Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
543
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

Ферменты

Ферменты в производстве молочных продуктов

мые при производстве молочных продуктов, отно-

есть расщепляет казеин в положении между 105Pro и

 

ВВЕДЕНИЕ. Наиболее важные ферменты, используе-

той же специфичностью, что и животный химозин, то

 

сятся к протеазам, лактазам и липазам. 1. Самое

106Met. Этот фермент широко применяется в про-

 

большое промышленное значение имеют высоко-

мышленности и получил название «бактериальный

 

специфичные протеазы (сычужный фермент,

сычужный фермент». В 1987 г. ген предшественника

 

реннин). Объем мирового производства этих фер-

сычужного фермента теленка был клонирован в клет-

 

ментов составляет около 1000 т в год, с использо-

ки E. coli как прохимозин, а с 1992 г. в США рекоби-

 

ванием этих ферментов производства ~13 млн т

нантный фермент разрешен к применению в сырова-

 

сыра (2004 г.). 2. Обработка липазами и протеаза-

рении. В странах ЕС и в Японии рекомбинантный

 

ми придает сыру специфический аромат. 3. Процесс

химозин используется с 1997 г. В качестве хозяй-

 

производства многих молочных продуктов включает

ских клеток в настоящее время предпочитают ис-

 

расщепление молочного сахара. Эту реакцию осуще-

пользовать Kluyveromyces lactis.

 

ствляет β-галактозидаза (лактаза). 4. Особый

РАСЩЕПЛЕНИЕ ЛАКТОЗЫ (МОЛОЧНОГО САХАРА).

 

интерес вызывает использование молочной сыво-

Все детеныши млекопитающих, в том числе наши

 

ротки – побочного продукта молочной промышлен-

дети, получающие материнское молоко, способны

 

ности. Сыворотка образуется в больших количествах

усваивать лактозу. Однако после перехода на «взрос-

 

(около 50 млн тонн в год), и ее утилизация обходит-

лую» пищу многие особи теряют эту способность. Яв-

 

ся очень дорого. Однако сыворотка богата питатель-

ление «непереносимости» лактозы встречается у лю-

 

ными веществами и может быть использована как

дей почти всех народов. «Непереносимость» лактозы

 

питательная среда для роста микроорганизмов.

заключается в том, что сахар не усваивается в же-

 

5. В некоторых развивающихся странах для стерили-

лудке, поэтому использование в пищу обычных мо-

 

зации молочных продуктов применяют лизоцим или

лочных продуктов, богатых лактозой, вызывает диа-

 

Н2О2/каталазу.

рею. Сходное по симптомам, однако обусловленное

 

МОЛОКО. Молоко представляет собой эмульсию

другими причинами редкое заболевание галактозе-

 

мелких капелек жира в водном растворе. Для молока

мия возникает в результате рецессивного дефекта

 

характерен следующий химический состав: вода

аутосомного гена. При галактоземии нарушается син-

 

(90%), триглицерины (жиры) (2–4%), молочный са-

тез УДФ-галактозы, поэтому в организме накаплива-

 

хар и белки (в сумме около 3%). Основной компо-

ется избыточное количество токсических продуктов

 

нент белковой фракции молока – сложные фосфо-

метаболизма галактозы. Больные галактоземией не

 

протеины с молекулярной массой 20–30 кДа

должны употреблять в пищу продукты, содержащие

 

семейства казеиногена, формирующие агрегаты раз-

галактозу. Лактоза молочных продуктов при непере-

 

мером до 1 млн Да. κ-Казеин в свежем молоке слу-

носимости к ней должна быть предварительно гидро-

 

жит коллоидообразующим агентом. Для осаждения

лизована до глюкозы и галактозы. Йогурты, лактоз-

 

казеинов при приготовлении молочных продуктов ис-

ный сироп для хлебопечения и другие молочные

 

пользуют различные методы: добавление ионов Ca2+

продукты, не содержащие лактозу, получают путем

 

в концентрации более 6 мM, закисление среды до рН

ферментации с помощью рекомбинантных микроор-

 

<4,6, гидролиз пептидной связи между 105Pro и

ганизмов.

 

106Met в молекуле κ-казеина. Последняя реакция

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ВЕЩЕСТВА-АРОМАТИЗАТОРЫ В СЫ-

 

осуществляется с помощью протеолитического фер-

РОВАРЕНИИ. При обработке липазами содержащиеся

 

мента химозина (реннина), который вырабатывается

в молоке триглицерины, ацилированные остатками

 

в слизистой оболочке желудка.

