Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
541
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

Основы биотехнологических методов

208

Технология ферментации

ВВЕДЕНИЕ. Правильный расчет конструкции биореактора так же важен для осуществления экономически выгодного процесса ферментации, как и сведения о биологических характеристиках используемых микроорганизмов, полученные при биологических и биохимических исследованиях. Основные цели усовершенствования биореакторов заключаются в повышении безопасности проведения ферментации и минимизации промышленных затрат. При оптимизации конструкции биореактора рассматриваются следующие наиболее важные аспекты: 1) перемешивание среды роста микроорганизмов; 2) соблюдение температурного режима и 3) снабжение клеток кислородом в случае аэробной ферментации.

ПЕРЕМЕШИВАНИЕ в биореакторе осуществляется с помощью механического устройства или путем пропускания воздуха или другого газа. При перемешивании возникают турбулентные потоки, которые можно математически описать, используя число Рейнольдса (Re). Значение числа Рейнольдса обратно пропорционально вязкости среды – параметра, который в случае образующих мицелий организмов зависит от стадии роста микроорганизма и от концентрации продукта в среде. Наиболее наглядна зависимость скорости турбулентных потоков от количества продукта в среде в случае получения ксантановой смолы. Биореактор идеального перемешивания – это математическая модель, которую используют для изучения закономерностей роста микроорганизмов в биореакторе. В этом идеализированном случае считается, что концентрация любого компонента среды одинакова во всем объеме реактора, т. е. среда абсолютно гомогенна. На практике такая ситуация недостижима, так как любой биологический материал не идеальная жидкость: так, клетки мицелия весьма чувствительны к механическому воздействию, поэтому необходимо подбирать условия, обеспечивающие наиболее эффективное перемешивание и в то же время сохраняющие жизнеспособность биологического материала. На эффективность перемешивания влияет множество факторов: форма реактора, конструкция мешалок, их число и скорость вращения для реакторов с механическим перемешиванием или способ подачи газа (барботажная колонна или инжекторная подача) и конструкция насосов для аэроперемешивания. Число Ne – коэффициент мощности – отражает потребление энергии в процессе перемешивания содержимого реактора. В случае, когда через среду не пропускают газ, значение Ne связано с числом Рейнольдса. Для перемешивания в промышленных биореакторах разработано несколько конструкций, позволяющих эффективно проводить аэрацию и перемешивание. К таким устройствам относятся, например, крыльчатые диски и турбинные мешалки.

Эффективность перемешивания описывается объемным коэффициентом массопередачи kLa.

ПОДДЕРЖАНИЕ ПОСТОЯННОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ – необходимое условие для оптимального течения процесса ферментации. При росте микроорганизмов высвобождается большое количество энергии в виде тепла, перемешивающие устройства также выделяют тепло. Кроме того, определенный вклад вносят процессы общей теплопередачи и теплообмена на границах фаз. Обычно системы охлаждения с помощью змеевиков или охлаждающих рубашек достаточно для поддержания температуры ферментации на определенном уровне. Однако в некоторых случаях, например при использовании в качестве источников углерода алканов или метанола, требуются дополнительные устройства для охлаждения реактора.

АЭРАЦИЯ. Рост аэробных организмов замедляется, если концентрация кислорода в среде ниже некоторого критического значения. При подборе оптимальных условий аэрации учитывают биологические и технические особенности ферментации. Во-первых, оптимальная скорость переноса кислорода в реакторе зависит от максимальной скорости потребления кислорода микроорганизмами. Во-вторых, не следует забывать о том, что кислород в условиях ферментера находится в трехфазной системе (газ–питатель- ная среда–клетка), и транспорт в такой сложной системе также должен быть оптимизирован. Общее сопротивление обмену кислорода складывается из отдельных сопротивлений в последовательных процессах переноса кислорода от газового пузырька до клетки: 1) диффузия газа к границе раздела фаз газ–жидкость; 2) перенос через границу раздела фаз газ–жидкость; 3) транспорт через жидкость к микроорганизму; 4) транспорт внутри клетки. В случае одноклеточных микроорганизмов на скорость переноса кислорода значительно влияет скорость диффузии кислорода к скоплениям клеток или мицелию. На процесс транспорта кислорода в жидкости влияет множество факторов: 1) технологические (размер реактора, заполненность реактора, эффективность перемешивания, интенсивность аэрации); 2) физикохимические (плотность и вязкость среды, температура, поверхностные свойства (необходимо добавление пеногасителей!)); 3) биологические характеристики микроорганизма (форма клеток). Важный показатель массообмена кислорода kLa можно измерить экспериментально.

