- •Содержание
- •Предисловие
- •Предисловие ко 2-му изданию
- •Введение
- •Этапы развития биотехнологии
- •Биотехнология сегодня
- •Биотехнологическое производство пищевых продуктов
- •Алкогольные напитки
- •Пивоварение
- •Ферментация в пищевой промышленности
- •Пищевые продукты и молочнокислое брожение
- •Этиловый спирт
- •1-Бутанол, ацетон
- •Уксусная кислота
- •Лимонная кислота
- •Молочная и глюконовая кислоты
- •Аминокислоты
- •L-Глутаминовая кислота
- •D,L-Метионин, L-лизин и L-треонин
- •Антибиотики
- •Антибиотики: источники, применение и механизмы действия
- •Антибиотики: получение. Устойчивость к антибиотикам
- •β-Лактамные антибиотики: промышленное получение
- •Гликопептидные, полиэфирные и нуклеозидные антибиотики
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Тетрациклины, хиноны, хинолоны и другие ароматические антибиотики
- •Поликетидные антибиотики
- •Получение новых антибиотиков
- •Специальные продукты
- •Витамины
- •Нуклеозиды и нуклеотиды
- •Биодетергенты и биокосметика
- •Микробные полисахариды
- •Биоматериалы
- •Биотрансформация
- •Биотрансформация стероидов
- •Ферменты
- •Ферменты
- •Ферментативный катализ
- •Ферменты в клинических анализах
- •Тесты с помощью ферментов
- •Применение ферментов в промышленных технологиях
- •Ферменты в производстве моющих средств
- •Ферменты, расщепляющие крахмал
- •Ферментативное расщепление крахмала в промышленности
- •Ферментативное превращение сахаров
- •Утилизация целлюлозы и полиозы
- •Использование ферментов в целлюлозно-бумажной промышленности
- •Пектиназы
- •Ферменты в производстве молочных продуктов
- •Использование ферментов в хлебобулочной и мясоперерабатывающей промышленности
- •Ферменты в кожевенной и текстильной промышленности
- •Перспективы получения ферментов для промышленных технологий
- •Белковая инженерия
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Белки и жиры из одноклеточных организмов
- •Аэробная очистка сточных вод
- •Анаэробная очистка сточных вод и переработка ила
- •Биологическая очистка газовых выбросов
- •Биологическая очистка почв
- •Микробиологическое выщелачивание руд и биокоррозия
- •Инсулин
- •Гормон роста и другие гормоны
- •Гемоглобин, сывороточный альбумин и лактоферрин
- •Факторы свертывания крови
- •Антикоагулянты и тромболитики
- •Ингибиторы ферментов
- •Иммунная система
- •Стволовые клетки
- •Тканевая инженерия
- •Интерфероны
- •Интерлейкины
- •Эритропоэтин и другие факторы роста
- •Другие белки, имеющие медицинское значение
- •Вакцины
- •Рекомбинантные вакцины
- •Антитела
- •Моноклональные антитела
- •Рекомбинантные и каталитические антитела
- •Методы иммуноанализа
- •Биосенсоры
- •Биотехнология в сельском хозяйстве
- •Животноводство
- •Перенос эмбрионов и клонирование животных
- •Картирование генов
- •Трансгенные животные
- •Генетическая ферма и ксенотрансплантация
- •Растениеводство
- •Культивирование растительных клеток: поверхностные культуры
- •Культивирование растительных клеток: суспензионные культуры
- •Трансгенные растения: методы получения
- •Трансгенные растения
- •Вирусы
- •Бактериофаги
- •Микроорганизмы
- •Бактерии
- •Некоторые бактерии, важные для биотехнологии
- •Грибы
- •Дрожжи
- •Усовершенствование штаммов микроорганизмов
- •Основы биотехнологических методов
- •Микроорганизмы: рост в искусственных условиях
- •Кинетика образования продуктов метаболизма и биомассы в культуре микроорганизмов
- •Технология ферментации
- •Промышленные процессы ферментации
- •Культивирование животных клеток
- •Биореакторы для культивирования животных клеток
- •Биореакторы с иммобилизованными ферментами и клетками
- •Очистка биотехнологических продуктов
- •Очистка биотехнологических продуктов: хроматографические методы
- •Экономические аспекты биотехнологического производства
- •Методы генетической инженерии
- •Структура ДНК
- •Функции ДНК
- •Эксперимент в генетической инженерии
- •Методы выделения ДНК
- •Ферменты, модифицирующие ДНК
- •ПЦР: лабораторная практика