карбоновых кислот с короткой или средней углеводо-

 

ПРОТЕИНАЗЫ, РАСЩЕПЛЯЮЩИЕ КАЗЕИН. В желудке

родной цепью, сыры получают специфический аромат.

 

млекопитающих казеин молока гидролизуется под

Выбирая липазы различной специфичности, можно

 

действием кислот и химозина. Использование химо-

получать сыры с разными вкусовыми качествами.

 

зина при приготовлении сыра или творога – один из

 

 

самых старых способ консервирования продуктов.

 

 

Согласно классическому методу, фермент выделяют

 

 

из желудков (сычугов) молочных телят, однако полу-

 

 

ченные таким способом препараты часто загрязнены

 

 

другими ферментами. Учитывая технологическую

 

 

важность ферментов, расщепляющих казеин, особое

 

 

значение приобретают методы получения бактери-

 

98

альных протеиназ и синтеза рекомбинантного химо-

 

зина. Протеиназа из гриба Mucor miehei обладает

 

Состав молока

Молоко, % Сыворотка, %

Вода

~88

~94

Жиры

~3–4

~0,5

Белки

~3,3

~1

Казеины

~2,6

Лактоза

~3

~4,8

Плазмида

trp-Промотор

 

для экспрессии

ori

прохимозина

 

в клетках E. coli

 

 

Ген про-

 

 

химозина

pCT66

 

 

 

Т7-Терминатор

ampR

 

 

Переработка молока

 

Стартовые

 

 

Кисло-

культуры

Лактаза

Продукты,

молочные

Молоко

 

не содержащие

продукты

Кислота,

 

лактозы

 

 

 

 

Ca2+,

 

 

 

химозин

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Лактаза

Корма сельско-

Сырный сгусток

 

Сыворотка

 

хозяйственных

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

животных,

 

 

 

 

 

 

 

Разделение

 

 

 

 

 

 

 

сырье для

 

 

 

 

 

 

 

с помощью

ферментации

 

 

 

 

 

 

 

мембран

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

«Молодой» сыр

 

Лактоза и белки

 

 

 

 

 

 

 

 

сыворотки

 

 

 

 

Липазы,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

протеазы,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

другие

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ферменты,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

стартовые культуры

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Зрелый сыр

 

 

 

Лактозный сироп

 

 

 

 

Водная эмульсия

 

с мицеллами,

 

содержащими

 

α-, β- и κ-казеин

Гидрофобное ядро

Полярные

Фосфатные

«хвосты»

группы

κ-казеина

α- и β-казеина

Отщепление полярных участков κ-казеина с помощью химозина (сычужного фермента) приводит к разрушению мицелл и выпадению

белка в осадок (створаживание молока также происходит в присутствии Са2+)

Получение химозина

Природный способ

Микробиологический способ

Рекомбинантный способ

 

 

 

 

 

Желудок (сычуг)

 

Культура микроорганизмов

 

Рекомбинантный микроорганизм

молодых телят

 

 

 

 

штаммы-суперпродуценты

 

Kluyveromyces lactis

размельчение, активация

 

 

 

Mucor miehei или M. pusillus

 

 

фермента при рН < 5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Биореактор

 

 

Биореактор

 

Экстракция

 

 

ферментация с добавлением субстрата

 

 

 

декстрозный сироп,

 

раствор поваренной соли,

 

 

 

 

соевая мука, 30 °С, 72 ч

 

 

14 сут.

 

 

 

 

 

 

 

Очистка

 

 

 

 

 

 

Очистка

 

добавление кислоты, фильтрация

Очистка

 

 

 

 

отделение мицелия,

 

 

ультрафильтрация,

 

обратный осмос,

 

 

стандартизация

 

осаждение

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

200 ед./кг желудков

 

5000 ед./м3 за 72 ч

 

20 000 ед./м3 за 36 ч

Непереносимость лактозы и галактоземия

 

Непереносимость лактозы*

 

 

 

 

 

Галактоземия**

 

 

 

 

 

 

 

Галактоза

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Лактоза

 

 

 

+

 

 

Галактозо-1-фосфат

 

 

УДФ-галактоза

 

 

 

 

 

