлозы и полиозы
- •Использование ферментов в целлюлозно-бумажной промышленности
- •Пектиназы
- •Ферменты в производстве молочных продуктов
- •Использование ферментов в хлебобулочной и мясоперерабатывающей промышленности
- •Ферменты в кожевенной и текстильной промышленности
- •Перспективы получения ферментов для промышленных технологий
- •Белковая инженерия
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Белки и жиры из одноклеточных организмов
- •Аэробная очистка сточных вод
- •Анаэробная очистка сточных вод и переработка ила
- •Биологическая очистка газовых выбросов
- •Биологическая очистка почв
- •Микробиологическое выщелачивание руд и биокоррозия
- •Инсулин
- •Гормон роста и другие гормоны
- •Гемоглобин, сывороточный альбумин и лактоферрин
- •Факторы свертывания крови
- •Антикоагулянты и тромболитики
- •Ингибиторы ферментов
- •Иммунная система
- •Стволовые клетки
- •Тканевая инженерия
- •Интерфероны
- •Интерлейкины
- •Эритропоэтин и другие факторы роста
- •Другие белки, имеющие медицинское значение
- •Вакцины
- •Рекомбинантные вакцины
- •Антитела
- •Моноклональные антитела
- •Рекомбинантные и каталитические антитела
- •Методы иммуноанализа
- •Биосенсоры
- •Биотехнология в сельском хозяйстве
- •Животноводство
- •Перенос эмбрионов и клонирование животных
- •Картирование генов
- •Трансгенные животные
- •Генетическая ферма и ксенотрансплантация
- •Растениеводство
- •Культивирование растительных клеток: поверхностные культуры
- •Культивирование растительных клеток: суспензионные культуры
- •Трансгенные растения: методы получения
- •Трансгенные растения
- •Вирусы
- •Бактериофаги
- •Микроорганизмы
- •Бактерии
- •Некоторые бактерии, важные для биотехнологии
- •Грибы
- •Дрожжи
- •Усовершенствование штаммов микроорганизмов
- •Основы биотехнологических методов
- •Микроорганизмы: рост в искусственных условиях
- •Кинетика образования продуктов метаболизма и биомассы в культуре микроорганизмов
- •Технология ферментации
- •Промышленные процессы ферментации
- •Культивирование животных клеток
- •Биореакторы для культивирования животных клеток
- •Биореакторы с иммобилизованными ферментами и клетками
- •Очистка биотехнологических продуктов
- •Очистка биотехнологических продуктов: хроматографические методы
- •Экономические аспекты биотехнологического производства
- •Методы генетической инженерии
- •Структура ДНК
- •Функции ДНК
- •Эксперимент в генетической инженерии
- •Методы выделения ДНК
- •Ферменты, модифицирующие ДНК
- •ПЦР: лабораторная практика
- •ДНК: химический синтез и определение размера молекул
- •Секвенирование ДНК
- •Введение ДНК в живые клетки (трансформация)
- •Идентификация и клонирование генов
- •Экспрессия генов
- •Выключение генов
- •Геном прокариот
- •Геном эукариот
- •Геном человека
- •Функциональный анализ генома человека
- •ДНК-анализ
- •Белковые и ДНК-чипы
- •Маркерные группы
- •Тенденции развития
- •Генная терапия
- •Поиск биологически активных веществ
- •Протеомика
- •Обмен веществ
- •Метаболомика и метаболическая инженерия
- •Системная биология
- •«Белая» биотехнология
- •Сертификация биотехнологической продукции
- •Этические аспекты генетической инженерии
- •Патентование в биотехнологии
- •Биотехнология в разных странах
- •Биотехнология в разных странах
- •Литература
- •Источники иллюстраций
- •Указатель микроорганизмов
Биотехнология в медицине
Рекомбинантные и каталитические антитела
ВВЕДЕНИЕ. Методы генетической инженерии позволяют экспрессировать нативный или модифицированный ген антитела в различных клетках-хозяевах. В настоящее время в микроорганизмах получают только фрагменты антител, прежде всего одноцепочечные (single-chain) антитела или Fab-фрагменты. Целые молекулы антител – иммуноглобулин IgG – удается экспрессировать в бакуловирусах, культурах эукариотических клеток, в молоке трансгенных животных, а также в трансгенных растениях (plantibodies). Рекомбинантные антитела могли бы найти широкое применение в медицинской диагностике. Биспецифические и бифункциональные антитела, связываясь с определенным антигеном, могут служить для доставки лекарственных веществ к клет- кам-мишеням, например к опухолевым клеткам, или для иммуносупрессии. С помощью антител, полученных комбинаторными методами, удается идентифицировать и количественно описать огромное количество белков, выявленных на гелях после проведения двухмерного электрофореза или в белковых микрочипах. Каталитические антитела могут оказаться перспективными для биотрансформации.
