Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Шмид Р. Наглядная биотехнология и генетическая инженерия..pdf
Скачиваний:
543
Добавлен:
30.05.2021
Размер:
9.07 Mб
Скачать

медицине

Стволовые клетки

ченному росту в культуре, и под действием особых

 

ВВЕДЕНИЕ. Стволовые клетки способны к неограни-

в

факторов они дифференцируются в специализиро-

Биотехнология

ванные клетки. Стволовые клетки обнаруживаются

 

 

не только на ранних стадиях развития эмбриона (эм-

 

бриональные стволовые клетки), но также во многих

 

тканях взрослого организма. Стволовые клетки яв-

 

ляются незаменимым объектом для фундаменталь-

 

ных исследований, в частности для изучения моле-

 

кулярных основ дифференцировки клеток (биология

 

развития). Стволовые клетки также имеют большие

 

перспективы в медицине (клеточная терапия, ткане-

 

вая инженерия).

 

ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ. На самом

 

раннем этапе зародышевого развития (стадия мору-

 

лы) все клетки организма, берущие начало от опло-

 

дотворенной яйцеклетки, являются тотипотентными,

 

то есть обладают способностью к дифференцировке

вразличные типы клеток. Если на этой стадии морула делится пополам, образуются однояйцевые (монозиготные) близнецы. По прошествии четырех дней после оплодотворения из морулы в результате многократного клеточного деления формируется бластоциста, содержащая первые дифференцированные клетки: поверхностные бластомеры становятся эпителиоподобными клетками, а клетки внутренней полости бластулы сохраняют плюрипотентность. Такой пул эмбриональных стволовых клеток сохраняется и на последующих стадиях развития эмбриона: они дифференцируются в различные типы клеток, например в клетки крови или кожных покровов. У зародыша человека к восьмой неделе после оплодотворения большинство эмбриональных стволовых клеток уже дифференцировано. Таким образом, эмбриональные стволовые клетки можно получить: 1) из бластоцисты человека, если в результате оплодотворения in vitro образуется множество бластоцист, из которых необходима лишь одна (или несколько); 2) из эмбриональной ткани при абортах; 3) из культуры клеток, полученных в результате перенесения диплоидного клеточного ядра

вяйцеклетку, собственное ядро которой было предварительно удалено, и развившихся до стадии бластоцисты (клонирование животных).

СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ВЗРОСЛОГО ОРГАНИЗМА.

Мультипотентные стволовые клетки костного мозга лишь короткое время находятся в кровяном русле, а затем они дифференцируются и дают начало всем линиям клеток крови. Стволовые клетки были обнаружены и в других тканях взрослых животных: например стволовые клетки нейронов (в удаленной ткани мозга). В экспериментах с животными было показано, что стволовые клетки могут претерпевать «пере-

136 дифференцировку», то есть при трансплантации из

одной ткани в другую приобретать новые свойства, характерные для клеток ткани-реципиента. Введение стволовых клеток костного мозга пациентам, перенесшим инфаркт миокарда, улучшает работу сердца. В случае лейкемии также наблюдается положительный эффект от терапии стволовыми клетками взрослого организма. Очень большое преимущество использования взрослых стволовых клеток заключается в их иммуносовместимости, поскольку донор и реципиент – один и тот же человек. Они обладают врожденными и приобретенными в течение жизни генетическими дефектами. Кроме того, получение стволовых клеток взрослого – значительно более сложная задача, чем получение эмбриональных стволовых клеток.

ПРИМЕНЕНИЕ. Эмбриональные стволовые клетки применяются при изучении молекулярных механизмов развития организма и причин патологий, например врожденных дефектов, онкологических болезней и других. Другой пример использования эмбриональных стволовых клеток – создание коллекции клеточных культур различных линий с целью изучения действия новых лекарственных препаратов на ткани организма. Наконец, третье перспективное направление – клеточная терапия хронических заболеваний: в частности трансплантация клеток островков поджелудочной железы, полученных из стволовых клеток, могла бы помочь детям с диабетом I типа. Несмотря на эти многообещающие перспективы, здесь важно обратить внимание на возможные проблемы: например, правильная дифференцировка эмбриональных стволовых клеток в культуре и иммуносовместимость.

ЭТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ. Является ли зародыш на стадии морулы или бластоцисты человеком, и имеет ли он наравне со всеми гражданами юридическое право на жизнь? Эти и другие вопросы, связанные с этической стороной использования эмбриональных стволовых клеток, активно обсуждаются. В настоящее время в большинстве промышленно развитых стран сохраняется ограничение на терапевтическое клонирование.

