- •Содержание
- •Предисловие
- •Предисловие ко 2-му изданию
- •Введение
- •Этапы развития биотехнологии
- •Биотехнология сегодня
- •Биотехнологическое производство пищевых продуктов
- •Алкогольные напитки
- •Пивоварение
- •Ферментация в пищевой промышленности
- •Пищевые продукты и молочнокислое брожение
- •Этиловый спирт
- •1-Бутанол, ацетон
- •Уксусная кислота
- •Лимонная кислота
- •Молочная и глюконовая кислоты
- •Аминокислоты
- •L-Глутаминовая кислота
- •D,L-Метионин, L-лизин и L-треонин
- •Антибиотики
- •Антибиотики: источники, применение и механизмы действия
- •Антибиотики: получение. Устойчивость к антибиотикам
- •β-Лактамные антибиотики: промышленное получение
- •Гликопептидные, полиэфирные и нуклеозидные антибиотики
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Тетрациклины, хиноны, хинолоны и другие ароматические антибиотики
- •Поликетидные антибиотики
- •Получение новых антибиотиков
- •Специальные продукты
- •Витамины
- •Нуклеозиды и нуклеотиды
- •Биодетергенты и биокосметика
- •Микробные полисахариды
- •Биоматериалы
- •Биотрансформация
- •Биотрансформация стероидов
- •Ферменты
- •Ферменты
- •Ферментативный катализ
- •Ферменты в клинических анализах
- •Тесты с помощью ферментов
- •Применение ферментов в промышленных технологиях
- •Ферменты в производстве моющих средств
- •Ферменты, расщепляющие крахмал
- •Ферментативное расщепление крахмала в промышленности
- •Ферментативное превращение сахаров
- •Утилизация целлюлозы и полиозы
- •Использование ферментов в целлюлозно-бумажной промышленности
- •Пектиназы
- •Ферменты в производстве молочных продуктов
- •Использование ферментов в хлебобулочной и мясоперерабатывающей промышленности
- •Ферменты в кожевенной и текстильной промышленности
- •Перспективы получения ферментов для промышленных технологий
- •Белковая инженерия
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Пекарские и кормовые дрожжи
- •Белки и жиры из одноклеточных организмов
- •Аэробная очистка сточных вод
- •Анаэробная очистка сточных вод и переработка ила
- •Биологическая очистка газовых выбросов
- •Биологическая очистка почв
- •Микробиологическое выщелачивание руд и биокоррозия
- •Инсулин
- •Гормон роста и другие гормоны
- •Гемоглобин, сывороточный альбумин и лактоферрин
- •Факторы свертывания крови
- •Антикоагулянты и тромболитики
- •Ингибиторы ферментов
- •Иммунная система
- •Стволовые клетки
- •Тканевая инженерия
- •Интерфероны
- •Интерлейкины
- •Эритропоэтин и другие факторы роста
- •Другие белки, имеющие медицинское значение
- •Вакцины
- •Рекомбинантные вакцины
- •Антитела
- •Моноклональные антитела
- •Рекомбинантные и каталитические антитела
- •Методы иммуноанализа
- •Биосенсоры
- •Биотехнология в сельском хозяйстве
- •Животноводство
- •Перенос эмбрионов и клонирование животных
- •Картирование генов
- •Трансгенные животные
- •Генетическая ферма и ксенотрансплантация
- •Растениеводство
- •Культивирование растительных клеток: поверхностные культуры
- •Культивирование растительных клеток: суспензионные культуры
- •Трансгенные растения: методы получения
- •Трансгенные растения
- •Вирусы
- •Бактериофаги
- •Микроорганизмы
- •Бактерии
- •Некоторые бактерии, важные для биотехнологии
- •Грибы