- •ДНК: химический синтез и определение размера молекул
- •Секвенирование ДНК
- •Введение ДНК в живые клетки (трансформация)
- •Идентификация и клонирование генов
- •Экспрессия генов
- •Выключение генов
- •Геном прокариот
- •Геном эукариот
- •Геном человека
- •Функциональный анализ генома человека
- •ДНК-анализ
- •Белковые и ДНК-чипы
- •Маркерные группы
- •Тенденции развития
- •Генная терапия
- •Поиск биологически активных веществ
- •Протеомика
- •Обмен веществ
- •Метаболомика и метаболическая инженерия
- •Системная биология
- •«Белая» биотехнология
- •Сертификация биотехнологической продукции
- •Этические аспекты генетической инженерии
- •Патентование в биотехнологии
- •Биотехнология в разных странах
- •Биотехнология в разных странах
- •Литература
- •Источники иллюстраций
- •Указатель микроорганизмов
Биотехнология в медицине
Биосенсоры
ВВЕДЕНИЕ. В биосенсоре объединены чувствитель- |
пользуя оптическое волокно (световод). Оптические |
ный материал биологического происхождения (фер- |
биосенсоры находят очень широкое применение бла- |
мент, антитела, ДНК, микроорганизмы и т.д.), реаги- |
годаря высокой чувствительности (до 10–10 г/л) и |
рующий на присутствие определяемого компонента, |
возможности получать не только качественные, но и |
и физический преобразователь сигнала (электрод, |
количественные данные. |
оптрод, светочувствительное устройство, кварцевое |
ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫЙ АНАЛИЗ (ПИА). В стро- |
оптическое волокно и др). Самое большое распро- |
гом смысле слова этот метод не относится к биосен- |
странение получили ферментные и микробные био- |
сорным (биологический компонент и преобразова- |
сенсоры. Объем мирового рынка биосенсоров соста- |
тель разнесены в пространстве), однако метод |
вляет 5 млрд долл. США. |
находит все большее применение в иммунофермент- |
ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЕ БИОСЕНСОРЫ. На поверхно- |
ном анализе и в исследованиях ДНК. ПИА сочетает в |
сти датчиков в ферментных биосенсорах иммобили- |
себе аналитический подход и автоматизированную |
зованы ферменты, чаще всего гидролазы (для изме- |
обработку жидких проб, поэтому его часто использу- |
рения рН среды) или оксидазы (для определения |
ют при непрерывном измерении концентрации компо- |
концентраций О2 или Н2О2). Часто при измерении |
нентов пробы. Возможно применение принципа ПИА |
окислительно-восстановительного потенциала ис- |
в сочетании с микросистемной технологией, напри- |
пользуют так называемые медиаторы. Окислитель- |
мер нанотехнологией. |
но-восстановительный потенциал диметилферроцена |
РЕЦЕПТОРЫ КАК БИОСЕНСОРЫ. Хеморецепторы бак- |
+100 мВ; это обеспечивает высокую специфичность |
терий и органы чувств высших животных – примеры |
сенсора: удается снизить фоновые шумы, так что не- |
естественных биосенсоров. В отличие от биосенсо- |
специфические реакции с другими компонентами |
ров, созданных человеком, рецепторы могут обнару- |
среды, по-видимому, исключены (редокс-потенциал |
живать, а затем быстро количественно определять |
L-аскорбиновой кислоты +170 мВ). Самый извест- |
очень сложные комбинированные сигналы (запах ро- |
ный биосенсор – глюкозный электрод. Он использу- |
зы, аромат вина и др.). Распознавание раздражителя |
ется при проведении лабораторных анализов крови |
в рецепторах основано на сравнении полученного |
на «сахар» в медицинских учреждениях, при само- |
сигнала с уже известными сигналами. Однако даже |
контроле уровня «сахара» крови, а также с целью |
самые передовые технологии биосенсорики пока не |
контроля питательной среды в производственных |
позволяют создать прибор, приближающийся к ре- |
биореакторах. Ведутся разработки вживляемых био- |
цепторам по чувствительности и многообразию при- |
сенсоров на глюкозу в комплете с переносным доза- |
нимаемых сигналов. |
тором инсулина; однако такие устройства пока не |
|
применяются из-за отторжения иммунной системой |
|