ПОЛУЧЕНИЕ. В качестве генетического материала может служить кДНК, полученная из иммунизированных лабораторных животных (чаще всего из лимфоцитов мышей), или из наивных В-лимфоцитов человека. Клонирование генов и их экспрессия в клетках-хозяевах позволяет получать белковые продукты – фрагменты антител. Например, для получения правильно свернутых одноцепочечных Fv- и Fab-фрагментов в клетках E. coli кДНК, кодирующую VL- и VH-цепи, встроили в вектор на основе фага λ и трансформировали клетки E. coli. Продукт экспрессии – Fab-фрагмент – секретировался в периплазматическое пространство клеток-хозяев. Для того чтобы полученные таким образом фрагменты выполняли свою биологическую функцию, необходим Fc-фрагмент; кроме того, CН2 домен должен быть гликозилирован. По этой причине антитела для медицинских нужд, например бифункциональные антитела, как правило, получают в культурах животных клеток, в частности в клетках СНО. В настоящее время предпринимаются попытки получения антител в трансгенных растениях.
составляющие комбинаторную библиотеку кДНК одноцепочечных антител, присоединены к фаговому гену, кодирующему белок фаговой оболочки. В результате инфицирования клеток E. coli образуется до 1010 фагов-помощников, имеющих в своем геноме ген Fab или одноцепочечного фрагмента scFV и несущих на своей поверхности рекомбинантный белок. При отборе фагов, синтезирующих антитела с нужной специфичностью, используют иммунохроматографические методы. Повторное проведение мутагенеза с применением ПЦР или специальных «изменчивых» штаммов E. coli и последующий отбор позволяют получить антитела, обладающие высоким сродством к антигену. Так, многократный мутагенез участков CDR привел к повышению сродства фрагментов антител к гликопротеину оболочки вируса ВИЧ (gp120) в 420 раз по сравнению с исходным сродством. Этот подход уже успешно используется для получения высокоспецифичных антител человека: для этого составляются обширные библиотеки антител, представленных в В-лимфоцитах.
КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА можно получать при иммунизации лабораторных животных веществом, которое является аналогом переходного состояния, образующегося в ходе ферментативной реакции. Другой метод – phage-display, позволяющий получать моноклональные или рекомбинантные антитела, которые в зависимости от выбора гаптена катализируют различные реакции, в том числе и те, что не происходят в естественных условиях. По данным рентгеноструктурного анализа участки CDR каталитических антител имеют сходство с активным центром фермента с аналогичной функцией. Так, в активном центре каталитического антитела 17Е8, которое катализирует гидролиз формил-норлейцин-фенилового эфира, обнаружена диада серин–гистидин, а для всех сериновых гидролаз характерно присутствие в активном центре триады серин–гистидин–аспара- гин/глутамин. Активность таких искусственных каталитических антител значительно ниже, чем у природных ферментов.
КОМБИНАТОРНЫЕ МОДИФИКАЦИИ. В отличие от метода гибридом создание комбинаторных библиотек позволяет получать весь спектр антител, образующихся в организме млекопитающих. Наибольшее распространение получил метод фагового дисплея (phage-display): из изолированных В-лимфоцитов выделяют мРНК и синтезируют кДНК, которую встраивают в экспрессирующий вектор на основе фага М13
156 таким образом, что полученные фрагменты ДНК,
|
Фрагменты антител, полученные |
|
|
|
|
|
|
|
|
Вектор для экспрессии фрагмента Fab в E. coli |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
методами генетической инженерии |
|
|
|
|
|
|
|
|
tet-Промотор/оператор |
||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Точка начала |
|
|
|
|
Сигнальная последовательность |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ompA |
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
репликации |
|
|
|
|
Тяжелая цепь |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
с His-tag |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
tet- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сигнальная |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
последовательность |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Репрессор |
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
phoA |
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
β-Лакта- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Легкая цепь |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
Одноцепочечный |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
маза (bla) |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
фрагмент (scFV) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Бицистронная экспрессионная кассета |
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
H1–3 и L1–3: |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(1 промотор для экспрессии двух цепей антитела) |
|||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ompA |
= белок А наружной мембраны |
|||||||||||||||||||||||||||||
гипервариабельные |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
phoA |
= лидерная последовательность щелочной |
||||||||||||||||||||||||||||
участки (CDR) тяжелой |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
Fab-фрагмент (Fab) |
|