- •Дрожжи
- •Усовершенствование штаммов микроорганизмов
- •Основы биотехнологических методов
- •Микроорганизмы: рост в искусственных условиях
- •Кинетика образования продуктов метаболизма и биомассы в культуре микроорганизмов
- •Технология ферментации
- •Промышленные процессы ферментации
- •Культивирование животных клеток
- •Биореакторы для культивирования животных клеток
- •Биореакторы с иммобилизованными ферментами и клетками
- •Очистка биотехнологических продуктов
- •Очистка биотехнологических продуктов: хроматографические методы
- •Экономические аспекты биотехнологического производства
- •Методы генетической инженерии
- •Структура ДНК
- •Функции ДНК
- •Эксперимент в генетической инженерии
- •Методы выделения ДНК
- •Ферменты, модифицирующие ДНК
- •ПЦР: лабораторная практика
- •ДНК: химический синтез и определение размера молекул
- •Секвенирование ДНК
- •Введение ДНК в живые клетки (трансформация)
- •Идентификация и клонирование генов
- •Экспрессия генов
- •Выключение генов
- •Геном прокариот
- •Геном эукариот
- •Геном человека
- •Функциональный анализ генома человека
- •ДНК-анализ
- •Белковые и ДНК-чипы
- •Маркерные группы
- •Тенденции развития
- •Генная терапия
- •Поиск биологически активных веществ
- •Протеомика
- •Обмен веществ
- •Метаболомика и метаболическая инженерия
- •Системная биология
- •«Белая» биотехнология
- •Сертификация биотехнологической продукции
- •Этические аспекты генетической инженерии
- •Патентование в биотехнологии
- •Биотехнология в разных странах
- •Биотехнология в разных странах
- •Литература
- •Источники иллюстраций
- •Указатель микроорганизмов
продуктов |
Ферментация в пищевой промышленности |
||
нием микроорганизмов нашли широкое применение |
сгустка, из которого вызревает сыр. В производстве |
||
|
ВВЕДЕНИЕ. Процессы ферментации с ипользова- |
ментация приводит к образованию молочнокислого |
|
пищевых |
в производстве пищевых продуктов. Реакции, осу- |
сыров используют самые разные микроорганизмы, |
|
ществляемые микроорганизмами, используются при |
чаще всего Penicillum (камамбер, рокфор), Streptococ- |
||
консервировании, рН среды понижается в результа- |
cus (эмменталь) и Lactococcus (гарцер). Разнообразие |
||
те молочнокислого брожения (в квашеной капусте), |
сортов сыра объясняется различным происхождением |
||
после частичного гидролиза в присутствии микроор- |
молока (коровье, козье или овечье), технологией про- |
||
производство |
ганизмов (хлебная закваска, колбасные изделия, |
изводства (аэробные, анаэробные или смешанные ус- |
|
темпех) продукты лучше усваиваются организмом, |
ловия роста бактериальной культуры), а также мето- |
||
|
|||
|
для улучшения вкуса (кисломолочные продукты), а |
дами введения стартовых культур (поверхностное |
|
|
также для получения соусов (соевый соус, мисо из |
нанесение или внутреннее впрыскивание). |
|
|
риса). В развитых странах примерно треть всех про- |
КАКИЕ ПРОДУКТЫ ПОЛУЧАЮТ ПУТЕМ ФЕРМЕНТА- |
|
|
дуктов питания получают путем ферментации, осу- |
ЦИИ НЕ В ЕВРОПЕЙСКИХ СТРАНАХ. В китайской кухне |
|
|
ществляемой определенными штаммами микроорга- |
традиционно используется так называемый красный |
|
Биотехнологическое |
низмов. |