 

 

 

β-Галактозидаза,

Глюкоза

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

«лактаза»

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Галактит (токсичное соединение)

 

 

Нормальный

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

обмен веществ

Нарушение осмотических процессов в тонком кишечнике: судороги и диарея

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

**

Более 70% взрослого населения южноафриканского народа банту, афроамериканцев,

 

 

индейцев, китайцев и аборигенов Австралии

 

**

Дефект гена 1-фосфат-уридилтрансферазы 9-й хромосомы, частота встречаемости 1:100 000

99

 

 

 

 

Ферменты

Использование ферментов в хлебобулочной и мясоперерабатывающей промышленности

ВВЕДЕНИЕ. Получение опары – наиболее важный

временном производстве используют дрожжи, кото-

этап в производстве хлебобулочных изделий. Ком-

рые оптимизированы для быстрого образования опа-

бинированное молочнокислое и дрожжевое броже-

ры, следовательно и активность препаратов фермен-

ние при изготовлении хлеба из ржаной муки способ-

тов также должна быть высокой. Чаще всего

ствует его лучшей усвояемости. Для приготовления

применяется нейтральная протеиназа из Aspergillus

теста, как правило, используют очищенные фермен-

oryzaе, которая разрыхляет клейковину в необходимой

ты (α-амилазы, глюкоамилазы, протеиназы, ксила-

мере, не приводя к излишнему расщеплению белка.

назы). Специфические ксиланазы препятствуют об-

МЕТОДЫ АНАЛИЗА. В современной хлебопекарной

разованию геля, вызванному пентозанами, и таким

промышленности широко используются методы

образом снижают вязкость ржаного или пшеничного

анализа и контроля технологических процессов. На-

теста. Роль амилаз, глюкоамилаз и протеиназ за-

пример, для изучения газообразования и уменьше-

ключается в разрыхлении теста. В зависимости от

ния вязкости используют метод определения числа

природы муки для теста используют разные фер-

падения. Для наблюдения за ходом протеолиза под

менты в разных соотношениях. Добавление β-ами-

действием протеиназ применяют фаринограф, экс-

лазы, катализирующей образование мальтозы при

тенсограммы или альвеограммы, которые отражают

гидролизе углеводов, позволяет значительно увели-

изменение вязкости раствора при расщепления

чить сроки хранения хлеба. Современная хлебопе-

глютена.

карная промышленность во всем мире потребляет

ФЕРМЕНТЫ ПРИ ПЕРЕРАБОТКЕ МЯСА. Мясо – это

около 1000 тонн ферментов в год. Для производст-

мышечная ткань, подвергнутая биохимической обра-

ва колбасных изделий к мясу добавляют стартовые

ботке. Особая роль в этой обработке принадлежит

культуры микроорганизмов, что определяет вкусо-

протеиназам (катепсинам). Основными критериями

вые качества и сроки хранения полученных колбас.

качества мяса служат сочность, вкусовые качества,

Нежный вкус мяса достигается обработкой протеи-

цвет и мягкость. Существует множество способов

назами, которые частично расщепляют мышечные

сделать мясо более нежным на вкус: так, в Европе

волокна. Чаще всего в мясной промышленности ис-

мясо маринуют, а в некоторых странах его заворачи-

пользуют протеиназу папаин.

вают в листья папайи или замачивают в ананасовом

ИЗГОТОВЛЕНИЕ ХЛЕБА. Муку получают перемалыва-

соке или в соке папайи. При смачивании раствором

нием зерна. В завимости от вида зерна различают

папаина (сульфгидрильная протеиназа, выделенная

пшеничную, ржаную муку, муку из спельты*. Свойст-

из папайи) мясо тоже становится мягким. Можно

ва почвы, на которой выращивался злак, климат и

также делать инъекции неактивного папаина живот-

уровень зрелости на момент сбора урожая определя-

ным непосредственно перед забоем: в мясе убитого

ют содержание крахмала, пентозанов и белков.

животного окисленные группы папаина восстанавли-

Воздействие ферментов может изменять состав му-

ваются, происходит активация фермента и частичное

ки: так, амилазы расщепляют крахмал до декстринов

разрушение мышечной ткани.