Перемешивание в реакторе

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Мешалка типа MIG

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Мешалка типа

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Inter-MIG

 

Крыльчатые диски

 

 

Турбинные мешалки

 

 

 

Характеристики турбулентных потоков

 

Число Рейнольдса (Re)

 

 

 

 

 

Re =

Сила инерции

=

d

2

(безразмерная величина)

 

 

Вязкость

 

R

 

 

 

 

 

η

 

 

 

 

 

 

 

 

Потребление энергии

 

Показатель мощности (Ne)

 

 

 

 

Ne =

 

Сила тяги

=

 

Po

(безразмерная величина)

 

Сила инерции

dR5n3ρ

 

dR

=

Диаметр мешалки, м

η

=

Динамическая вязкость

 

n

=

Скорость вращения

 

 

раствора, Па с

Подача воздуха

Подача воздуха

 

мешалки, с–1

 

 

Po

=

Мощность мешалки, Вт

 

 

 

 

 

ρ

=

Плотность, кг/м3

Системы аэрации реакторов

Перфорированное

Перфорированная

Инжектор

Мешалка с устройством

кольцо

пластина

 

для аэрации

 

 

 

Газ

Жид-

 

 

Жид-

кость

 

 

кость

 

 

Газ

 

Газ

Газ

 

Жидкость

 

 

 

 

 

 

 

 

Потребность в кислороде

 

 

 

Скорость поглощения кислорода

 

QO

 

= XqO

 

= kLa (CO* – CO ), моль/(л ч)

qO2

= qO2max

CO

2

, моль/(л ч)

 

 

 

 

2

 

2

2

2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

KO2

+ CO2

 

 

q

 

max = Максимальная скорость поглощения

 

 

 

 

 

 

 

O2

кислорода, моль/г ч

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

CO2

= Концентрация растворенного кислорода, моль/л

qO2

= Скорость поглощения кислорода, моль/г ч

C

* = Насыщающая концентрация кислорода, моль/л

 

 

 

= Объемный коэффициент массопередачи (kLa), ч–1

 

O2

 

 

 

 

 

 

 

kLa

K

O2

= Константа Михаэлиса для О

, моль/л

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

X= Концентрация биомассы, г/л

 

Кислородный обмен:

 

 

 

 

Объемная скорость подачи воздуха

 

 

 

коэффициент массопередачи kLa

 

 

 

 

Объем воздуха

 

 

P α

B =

 

, мин–1

 

 

Емкость реактора мин

 

kLa =

 

(uG0)β, ч–1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

VR

Показатель аэрации (NВ)

 

k, α, β = Константы (безразмерная величина)

NB =

 

VG

(безразмерная величина)

 

ndR3

 

P

= Мощность мешалки, Вт

 

 

 

 

 

 

 

VG

= Скорость потока газа, м3

 

VR

= Объем реактора, м3

n

= Скорость вращения мешалки, с–1

 

uG0

= Скорость подачи газа, м/с

dR

=

Диаметр мешалки, м

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

209

методов

Промышленные процессы ферментации

ВВЕДЕНИЕ. Переход от процесса, разработанного

300 л, а в промышленности применяются реакторы с

биотехнологических

в лаборатории, к промышленному производству не

рабочим объемом до 500 м3. При ферментации в

сводится к простому увеличению масштаба. В зави-

больших объемах значительными оказываются энер-

 

 

симости от технологического процесса используются

гетические затраты на обеспечение быстрого пере-

 

различные конструкции биореакторов, среди которых

мешивания среды и отвода тепла для сохранения по-

 

наибольшее

распространение получили

реакторы

стоянной температуры. В масштабных производствах

 

с перемешиванием. Обычно процесс перехода к

(например, производстве глутаминовой кислоты,

 

большим объемам производства осуществляется по-

белков одноклеточных организмов или при очистке

 

этапно (30 л → 300 л → 3000 л → промышленные

стоков) используют эрлифтные реакторы объемом до

 

масштабы).

 

 

 

1500 м3, в которых аэрация осуществляется за счет

 

МАСШТАБИРОВАНИЕ. Уже на уровне эксперимен-

внутренней или внешней рециркуляции газа.

Основы

тальных цехов биореакторы снабжены мешалками,

КОНТРОЛЬНО-ИЗМЕРИТЕЛЬНАЯ АППАРАТУРА. Конт-

турбинами, насосами и специальными устройствами

роль условий культивирования необходим и в экспе-

 

 

для аэрации. Все эти инженерные приспособления

риментальных установках для подбора оптимальных

 

необходимы для создания оптимальных условий

параметров, и в ходе производственного процесса.

 

культивирования клеток. При переходе к промышлен-

Обычно измеряют следующие характеристики: вес

 

ным масштабам производства необходимо учиты-

клеточной массы, температуру культуральной жидко-

 

вать, что в больших реакторах время перемешивания

сти, скорость вращения и потребляемую мощность

 

должно быть значительно увеличено. Для того чтобы

перемешивающих устройств, содержание кислорода и

 

в реакторе объемом более 150 м3 достичь обычной

рН среды. Часто в отработанных газах анализируют

 

для небольших объемов скорости вращения мешал-

содержание СО2 (методом ИК-спектроскопии) и О2

 

ки, потребуются огромные энергозатраты. Из этих же

(методом парамагнитного резонанса). По результа-

 