рис (ang-kak). Его получают, добавляя к влажному |
|
СТАРТОВЫЕ КУЛЬТУРЫ. В пищевой промышленно- |
рису споры Monascus purpureus. Благодаря антимик- |
||
|
|||
|
сти используются самые разнообразные микроорга- |
робным свойствам красный рис получил широкое |
|
|
низмы. Они служат в качестве стартовых культур при |
распространение в качестве приправы, его также |
|
|
приготовлении кисломолочных продуктов, различных |
применяют при нарушениях пищеварения. В восточ- |
|
|
сортов хлеба (закваски), выпечки (пекарские дрож- |
ной кухне готовят кишк (kishk), для этого набухшие |
|
|
жи), в пивоварении (пивные дрожжи) и виноделии. |
зерна пшеницы подвергают ферментации бактерия- |
|
|
Стартовая культура может содержать только один |
ми, обитающими в кислом молоке. Японская припра- |
|
|
штамм микроорганизмов, различные микроорганиз- |
ва мисо получается в результате добавления к пропа- |
|
|
мы одного вида и смешанные культуры. Наиболее |
ренному риса грибов Aspergillus oryzae. По очень |
|
|
важным критерием качества культуры является вы- |
древнему рецепту китайской кухни до сих пор готовят |
|
|
сокая скорость ферментации и получение желаемого |
соевый соус – белковый гидролизат, обладающий |
|
|
продукта, например обладающего устойчивостью к |
сильным ароматом. Для этого в смесь соевой муки и |
|
|
антибиотикам или фаговой инфекции. Объем рынка |
пшеничных отрубей впрыскивают культуры грибов |
|
|
стартовых культур в мире составляет сотни миллио- |
Aspergillus oryzae; в условиях повышенной влажности |
|
|
нов долларов США. |
при температуре 35 °С образуется поверхностная |
|
|
ПРОИЗВОДСТВО КОЛБАС. Сырокопченые колбасы |
культура. После добавления равного объема водного |
|
|
(они могут храниться вне холодильной камеры) гото- |
раствора соли смесь подвергают ферментации мо- |
|
|
вят со стартовой культурой стафилококковых бакте- |
лочнокислыми бактериями или дрожжами в течение |
|
|
рий (Staphylococcus carnosus) и лактобактерий, а |
года при комнатной температуре. Путем фермента- |
|
|
также бактерий рода Penicillium. Гликоген мышечной |
ции соевых бобов или пропаренного риса под дейст- |
|
|
ткани перерабатывается микроорганизмами с обра- |
вием грибов Rhizopus oligosporus готовят темпех |
|
|
зованием молочной кислоты, это позволяет снизить |
(tempeh) – основную пищу населения Индонезии и |
|
|
уровень рН ниже 5 и предотвратить рост многих дру- |
Малайзии. |
|
|
гих микроорганизмов. В кислой среде белок мышеч- |
|
|
|
ной ткани (изоэлектрическая точка 5,3) переходит в |
|
|
|
желеобразное состояние. Продукты ферментативных |
|
|
|
превращений жиров и белков обеспечивают специ- |
|
|
|
фический вкус колбасного изделия. При изготовле- |
|
|
|
нии соленых колбас (поваренная соль, нитраты и ни- |
|
|
|
триты в качестве консервантов) используют |
|
|
|
стафилококковые бактерии или лактобактерии, |
|
|
|
устойчивые к повышенному содержанию соли. |
|
|
|
СЫРОВАРЕНИЕ. В 1994 г. мировое производство сыра |
|
|
|
достигло 14,6 млн т в год, при этом около 6 млн т сы- |
|
|
|
ра было произведено в странах Европейского союза |
|
|
|
(ЕС). В Европе производится более 1000 сортов сыра. |
|
|
|
Чтобы приготовить сыр, молоко сбраживают, добавляя |
|
|
16 |