Схема развития человеческого эмбриона

 

Сперматозоид

Мультипотентные клетки

 

 

 

 

 

4 сут.

 

8 недель

 

 

 

С 36 недель

 

 

 

и до взрослого

 

 

 

состояния

Яйцеклетка

Морула

 

Зародыш

 

(тотипотентные

 

 

Оплодо-

клетки)

Бластоциста

Небольшое количество стволовых

творение

 

(первая дифференцировка)

клеток во взрослом организме

Терапевтическое и репродуктивное клонирование

 

Сохранение собственного генотипа пациента

 

Набор хромосом:

 

 

 

 

 

гаплоидный

 

 

 

 

 

диплоидный

 

 

Стволовые клетки

 

Культивирование

 

 

 

взрослого организма

 

в присутствии факторов роста

 

 

Перенос генов донора

 

Отделение

 

 

Удаление

 

клеток зародыша

 

 

 

от оболочки

 

 

ядра

 

 

 

Пациент

 

 

 

 

 

 

Яйцеклетка

Слияние

Клеточное

Культивирование

 

 

 

с диплоидной

деление,

в присутствии

 

 

 

клеткой

образование

факторов роста

 

 

 

 

бластоцисты

 

 

 

Перенос генов донора

 

 

 

 

Получение бластоцисты или эмбриона при аборте, выкидыше, или оплодотворении in vitro

 

Репродуктивное клонирование

 

 

 

 

Удаление

 

 

 

 

ядра

 

 

 

 

 

Яйцеклетка

Слияние

Клеточное

 

 

 

с диплоидной

 

 

 

 

деление,

 

 

 

 

клеткой

 

 

 

 

образование

Введение в матку

Клонированный

 

 

 

 

 

 

бластоцисты

суррогатной матери

зародыш человека

 

Терапевтическое значение стволовых клеток

 

 

 

Разработка тестов

 

 

 

 

на наличие токсичных веществ,

 

 

 

 

поиск лекарств

 

 

 

 

 

 

 

Ткань/клетки

 

 

 

 

 

для терапии

Костный мозг

Нервные клетки

 

 

 

 

 

Культура мультипотентных

 

 

 

 

стволовых клеток

 

 

 

 

Изучение закономерностей развития

 

 

 

 

и механизмов регуляции

 

Клетки

Клетки поджелу-

 

клеточной дифференцировки

 

 

 

сердечной мышцы

дочной железы

 

 

 

 

137

 

 

 

 

 

медицине

Тканевая инженерия

ВВЕДЕНИЕ. Методы тканевой инженерии позволяют

заменять поврежденные ткани путем транспланта-

в

ции. Ранее существующая технология пересадки

Биотехнология

тканей при их повреждении (например, при ожогах)

 

 

за последнее десятилетие была существенно усовер-

 

шенствована благодаря появлению возможности ис-

 

пользовать искусственно выращенные ткани целых

 

органов: костей, хрящей, роговицы глаза, мышц, кро-

 

веносных сосудов, печени и нервных клеток. Боль-

 

шую роль в этом достижении сыграли биосовмести-

 

мые материалы подложки и методики работы со

 

стволовыми клетками.

 

ХИРУРГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Путем аутотранспланта-

 

ции осуществляют пересадку тканей в пределах орга-

 

низма одного пациента. Например, при анастомози-

 

ровании суженные вены сердца замещают венами из

 

ноги (около 150 000 случаев в Германии в 2003 г.).

 

Такой подход, хотя и не сопровождается иммунологи-

 

ческим отторжением, является достаточно дорого-

 

стоящим и зачастую болезненным. При аллогенной

 

трансплантации пересаживают ткани или органы

 

(сердце, нервы, печень, кости, поджелудочную железу

 

и т. д.) от другого донора, в том числе умершего. Раз-

 

витию этой технологии способствова-ла разработка

 

иммуносупрессоров (в Германии в 2003 г. провели

 

2111 пересадок нервов, 772 – печени и 374 – серд-

 

ца). Ученые прогнозируют широкое использование в

 

хирургии искусственных биосовместимых материалов,

 

например, при трансплантации сердечных клапанов,

 

искусственных бедренных и коленных суставов или

 

имплантатов груди.

 

РЕГЕНЕРАЦИЯ ТКАНЕЙ, СВЯЗАННЫХ С МАТРИКСОМ.

