Список литературы

1. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. – 2 изд., перераб. и доп. – М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. – 832 с.: ил.

УДК 619:579.083.36

МОДИФИКАЦИЯ ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ТКАНЕВЫХ АНТИГЕНОВ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ТИТРА ЦИТОТОКСИНОВ В СЫВОРОТКЕ Бурков П.В.

ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»,

г. Троицк

Использование для терапевтических целей препаратов на основе цитоксических сывороток открывает широкие возможности для ветеринарных специалистов по профилактике и лечению заболеваний, связанных с патологией внутренних органов. К таким препаратам относят разработанные в Уральской ГАВМ «Геприм для кур» и «Геприм для свиней».

Препараты серии «геприм» содержат в своем составе антиспленотоксическую и антигепатотоксическую сыворотки. Сыворотки модифицированны таким образом, что они не способны оказывать токсический эффект на соответствующий орган, а терапевтическое действие их сохранено. При их производстве важным моментом является стандартизация полученных цитотоксических сывороток перед модификацией и определение их титра в готовых препаратах.

Получение тканевых антигенов при производстве «Геприм для кур» и «Геприм для свиней» направлено для решения двух задач:

1. Получение тканевого антигена для проведения гипериммунизации у животных-доноров крови;

2. Получение тканевого антигена для постановки реакции связывания комплемента при определении титра цитотоксинов в сыворотке и препаратах.

Получения антигена из тканей печени и селезенки проводится следующим образом. Кусочки селезенки и печени 5 раз отмываются от крови 10-кратным объемом изотонического раствор натрия хлорида. Кусочки измельчаются, растираются в ступке со стеклом и разводятся 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 10 минут при 3000 об./мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об./мин в течение 10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

По мнению И.М. Карпуть и др. (1987) такая техника приготовления антигена для гипериммунизации пригодна и для постановки реакции связывания комплемента. Однако, по нашим наблюдениям, после размораживания его и проведении главного опыта РСК тканевой антиген через 1-2 часа мутнеет, выпадает в осадок и искажает результаты. Поэтому в производство антигена мы внесли коррективы. Кусочки селезенки и печени 5 раз отмываются от крови 10-кратным объемом изотонического раствор натрия хлорида. Кусочки измельчаются, растираются в ступке со стеклом и разводятся 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 10 минут при 3000 об./мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об./мин в течение 10 минут. Затем осветленный антиген вновь пятикратно замораживается и оттаивается и центрифугируется при 8000 об./мин в течении 10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии. По нашим наблюдениям при такой последовательности действий тканевые антигены при размораживании не мутнеют на протяжении 24-48 часов (при хранении в холодильнике) и не вызывают искажения результатов при постановке реакции связывания комплемента.

Резюме

В статье приведена усовершенствованная методика получения тканевого антигена для реакции связывания антигена при определении титра цитотоксинов в сыворотке.