в него сычужный фермент или рекомбинантный химо- |
|
|
зин. Спровоцированная стартовыми культурами фер- |
|
Получение стартовых культур |
|
||
День 1 |
День 2 |
День 3 |
День 4 |
|
|
|
Если культура хранилась |
|
|
|
в замороженном или жидком виде, |
|
|
|
ее пересевают ежедневно |
|
|
|
Вариант 1: |
|
|
|
Для проверки |
|
|
|
стартовой культуры – |
|
|
|
проведение тестов. |
|
|
|
Занимает до 3 сут. |
|
|
|
Вариант 2: |
|
|
|
Использование |
|
|
|
без предварительной |
|
|
|
проверки |
|
|
|
Промышленный ферментер |
«Предкультура» |
Среда, содержащая фосфаты |
||
|
|
||
Питьевая вода |
|
для снижения риска фаговой инфекции |
|
Резервуар |
|
|
К промышленному ферментеру |
|
|
|
|
(9 000 л) |
|
|
Насос |
|
|
|
Производство сыра |
|
|
|
|
|
Сырое молоко |
Внесение стартовой |
Свертывание молока |
|
Добавление соли |
|
пастеризация |
культуры (закваски) |
добавление сычужного |
Удаление |
придание формы, |
|
|
созревание |
|
фермента, перемеши- |
сыворотки |
прессование, высу- |
|
|
|
вание, отстаивание |
|
шивание, созревание |
Производство соевого соуса |
|
|
|
|
|
Коджи |
|
|
Мороми |
Окончательная подготовка |
|
Соевая мука, пшеничные отруби, |
Добавление равного объема |
перед употреблением в пищу |
|||
|
|
||||
твердофазная ферментация |
солевого раствора; |
Фильтрация, |
|
||
с Aspergillus oryzae, |
|
длительное созревание |
пастеризация, |
|
|
72 ч, 35 °С, 90% влажности |
|
|
консервирование |
Традиционные продукты, получаемые путем ферментации в незападноевропейских странах
Продукт |
Страна |
Использование |
Сырье |
Микроорганизмы |
|
Коджи (Koji) |
Япония |
Предшественник |
Соя, пшеница, |
Aspergillus oryzae, |
|
|
|
соевого соуса и мисо |
распаренный рис |
Aspergillus sojae |
|
Шойю |
Япония |
Темные соусы |
Kоджи |
Pediococcus sp. |
|
(соевый соус) |
|
|
|
|
|
Мисо |
Япония |
Светлые соусы |
Коджи |
Aspergillus |
|
(соевая |
|
|
|
Молочнокислые бактерии |
|
паста) |
|
|
|
|
|
Тофу (Tofu), |
Япония, |
Коагулированный |
Соевые бобы, |
Mucor sufu и др. |
|
суфу (Sufu) |
Китай |
белок |
соевое молоко |
|
|
Натто |
Япония |
Острые соусы |
Распаренные в еловой |
Bacillus natto |
|
(Natto) |
|
|
хвое соевые бобы |
|
|
Темпех |
Индонезия |
Гарниры |
Вареные соевые бобы |
Rhizopus oligosporus |
|
(Tempeh) |
|
|
в банановых листьях |
|
|
Анг-как |
Индонезия, |
Приправы, пищевой |
Распаренный рис |
Monascus purpureus |
|
(Ang-kak) |
Китай |
краситель, в терапии |
|
|
|
|
|
желудочных расстройств |
|
|
|
Гари (Gari) |
Нигерия |
Гарниры |
Маниок |
Geotrichum, Corynebacterium |
17 |
|
|
|
|
|
Биотехнологическое производство пищевых продуктов
Пищевые продукты и молочнокислое брожение
ВВЕДЕНИЕ. История использования человеком процессов молочнокислого брожения молока (кисломолочные продукты), овощей (квашеная капуста) и кормов для скота (силос) насчитывает сотни, а для некоторых процессов и тысячи лет. Луи Пастер, впервые выделивший молочнокислые бактерии в 1856 г., заложил основы для понимания биохимии этого важного процесса. Продукты, получаемые в результате молочнокислого брожения, обладают хорошими вкусовыми качествами и долго хранятся, так как снижение pH, происходящее в процессе брожения, препятствует развитию других микроорганизмов.
МОЛОЧНОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ. Группа молочнокислых бактерий весьма гетерогенна по морфологии клеток, однако физиология ее представителей описана достаточно однозначно: все молочнокислые бактерии окрашиваются по методу Грама и являются облигатными аэробами, т. е. они не синтезируют гемсодержащие белки (каталазы), однако могут расти в присутствии кислорода. Молочнокислые бактерии расщепляют лактозу до глюкозы и галактозы, а затем превращают их в лактат. При «гомоферментативном» молочнокислом брожении (также называемом гликолизом), которое осуществляют Streptococcus pyogenes, Lactobacillus casei и Lactococcus lactis, из 1 моль глюкозы образуется 2 моль лактата, а при «гетероферментативном» брожении, осуществляемом Leuconostoc mesenteroides и Lactobacillus brevis, – только 1 моль лактата. От наличия лактатрацемазы в клетках бактерий зависит образуется ли L-(+)-молочная кислота (обычно выход 50–90%), D-(–)-молочная кислота или их рацемат. Физиологическую ценность кисломолочных продуктов трудно переоценить: в них нет лактозы и они содержат белки, уже подвергшиеся мягкому гидролизу.
КИСЛОМОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ. Среди кисломолочных продуктов в Европе наиболее распространены простокваша, сметана, йогурт, кефир и пахта (<1% жира). Эти продукты получаются при бактериальном заражении сырого молока в естественных условиях хранения. В йогурте содержание L-(+)-молочной кислоты более 95%. Этот продукт производят, используя Lactobacillus acidophilus или облигатно анаэробный штамм L. bifidus, обнаруженный в кишечной флоре грудных младенцев. Йогурты особенно хорошо усваиваются организмом и оказывают стимулирующее действие на иммунную систему.
В результате реакций, осуществляемых бактериальными протеазами и липазами, кисломолочные продукты приобретают своеобразный вкус. Наиболее важными микроорганизмами для производства молочных продуктов являются стрептококки, лактобактерии, Leuconostoc и дрожжи.
ЗАКВАШИВАНИЕ ОВОЩЕЙ И ОВОЩНЫХ СОКОВ.
ВГермании особой популярностью пользуются квашеная капуста и соленые огурцы (заготавливаются и реализуются через торговую сеть около 200 000 т в год). Для заквашивания обычно используют белокочанную капусту, которую помещают в бочки вместимостью до 100 т. Как правило, процесс брожения осуществляется разнообразными микроорганизмами (бактериями, дрожжами и грибами) в результате спонтанного заражения, однако в некоторых случаях брожение инициируют добавлением закваски (стартовых культур). В качестве других примеров использования в пищу овощей, подвергшихся молочнокислому брожению, можно привести квашеную свеклу (Польша и Россия) и кимчи (кислая китайская капуста или редька, Корея). Овощные соки, подвергшиеся ферментации молочнокислыми бактериями, особенно богаты витаминами и минеральными веществами, хорошо усваиваются организмом и хранятся продолжительное время (например, морковный и томатный соки).
ЗАКВАСКА. В отличие от пшеничной муки, используемой для приготовления дрожжевого теста, ржаная мука закисает при рН <4,3; это позволяет получать своеобразную корочку при выпекании хлеба из ржаной муки. В закваске для теста при рН 4,2 наряду с молочнокислыми бактериями содержатся дрожжи.
СИЛОСОВАНИЕ – распространенный способ заготовки сочных кормов, в частности, кормовой свеклы. Силосную культуру измельчают, а затем помещают в специальные хранилища с ограниченным доступом воздуха. В таких условиях осуществляется процесс молочнокислого брожения. Если молочная кислота образуется в недостаточных количествах, силос может оказаться зараженным маслянокислыми бактериями, в том числе представителями клостридий.
Вэтом случае бактерии могут попасть в молоко коров, которые питались зараженным силосом. Как правило, в силосе присутствует психотрофный патоген Listeria monocytоgenes, который в случае несоблюдения правил пастеризации может активно размножаться на пищевых продуктах (в мягких сырах, мясном фарше и зеленом салате) при длительном хранении в холодильнике.