 

Внеклеточный матрикс (например, коллагеновая сеть

 

в костной ткани) часто функционирует в организме

 

как формообразующий элемент при росте клеток и

 

определяет строение человеческого тела. Искус-

 

ственные матриксы из керамики, коллагеновых тру-

 

бочек, а также пленки, мембраны или микроскопиче-

 

ские шарики могут выполнять ту же функцию. Они

 

могут быть использованы как материал подложки, на

 

которой клетки в присутствии соответствующих ро-

 

стовых факторов формируют искусственную ткань

 

(происходит «экспансия»), которая впоследствии мо-

 

жет быть перенесена в организм пациента. Для фор-

 

мирования такой ткани уже разработаны эффектив-

 

ные методики, например CAD/CAM-метод создания

 

сложных форм. Снабжение растущих клеток в непро-

 

точной системе путем образования капилляров (ан-

 

гиогенеза) до настоящего времени остается важной

 

задачей.

 

ТРЕХМЕРНЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ. Многие клет-

 

ки-предшественники и первичные клетки при опреде-

138

ленных условиях могут быть культивированы на од-

ном матриксе, в результате чего формируются

комплексные эквиваленты тканей. Такое удается, например, при экспансии клеток кожного эпителия в присутствии кератоцитов с образованием искусственного эпидермиса. Трехмерный эквивалент кожи поддерживается благодаря тому, что фибробласты кожи с кератоцитами размножаются в матриксе коллагена. СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ. Плюрипотентные стволовые клетки человека – перспективные материалы для тканевой инженерии благодаря их способности дифференцироваться в различные клеточные линии в зависимости от соответствующего ростового фактора. Костный мозг взрослого организма уже давно используется как источник стволовых клеток с минимальными этическими ограничениями. Стволовые клетки также выделяют из пуповины новорожденных. ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ. Искусственные ткани в настоящее время используются преимущественно для проведения фармацевтических и косметологических исследований. Так, трехмерные культуры тканей в исследованиях кожной переносимости используют как альтернативу экспериментам с животными. Кожу человека используют также для трансплантации. Например, препарат Dermagreft® представляет собой искусственно полученную кожную ткань из фибробластов человека на биосовместимом легко абсорбируемом матриксе. Препарат используют при трансплантационной терапии ожогов, при заживлении ран, при воспалительных процессах (диабетические поражения ног, венозные язвы, пролежни), а также если собственного кожного материала пациента оказывается недостаточно для аутотрансплантации. Костная и нервная ткани также могут быть искусственно получены и использованы для терапии.

Размножение клеток тканей

На основе стволовых клеток

Без употребления стволовых клеток

кровеносные сосуды

сосуды печени

мочевой пузырь

мениск

хрящ

нервная ткань

хрящи уха, носа, суставов

слизистая оболочка

 

 

 

полости рта

хрусталик

скелетные мышцы

сердечный клапан

слюнные железы

сердечная мышца

кожа

ткани кишечника

трахея

 

 

ткань почки

мочеточник

В клинических или доклинических испытаниях

 

 

Коммерческое производство (выборочно)

 

США

Advanced Tissue Sciences

Органы и ткани человека, например кожа, хрящи, кости, печень

США

Curis

Заживление ран, регенеративная медицина

США

MatTek

Кожные пробы

 

Германия

BioTissue Technologies

Кожа, хрящи

 

Голландия

IsoTis

Кожа, хрящи, кости

 

Франция

SkinEthic Laboratories

Кожные пробы

 

Культивирование клеток кожи

 

 

 

 

Посев монослоя

Пассажи, культивирование

 

 

кератоцитов

(стратификация)

 

Кератоциты

 

 

 

 

Проточная культура

Формирование

 

 

дермы

эпидермиса

 

 

 

Среда

 

Биологический

 

с культурой

 

матрикс (коллаген)

клеток

 

 

 

кожи

 

Фибробласты

 

Фибробласты

 

 

Получение трансплантата

 

 

Стволовые клетки кости

 

 

из костного мозга

 

 

 

 

Сорбция на частицах

Трансплантация

Размножение («экспансия»)

гидроксиапатита/

к месту костного

в лабораторных условиях

фосфата кальция

дефекта

Восстановление кожи при помощи фибробластов

 

 

 

Заживление раны с помощью

 

 

 

 

искусственной кожи

 

 

 

 

Ороговевший слой

 

 

 

 

кератоцитов

 

 

 

 

Слой кератоцитов,

 

 

 

 

способных к размножению

через 3 ч

через 24 ч

через 72 ч после

 

контроль

 

 

 

 

повреждения

139