соображений крайне редко в промышленности ис-

там всех анализов получают полную картину техноло-

 

пользуют рекомбинантные организмы, содержащие

гического процесса. Состав продукта и расход суб-

 

плазмиды с промотором фага λ: при повышении

страта определяют путем периодического отбора проб

 

температуры, что необходимо для индукции генов

без нарушения стерильности системы. Из-за больших

 

под λ-промотором, может нарушить стабильное те-

затрат на проведение ферментации и высоких цен на

 

чение процесса в большом реакторе. При расчете па-

сырье, ведется постоянный поиск возможностей для

 

раметров аэрации учитывают повышенную чувстви-

снижения затрат (технологический процесс получения

 

тельность клеток стрептомицетов, Aspergillus и

продукта с рыночной ценой около 10 евро/кг в фер-

 

Penicillum к механическому воздействию. Аналогич-

ментере объемом 100 м3 с выходом продукта 100 г/л

 

ные аспекты принимают во внимание, когда рассмат-

обходится в 100 000 евро).

 

ривают прохождение газа через среду, а также отве-

ПРОБЛЕМА ПЕНООБРАЗОВАНИЯ В ФЕРМЕНТЕРАХ.

 

дение образовавшегося

тепла с

помощью

Интенсивная аэрация жидких сред, содержащих бел-

 

теплообменников.

 

 

ки, часто сопровождается нежелательным пенообра-

 

ТИПЫ БИОРЕАКТОРОВ. Первыми в промышленности

зованием. Для предотвращения этого обычно ис-

 

были применены поверхностные реакторы (для про-

пользуют механические сбиватели пены, а при

 

изводства лимонной кислоты) и пленочные биореак-

образовании слишком большого количества пены в

 

торы (биофильтры для аэробной очистки сточных

среду добавляют химические пеногасители (напри-

 

вод). Такие конструкции относительно просты в экс-

мер, эруковую кислоту или силиконы). Однако следу-

 

плуатации, однако удельный выход продукта невелик.

ет помнить, что присутствие химических реагентов

 

В современной промышленности наибольшее рас-

может значительно усложнять процедуру очистки

 

пространение получили реакторы с перемешивани-

продукта, поэтому стараются использовать мини-

 

ем, снабженные системой контроля температуры и

мальные количества пеногасителей.

 

интенсивности аэрации, вентилями для отбора проб и

 

 

стерильными

элементами

конструкции (трубы

 

 

и т. д.). В процессах с многоступенчатой фермента-

 

 

цией используются реакторы с лопастными мешалка-

 

 

ми, а в случае одноклеточных организмов эрлифт-

 

 

ные реакторы или барботажные колонны. При

 

 

производстве уксусной кислоты и аэробной очистке

 

 

сточных вод применяют мешалки, засасывающие

 

210

воздух при вращении. Реакторы для исследователь-

 

ских целей, как правило, имеют объем не более

 

Типы биореакторов

 

 

 

Поверхностный биореактор

Реакторы с механическим перемешиванием

Подача

 

Турбинная

С внутренними

Мешалка, засасывающая

влажного

Выход

мешалка

трубками

воздух при вращении

воздуха

воздуха

Газ

 

Газ

 

 

Газ

Газ

 

 

 

 

 

 

 

Пере-

 

 

 

 

город-

 

 

 

 

ка

Пластины

 

 

 

 

с питательной средой

 

 

Мотор

 

 

 

Газ

 

 

 

 

 

 

 

Обычно такие реакторы имеют объем до 150 м3

Барботажные колонны, эрлифтные реакторы и реакторы с внутренним контуром

Барботажная

Эрлифтный

Реактор с внутренним

Реактор с внешней

колонна

реактор

контуром

 

рециркуляцией

Газ

Газ

Газ

 

Газ

 

Пере-

 

 

Пере-

 

город-

 

 

город-

 

ка

 

 

ка

 

 

 

 

L

Газ

Газ

 

Газ

Газ

 

 

Такие реакторы обычно имеют объем >150 м3

 

 

 

Скорость перемешивания в реакторах разного объема

 

Объем биореактора, л

3

9

100

300

1 000

3 000

24 000

Скорость вращения мешалки, об/мин

750

2 000

230

350

200

180

30

Время перемешивания, с

5

3

6,6

5

25

20

66

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Параметры процесса ферментации

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Физические параметры

 

Химические параметры

 

Биологические параметры

 

 

 

Температура

Величина рН

Активность ферментов

 

 

Давление

Растворенный кислород

Содержание АТФ

 

 

Потребляемая мощность

Содержание О2 и СО2

Содержание НАДФ

 

 

Вязкость

в отработанных газах

Содержание белков

 

 

Скорость прохожения газа

Редокс-потенциал

 

 

 

 

Поступление среды

Концентрация субстрата

 

 

 

 

Оптическая плотность среды

Концентрация продукта

 

 

 

 

Вес ферментера

Концентрация ионов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Красным обозначены параметры, значение которых можно регулировать

 

 

211