(α-амилаза), мальтозы (β-амилаза) и в конце кон-

 

цов – до глюкозы. Этот процесс важен для

 

следующих этапов переработки муки: например, пе-

 

карские дрожжи, используемые для приготовления

 

опары, могут перерабатывать только моноили диса-

 

хариды. Белок клейковины глютен связывает воду и

 

формирует гелеобразную структуру теста. При дейст-

 

вии протеиназ эту структуру можно частично разру-

 

шить и таким образом повысить эластичность теста:

 

это необходимо для эффективного удерживания СО2,

 

образовавшегося в результате жизнедеятельности

 

дрожжей при получении опары. Слишком высокая

 

концентрация протеиназ приводит к потере эластич-

 

ности и излишнему размягчению структуры теста. На

 

практике обычно используют α-амилазы, выделен-

 

ные из солода, бацилл или плесневых грибов. Глюко-

 

амилазы также получают из плесневых грибов. В со-

 

100 * Спельта – зимостойкий сорт пшеницы, распространенный в Европе. – Прим. пер.

Ферменты, применяемые при подготовке теста

 

 

Компоненты муки

 

Тесто

Преимущества

 

 

 

(мука + вода + дрожжи)

 

 

Крахмал

α-Амилаза

Декстрины

Разделка теста

β-Амилаза

 

 

 

β-Амилаза

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Сахар (мальтоза)

Ароматный, поджаристый хлеб

 

 

 

 

 

Дрожжи

 

 

 

 

 

 

СО2

Увеличение объема

 

Протеиназы

 

(воздушность теста)

 

 

 

 

 

 

Белки

(оксидазы)

Разрыхление

Разделка теста

 

 

 

 

плотной структуры

 

 

 

 

 

Слизистые

Специфические

 

 

 

Переработка вязкой ржаной

вещества

ксиланазы

Расщепление пентозанов

(= пентозаны)

 

 

муки, увеличение объема

 

 

 

 

 

(воздушность теста)

 

 

 

 

 

 

Ферменты в хлебопечении

 

 

 

 

 

Фермент

 

Действие

 

 

Метод определения

 

Эффект

α-Амилаза из солода,

Расщепление крахмальных

Образование газа при

 

Увеличение объема,

Bacillus, Aspergillus,

гранул в муке, гидролиз

 

дрожжевом брожении*,

улучшение структуры

глюкоамилаза

 

крахмального клейстера

 

измерение вязкости

 

корочки, улучшение

из Aspergillus oryzae

с образованием мальтозы

(амилограф),

 

вкусовых качеств

 

 

и глюкозы

 

 

пробная выпечка

 

 

Протеиназы

 

Разрушение глютена

 

Вязкость и эластичность

Эластичное тесто,

из плесневых грибов

 

 

 

(фаринограф, экстенсо-

повышенное

 

 

 

 

 

граммы и др.)

 

содержание газа

Ксиланаза

 

Разрушение слизистых

 

Измерение вязкости

 

Улучшение механических

из Trichoderma viride

веществ

 

 

(амилограф)

 

свойств хлеба (пористость,

 

 

 

 

 

 

 

равномерность)

β-Амилаза

 

Увеличение срока

 

Органолептически

 

Предотвращает

из B. stearothermophilus,

хранения, более

 

 

 

взаимодействие крахмала

Aspergillus

 

насыщенный аромат

 

 

 

и глютена

* Saccharomyces cerevisiae перерабатывают только мальтозу или глюкозу

 

 

(не действуют на другие олигосахариды)

 

 

 

 

 

Эластичность теста

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Контроль

Сопротивление растяжению

 

 

 

 

 

 

3 г протеиназы*

 

 

 

 

 

 

6 г протеиназы*

 

 

 

 

 

 

30 г протеиназы*

 

 

 

 

 

 

на 100 кг муки

 

 

 

 

 

 

 

 

Растяжимость (эластичность)

 

 

 

* из Bacillus amyloliquefaciens

Пробная выпечка

 

 

 

 

 

 

 

1500

 

 

 

 

В присутствии ферментов*

 

 

Амилаза из Aspergillus oryzae,

 

 

 

 

 

 

 

 

ксиланаза из Aspergillus niger

хлеба

1000

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Контроль

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Объем

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

500

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

*Вклад в увеличение объема:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

α-амилаза

+

 

10%,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

протеиназы

+

 

5%,

 

 

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ксиланазы

+

 

25%,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

0

10

30

60

90

120

160

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Время, мин

 

 

 

 

 

 

101