18
Молочнокислое брожение |
|
|
|
|
|
|
|
Бактерии, осуществляющие |
|
Бактерии, осуществляющие |
|
|
|
||
гомоферментативное молочнокислое брожение |
гетероферментативное молочнокислое брожение |
||||||
Lactococcus lactis |
L. salivarius |
Leuconostoc mesenteroides |
|
|
|
||
Streptococcus pyogenes |
L. casei |
|
Leuconostoc lactis |
|
|
|
|
Lactobacillus delbrueckii |
и др. |
|
Lactobacillus brevis |
|
|
|
|
L. helveticus |
|
|
и др. |
|
|
|
|
Гомоферментативное |
|
Лактоза |
|
Гетероферментативное |
|
|
|
брожение |
|
|
|
брожение |
|
|
|
2 молекулы |
Гликолиз |
Глюкоза |
Пентозофосфатный путь |
Лактат |
Ацетат/этанол |
CO |
2 |
лактата |
|
C6 |
|
|
|
|
|
2 × C3 |
|
|
C3 |
C2 |
C1 |
||
Кислое тесто |
|
|
|
|
|
|
|
|
Пшеница |
Рожь |
Доля мировой территории, |
33 |
< 3 |
занятой под злаковые культуры (%) |
|
|
Основной тип теста |
Дрожжевое тесто |
Кислое тесто |
Вещество, удерживающее газы при выпекании |
Клейковина (глютен) |
Пентозан, белки после закисания теста |
Плотность хлеба (объем/масса) |
3,5 |
2,0 |
|
|
|
Исходная закваска 0,5 кг
|
6 ч, 27 °С |
Тесто быстрой закваски 3,4 кг |
|
|
|
|
|
Ржаная |
9 ч, 30 °С |
Тесто основной закваски 25,5 кг |
Вода |
|
|||
мука |
3 ч, 28 °С |
|
|
|
Тесто конечной закваски 81 кг |
|
|
|
|
|
Хлеб из кислого |
|
Опара, |
|
формовка, |
|
|
||
теста |
|
выпечка |
Квашеная капуста, йогурт и силос
Квашеная капуста |
|
|
|
|
|
Нарезанная |
|
2–2,5% |
белокочанная |
|
поваренной |
капуста |
|
соли |
Спонтанное закисание
Анаэробная ферментация в бочках объемом до 100 т, 18–20 °С
При концентрации молочной кислоты > 1,5% отфильтровывают, пастеризуют и готовят к продаже
Йогурт
Молоко
Гомогенизированное, пастеризованное; возможны добавки, например кусочки фруктов
Термостатный способ |
|
Резервуарный способ |
Добавление |
|
Заполнение больших |
стартовых культур*, |
|
резервуаров, добавле- |
расфасовка для |
|
ние стартовых культур*, |
продажи, инкубация, |
|
инкубация, охлаждение |
охлаждение до 4 °С |
|
до 4 °С, расфасовка |
|
|
для продажи |
|
|
|
*Например, Lactobacillus bulgaricus,
L. acidophilus, Streptococcus thermophilus
Кислое тесто 160 кг
Силос
Рост популяции бактерий и образование кислоты в процессе ферментации
|
|
|
|
|
|
|
2,0 |
|
|
108 |
|
|
|
|
|
|
|
Числоклеток |
|
|
|
|
|
|
1,6 |
Кислота,% |
107 |
|
|
|
|
|
0,8 |
||
|
|
|
|
|
|
1,2 |
|
|
|
106 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0,4 |
|
|
105 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
14 |
|
|
2 |
|
||||||
|
|
|
сут. |
|
|
|
|
|
|
Аэробные штаммы |
|
|
|
|
|
||
|
Гетероферментативные молочнокислые бактерии |
|||||||
|
Гомоферментативные молочнокислые бактерии |
|
||||||
|
Образование кислоты |
|
|
|
|
19 |
||
|
|
|
|
|
|
|
|