|
|
|
фосфатазы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||||||
и легкой цепей |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
bla |
= устойчивость к ампициллину |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Разнообразие антител |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Система |
Количество |
Клональная селекция |
Повышение аффинности |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
В-лимфоциты |
> 108 генов |
Стимуляция специфических |
Лимфоциты: соматическая |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
(иммунная система) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
В-клеток с помощью |
гипермутация |
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
поверхностных IgM |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
E. coli |
Клонированные гены |
Экспрессия фрагментов |
«Перетасовка» генов, |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
лимфоцитов, синтетические |
антител на поверхности |
«изменчивые» штаммы, |
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
гены со «случайным» |
бактериофагов и отбор |
«неточная» ПЦР |
||||||||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
вариабельным участком |
по сродству к антигену |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(CDR). Всего > 108 генов |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Клональная селекция: метод phage display |
|
|||
Гены VH и VL, |
Линкерная |
|
||
последовательность |
|
|||
соединенные линкерной |
|
|
антигену |
|
последовательностью |
|
|
||
Лигирование |
|
|
||
с фагмидным вектором |
|
|
||
|
|
к |
||
|
|
|
||
|
|
Вектор |
сродством |
|
|
|
|
||
Трансформация |
|
Компетентные |
с наибольшим |
|
клеток E. coli |
|
клетки E. coli |
||
|
Линкерная |
|
||
|
|
и отбор вариантов |
||
Инфицирование |
последова- |
|
||
тельность |
g3p (белок |
|||
фагом-помощником |
||||
|
||||
|
|
оболочки) |
||
Экспрессия |
|
|
||
|
Линкерная |
Мутагенез |
||
одноцепочечного фрагмента |
|
|||
FV на поверхности фагов |
|
последова- |
||
|
|
тельность |
||
Отбор фагов, несущих |
|
|
||
|
|
|
||
антиген-специфические |
|
Антиген |
|
|
фрагменты антител |
|
|
||
Инфицирование клеток E. coli отобранными фагами |
|
|||
и получение рекомбинантных одноцепочечных фрагментов FV |
Гибридные антитела |
|
Природные IgG: |
|
Связывание антигена |
|
Активация иммунной системы |
|
Биспецифические антитела: |
|
Связывание антигена 1 |
|
Фрагмент антитела А |
|
Фрагмент антитела В |
|
Связывание антигена 2 |
|
Бифункциональные антитела: |
|
Фрагмент антитела |
|
Гетерологичный |
|
слитый белок* |
|
* Фермент, токсин, репортерная группа |
|
с радиоактивной меткой, |
|
биотин-связывающий домен и т. д. |
157 |
|
Биотехнология в медицине
Методы иммуноанализа
ВВЕДЕНИЕ. В то время как методы ферментативной диагностики уже позволяют достаточно быстро и достоверно определять отдельные компоненты сложных систем, методы иммунодиагностики пока существенно уступают в чувствительности и возможностях применения. Однако развитие радиоиммуноанализа (РИА) и иммуноферментного анализа (ИФА), а также техники гибридом послужило основой для создания иммунологических систем детекции, мировой рынок которых в настоящее время уже превысил 10 млрд долл. США в год.
МЕТОДЫ. Несмотря на высокое сродство антигенов
или гаптенов к антителам (kдисс 10–6–10–8 моль/л), анализ их связывания остается весьма сложной за-
дачей. Для оценки количества антигена в растворе часто используют метод конкурентного иммуноанализа, основанный, как следует из названия, на конкуренции между исследуемым и меченым антигенами за связывание с антителами. Чем больше антигена в исходном растворе, тем меньше репортерного антигена свяжется с антигеном. Все методы иммунодиагностики можно условно разделить на две большие группы: гомогенные методы анализа основаны на непосредственной реакции между антигеном и антителом, в то время как требующие бо’ льших затрат, но более чувствительные гетерогенные методы учитывают промежуточные стадии, в частности освобождение от несвязавшихся реагентов. Выбор метода анализа зависит от цели исследования, а также необходимой чувствительности. Чувствительность метода анализа повышается в случае нуклеотидов, содержащих радиоактивный изотоп (радиоактивную метку); при детектировании регистрируется сигнал, пропорциональный концентрации меченого вещества, а применение ферментативных реакций (твердофазный иммуноферментный анализ, ELISA – от англ. enzyme-linked immunosorbent assay) приводит к значительному усилению сигнала. При правильно подобранных условиях методом ELISA можно определять пикоили даже аттомолярные концентрации (10–12–10–13 моль/л). Репортерным ферментом «работает» чаще всего пероксидаза или кислая фосфатаза.
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ. Для количественной оценки взаимодействия антител и антигенов сравнивают значения, полученные для исследуемой пробы, со стандартными кривыми титрования. В лабораторной практике чаще всего используют планшеты с 96 или 394 лунками и соответствующий сканер (на основе фотометра, флуориметра или люминометра), который в автоматическом режиме осуществляет количественную оценку результата, сравнивая его со стандартными кривыми.