организма. Кислородные электроды с иммобилизо- |
|
ванными микроорганизмами используются для на- |
|
блюдения за потреблением кислорода в культуре. На |
|
этом же принципе основан контроль сточных вод |
|
после очистки. Применение биосенсоров позволяет |
|
провести качественную и количественную оценку за- |
|
грязнения в течение нескольких минут, в то время |
|
как традиционный анализ занимает около 5 сут. Им- |
|
мунный анализ может также проводиться с помощью |
|
биосенсоров, в которых участники электрохимиче- |
|
ской реакции содержат метку. ДНК-биосенсоры поз- |
|
воляют обнаруживать в среде вещества, которые |
|
оказывают воздействие на генетический материал. |
|
Принцип метода заключается в том, что в результате |
|
взаимодействия ДНК с биологически активными ве- |
|
ществами происходит изменение физико-химиче- |
|
ских свойств нуклеиновой кислоты, что обнаружива- |
|
ется с помощью детектора. |
|
ОПТИЧЕСКИЕ БИОСЕНСОРЫ. При взаимодействии антитела и антигена образуется белковый комплекс большего размера с определенными оптическими ха- 160 рактеристиками, которые можно анализировать, ис-
Биосенсоры
|
Биологически активный |
|
|
компонент |
Преобразователь |
Ферментные электроды |
|
|
Амперометрические |
Оксидазы |
O2-электрод |
Потенциометрические |
Гидролазы |
Ионселективный электрод |
Ферментные полевые транзисторы |
Гидролазы |
Полевой транзистор |
Микробные сенсоры |
Микроорганизмы |
O2-электрод |
|
|
Ионселективный электрод |
Пьезосенсоры |
Антитела |
Жидкий кварц |
Оптические сенсоры |
Антитела, ДНК |
Световод с сетчатым элементом, |
|
|
поверхностный плазмонный резонанс |
|
|
|
Подготовка образца осуществляется, например, с помощью ПИА, а для обработки электронного сигнала может применяться нейрональная сеть.
Кислородный электрод |
|
Оптический биосенсор |
|
Определение |
Определение |
Принцип поверхностного |
|
кислорода |
Н2О2 |
плазмонного резонанса |
|
–600 мВ |
+400 мВ |
|
|
Определение медиатора |
|
|
|
+100 мВ |
|
|
|
Pt-электрод |
|
Чувстви- |
Слой |
|
|
золота |
|
|
|
тельный |
|
Ag/AgCl-электрод |
|
||
чип |
|
||
Раствор KCl |
|
Лазер |
Детектор |
|
|
|
|
Стеклянный корпус |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Мембрана, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
проницаемая |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
для кислорода |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Резиновые |
|
|
|
|
|
|
Слой |
|
|
прокладки |
|
|
|
Чувстви- |
|
|
||
|
|
|
|
|
золота |
|
|||
|
|
|
|
|
тельный |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Определение глюкозы |
|
|
|
чип |
Лазер |
Детектор |
|
||
|
|
|
|
|
|||||
Глюкоза |
FAD |
Н2О2 или 2Med |
red |
Если в анализируемой смеси присутствует |
|
||||
|
компонент, реагирующий с антителом, то в резуль- |
|
|||||||
Глюкозооксидаза |
|
|
|
тате этого взаимодействия происходит изменение |
|
||||
|
|
|
показателя преломления. Это изменение регистри- |
|
|||||
Глюконо- |
FADH2 |
О2 |
2Medox |
руется детектором |
|
|
|
||
|
Исследуемое |
Толщина слоя |
|
||||||
лактон |
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
вещество (антиген) |
Капилляры |
|
||
FAD/FADH2: кофактор флавинадениндинуклеотид |
|
|
|
||||||
|
|
Рецептор |
|
||||||
|
|
|
|
|
|||||
Medred/Medox: медиатор, например диметилферроцен |
|
|
(антитела к антигену) |
|
|
||||
Проточно-инжекционный анализ содержания этанола |
Поток носителя |
Проба |
|
||||||
Ферментативный реактор |
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
Буфер |
|
|||
на основе алкогольоксидазы |
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
Кислородный |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
электрод |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Выход |
|
|
|
|
Выход |
|
Вентиль |
Диффузионная |
|
|
|
Вентиль |
Диффузионная |
|
|
|
Насос |
камера (30 °С) |
|
|
Насос |
камера (30 °С) |
|
|
||
Выход |
|
|
|
|
|
Oдно измерение занимает около 2 мин |
161 |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|