Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
543
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

Биотехнология в медицине

Биосенсоры

ВВЕДЕНИЕ. В биосенсоре объединены чувствитель-

пользуя оптическое волокно (световод). Оптические

ный материал биологического происхождения (фер-

биосенсоры находят очень широкое применение бла-

мент, антитела, ДНК, микроорганизмы и т.д.), реаги-

годаря высокой чувствительности (до 10–10 г/л) и

рующий на присутствие определяемого компонента,

возможности получать не только качественные, но и

и физический преобразователь сигнала (электрод,

количественные данные.

оптрод, светочувствительное устройство, кварцевое

ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННЫЙ АНАЛИЗ (ПИА). В стро-

оптическое волокно и др). Самое большое распро-

гом смысле слова этот метод не относится к биосен-

странение получили ферментные и микробные био-

сорным (биологический компонент и преобразова-

сенсоры. Объем мирового рынка биосенсоров соста-

тель разнесены в пространстве), однако метод

вляет 5 млрд долл. США.

находит все большее применение в иммунофермент-

ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЕ БИОСЕНСОРЫ. На поверхно-

ном анализе и в исследованиях ДНК. ПИА сочетает в

сти датчиков в ферментных биосенсорах иммобили-

себе аналитический подход и автоматизированную

зованы ферменты, чаще всего гидролазы (для изме-

обработку жидких проб, поэтому его часто использу-

рения рН среды) или оксидазы (для определения

ют при непрерывном измерении концентрации компо-

концентраций О2 или Н2О2). Часто при измерении

нентов пробы. Возможно применение принципа ПИА

окислительно-восстановительного потенциала ис-

в сочетании с микросистемной технологией, напри-

пользуют так называемые медиаторы. Окислитель-

мер нанотехнологией.

но-восстановительный потенциал диметилферроцена

РЕЦЕПТОРЫ КАК БИОСЕНСОРЫ. Хеморецепторы бак-

+100 мВ; это обеспечивает высокую специфичность

терий и органы чувств высших животных – примеры

сенсора: удается снизить фоновые шумы, так что не-

естественных биосенсоров. В отличие от биосенсо-

специфические реакции с другими компонентами

ров, созданных человеком, рецепторы могут обнару-

среды, по-видимому, исключены (редокс-потенциал

живать, а затем быстро количественно определять

L-аскорбиновой кислоты +170 мВ). Самый извест-

очень сложные комбинированные сигналы (запах ро-

ный биосенсор – глюкозный электрод. Он использу-

зы, аромат вина и др.). Распознавание раздражителя

ется при проведении лабораторных анализов крови

в рецепторах основано на сравнении полученного

на «сахар» в медицинских учреждениях, при само-

сигнала с уже известными сигналами. Однако даже

контроле уровня «сахара» крови, а также с целью

самые передовые технологии биосенсорики пока не

контроля питательной среды в производственных

позволяют создать прибор, приближающийся к ре-

биореакторах. Ведутся разработки вживляемых био-

цепторам по чувствительности и многообразию при-

сенсоров на глюкозу в комплете с переносным доза-

нимаемых сигналов.

тором инсулина; однако такие устройства пока не

 

применяются из-за отторжения иммунной системой

 

организма. Кислородные электроды с иммобилизо-

 

ванными микроорганизмами используются для на-

 

блюдения за потреблением кислорода в культуре. На

 

этом же принципе основан контроль сточных вод

 

после очистки. Применение биосенсоров позволяет

 

провести качественную и количественную оценку за-

 

грязнения в течение нескольких минут, в то время

 

как традиционный анализ занимает около 5 сут. Им-

 

мунный анализ может также проводиться с помощью

 

биосенсоров, в которых участники электрохимиче-

 

ской реакции содержат метку. ДНК-биосенсоры поз-

 

воляют обнаруживать в среде вещества, которые

 

оказывают воздействие на генетический материал.

 

Принцип метода заключается в том, что в результате

 

взаимодействия ДНК с биологически активными ве-

 

ществами происходит изменение физико-химиче-

 

ских свойств нуклеиновой кислоты, что обнаружива-

 

ется с помощью детектора.

 

ОПТИЧЕСКИЕ БИОСЕНСОРЫ. При взаимодействии антитела и антигена образуется белковый комплекс большего размера с определенными оптическими ха- 160 рактеристиками, которые можно анализировать, ис-

Биосенсоры

 

Биологически активный

 

 

компонент

Преобразователь

Ферментные электроды

 

 

Амперометрические

Оксидазы

O2-электрод

Потенциометрические

Гидролазы

Ионселективный электрод

Ферментные полевые транзисторы

Гидролазы

Полевой транзистор

Микробные сенсоры

Микроорганизмы

O2-электрод

 

 

Ионселективный электрод

Пьезосенсоры

Антитела

Жидкий кварц

Оптические сенсоры

Антитела, ДНК

Световод с сетчатым элементом,

 

 

поверхностный плазмонный резонанс

 

 

 

Подготовка образца осуществляется, например, с помощью ПИА, а для обработки электронного сигнала может применяться нейрональная сеть.

Кислородный электрод

 

Оптический биосенсор

 

Определение

Определение

Принцип поверхностного

 

кислорода

Н2О2

плазмонного резонанса

 

–600 мВ

+400 мВ

 

 

Определение медиатора

 

 

+100 мВ

 

 

 

Pt-электрод

 

Чувстви-

Слой

 

 

золота

 

 

тельный

Ag/AgCl-электрод

 

чип

 

Раствор KCl

 

Лазер

Детектор

 

 

 

 

Стеклянный корпус

 

 

 

 

 

 

 

 

Мембрана,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

проницаемая

 

 

 

 

 

 

 

 

 

для кислорода

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Резиновые

 

 

 

 

 

 

Слой

 

 

прокладки

 

 

 

Чувстви-

 

 

 

 

 

 

 

золота

 

 

 

 

 

 

тельный

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Определение глюкозы

 

 

 

чип

Лазер

Детектор

 

 

 

 

 

 

Глюкоза

FAD

Н2О2 или 2Med

red

Если в анализируемой смеси присутствует

 

 

компонент, реагирующий с антителом, то в резуль-

 

Глюкозооксидаза

 

 

 

тате этого взаимодействия происходит изменение

 

 

 

 

показателя преломления. Это изменение регистри-

 

Глюконо-

FADH2

О2

2Medox

руется детектором

 

 

 

 

Исследуемое

Толщина слоя

 

лактон

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

вещество (антиген)

Капилляры

 

FAD/FADH2: кофактор флавинадениндинуклеотид

 

 

 

 

 

Рецептор

 

 

 

 

 

 

Medred/Medox: медиатор, например диметилферроцен

 

 

(антитела к антигену)

 

 

Проточно-инжекционный анализ содержания этанола

Поток носителя

Проба

 

Ферментативный реактор

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Буфер

 

на основе алкогольоксидазы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Кислородный

 

 

 

 

 

 

 

 

электрод

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выход

 

 

 

 

Выход

 

Вентиль

Диффузионная

 

 

 

Вентиль

Диффузионная

 

 

Насос

камера (30 °С)

 

 

Насос

камера (30 °С)

 

 

Выход

 

 

 

 

 

Oдно измерение занимает около 2 мин

161