ТЕСТ-ПОЛОСКИ. В фармакологии широко известны тест-полоски – это и есть пример твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Так, тест на беременность основан на определении концентрации хорионического гонадотропина (ХГТ, или англ. HСG), содержание которого в крови и моче значительно повышается после оплодотворения яйцеклетки. Тестполоски также применяются в экстренной медицине, например, для установления поражения сердечной мышцы – инфаркта. При инфаркте в кровь выделяется белок тропонин Т. Кровь больного наносят на тестполоску, где при прохождении через специальные волокна она освобождается от эритроцитов. Затем по капиллярам жидкость поступает в реакционную зону тест-полоски, где происходит элюция специфических конъюгатов антител и образование комплексов типа «сэндвич». Если комплексы образуются, участок тест-полоски окрашивается за 15 минут в красный цвет. Для качественной оценки результата не требуется никаких специальных устройств – его можно наблюдать визуально, а количественные определения проводят с помощью специального прибора (с CСD-камерой).
ДРУГИЕ ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОАНАЛИЗА.
Методы иммуноанализа находят широкое применение в клинической диагностике. Стремительный прогресс в понимании механизмов физиологических процессов, в частности регуляции обмена веществ, позволяет разрабатывать новые методы диагностики заболеваний на самых ранних стадиях. В пищевой промышленности иммуноанализ применяется для обнаружения запрещенных к применению добавок (например, казеин в колбасных изделиях). Иммунологическими методами можно быстро обнаружить присутствие патогенных микроорганизмов и их токсинов. Еще одно важное применение метода иммуноанализа – экологические исследования, например контроль загрязнения сточных вод и почвы различными ксенобиотиками и гербицидами.
158
Иммуноанализ |
|
|
|
|
|
|
|
Неконкурентный, |
Неконкурентный, |
Конкурентный, |
|
Конкурентный, |
|
||
гомогенный |
гетерогенный |
гомогенный |
|
гетерогенный |
|
||
|
(«сэндвич»-анализ) |
|
|
|
|
|
|
Конъюгат: метка – антиген |
|
Антиген, гаптен |
|
Конъюгат: метка – антитело |
|||
Антитело |
Субстрат |
|
Продукт |
IP |
Промежуточный продукт |
|
|
Если в качестве метки используется фермент, первичный сигнал усиливается |
|
|
|
||||
и чувствительность метода значительно возрастает |
|
|
|
|
|
||
Экстренный тест на инфаркт миокарда: |
Метод ELISA, кривая титрования |
||||||
тропонин Т |
|
|
|
120 |
|
|
|
|
|
|
|
a |
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
b |
|
|
|
|
|
80 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
% |
60 |
|
|
|
|
|
|
, |
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
Продолжительность анализа: 15 мин |
B/B |
40 |
|
|
|
||
Позитивный ответ: |
2 красных полосы |
|
|
|
|
||
|
20 |
|
|
|
|||
Негативный ответ: |
1 красная полоса |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
0 |
|
c |
d |
Механизм действия |
|
|
|
|
|||
|
|
0,00 |
1 |
10 |
100 |
||
|
|
|
|
||||
|
Кровь, тропонин Т (TnT) |
|
|
Концентрация Ig |
|
||
|
B/B0, % Нормированное значение экстинкции |
||||||
|
|
|
|||||
|
|
|
a |
Верхняя ветвь кривой |
|
||
|
|
|
b |
Линейная область (определяет |
|||
Реакционная зона |
|
|
|
границы чувствительности метода) |
|||
|
|
c |
Точка перегиба |
|
|||
|
|
|
|
||||
|
|
|
d |
Нижняя ветвь кривой |
|
||
|
|
Передвижение |
|
|
|
|
|
|
Золото Золото |
частичек золота |
|
|
|
|
|
|
к реакционной зоне |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
Золото |
|
Плазма |
Зона нанесения |
|
|
|
|
Освобождение |
|
|
|
|
|
пробы |
|
|
|
|
|
от эритроцитов |
Реакционная зона |
|
|
|
Золото |
|
|
|
|
|
Плазма |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Зона детекции |
|
Золото |
|
|
Золото |
|
|
Синтетический |
|
|
|
|
|
пептид |
|
|
Контрольная линия |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Стрептавидин |
|
всегда становится красной, |
|
|
|
|
а сигнальная линия |
|
|
|
Контрольная линия |
Линия сигнала |
|
окрашивается в красный |
|
|
Зона, где вещество детектируется |
|
цвет только в присутствии |
МАВ1 и МАВ2 – |
|
|
|
в крови TnT |
|
|||
|
моноклональные антитела 1 и 2 |
|
|||
|
|
|
|
159 |
|
|
|
|
|
|