Список литературы

1. Азаубаева, Г.С. Картина крови у животных и птиц / Г.С. Азаубаева. - Курган: Зауралье, 2004. - 168 с.

2. Кириллов, Н.К. Здоровье и продуктивность животных / Н.К. Кириллов, Ф.П. Петрянкин, В.Г. Семенов. - Чебоксары, 2006. - 255 с.

3. Петрянкин, Ф.П. Влияние иммуностимуляторов на неспецифическую резистентность и иммуногенез животных на фоне иммунизации / Ф.П. Петрянкин, О.Ю. Петрова // Ветеринарный врач. - Казань, 2008. - №3. - С. 22-25.

4. Хаитов, Р.М. Иммунология: учеб. пособ. / - Г.А Игнатьева, И.Г. Сидорович Москва: Медицина, 2000. - 429c.

5. Дорожкин, В.И. Фармакологические и токсикологические свойства биокоординационных соединений: автореф. дис. д-ра биол. наук / В.И. Дорожкин. - Воронеж: 1998. - 45 с.

6. Федоров, Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. - 2005. - № 2. - С. 3-6.

7. Уельдатов, Р.Н. Иммуностимулирующие свойства крезацина / Р.Н. Уельдатов // Зоотехния. - 1999. - №11 - С. 26-27.

УДК 619:612.111.7.08:616.15

ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ НЕКОТОРЫХ МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗМЫ, ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ Пигарёва Ю.В., Широбокова Д.А.

ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»,

г. Саратов

Актуальность исследования. В настоящее время в мире остается актуальным вопрос регенерации и замещения дефектов различных тканей, в том числе и хрящевой. Для стимуляции регенеративных процессов в тканях разработано множество методик, таких как использование стволовых клеток, плазмы, обогащенной тромбоцитами и т.д. [1]

Однако, технологии получения стволовых клеток достаточно сложны, дорогостоящи, а результаты спорны. Лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами, является более простым и, относительно недорогим способом стимуляции регенеративных процессов. [3]

Этот метод уже несколько лет с успехом применяется в гуманитарной медицине как в России, так и за рубежом. Лечение плазмой, обогащенной тромбоцитами, используют в спортивной медицине, стоматологии, в травматологии и ортопедии, общей хирургии, и даже в косметологии (плазмолифтинг).[2, 3, 4]

Плазма, обогащенная тромбоцитами, представляет собой концентрат крови, содержащий тромбоциты, в количестве, превышающем исходное в 3-5 раз. Доказано, что ее стимулирующий эффект проявляется при концентрации тромбоцитов в ней, равном или более 1 000 000/мкл. При активации тромбоциты изменяют свою форму и выделяют специфические биологические факторы. Особый интерес представляют факторы роста, экскретируемые тромбоцитами: PDGF (фактор роста - синтезируемый тромбоцитами); TGF-J3 (бета-трансформирующий фактор роста); VEGF (фактор роста эндотелия сосудов); EGF (эпителиальный фактор роста); IGF (инсулино-подобный фактор роста). Вышеуказанные биологические агенты вызывают миграцию и пролиферацию мезенхимальных клеток-предшественников, стимулируют неоангиогенез и регенерацию не только твердых, но и мягких тканей. [1]

При введении такой плазмы в различные ткани, например, в костную, в ткани периодонта, под воздействием факторов роста происходит регенерация поврежденных тканей.

В ветеринарной медицине метод лечения плазмой, обогащенной тромбоцитами, пока нашел свое применение лишь в офтальмологии. [6,7] На наш взгляд, данный метод является очень перспективным, и мог бы с успехом применяться в ветеринарной медицине для ускорения репаративных процессов различных тканей (костная, хрящевая, мягкие ткани и т.д.). Но для успешного внедрения этого метода лечения необходимо определить наиболее приемлемый и простой метод получения такой плазмы, технологию лечения и показания.

В современной литературе существует достаточно протоколов, описывающих методы получения плазмы, обогащенной тромбоцитами. Некоторые из них требуют определенных расходных материалов или оборудования (пробирки, центрифуги, антикоагулянты и т. д.). [5] Некоторые, наоборот, являются более простыми. Но концентрация тромбоцитов при различных способах получения различается.

В связи с этим целью данной работы является сравнительный анализ эффективности нескольких доступных методов получения плазмы, обогащенной тромбоцитами.

Задачи:

1. определить наиболее простой способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами;

2. выявить концентрацию тромбоцитов в микролитре крови при каждом методе получения.

Материалы и методы исследования. Материалом для исследования послужили пробы крови от собак (n=24), которые отбирались от здоровых животных (собак) с соблюдением правил асептики и антисептики в пробирки. Пробирки затем центрифугировались на лабораторной центрифуге в соответствии с методиками, описанными ниже. Количество тромбоцитов в нижнем слое плазмы крови определялось на полуавтоматическом гематологическом анализаторе Mindray ВС-2300, на автоматическом гематологическом анализаторе Abacus Junior 5 Vet, а также по стандартной методике в камере Горяева. [8]

Нами было выбрано три наиболее простых, на наш взгляд метода получения плазмы, обогащенной тромбоцитами.Для каждого метода отбирали кровь от 8 собак.

Согласно первой методике кровь отбирается в количестве 6 мл в пробирки, содержащие в качестве антикоагулянта цитрат натрия. В последующем данные пробирки центрифугируются при ускорении 2000 G 20 минут. При этом происходит разделение крови на три слоя: первый (нижний)-эритроцитарная масса, второй (средний) – лейкотромбиновый слой, и третий- плазма, бедная тромбоцитами. Два верхних слоя отбирают и используют для лечения. [62]

Согласно второму способу, кровь в количестве 20 мл. перемешивают с цитратом натрия в соотношении 9:1 и центрифугируют в два этапа: первый этап при ускорении 1300 G 10 минут, второй – центрифугирование отделенной от эритроцитов и лейкоцитов плазмы при ускорении 4000 G 10 минут. После второго центрифугирования из пробирки удаляют верхний слой плазмы, бедной эритроцитами, а нижний слой используют. [1]

Суть третьего способа состоит в том, что кровь отбирается с специальные пробирки, содержащие специальный разделительный гель и антикоагулянт- гепарин лития. Благодаря наличию разделительного геля достигается более высокая степень очистки плазмы от эритроцитарной массы. Кровь, отобранная в данные пробирки центрифугируется при ускорении 3,5 G 10 минут. [7]

Обсуждение результатов собственных исследований.

В таблице приведены данные содержания тромбоцитов в плазме, подсчитанные на гематологических анализаторах и в камере Горяева.

Таблица 1. Среднее количество тромбоцитов в 1 мкл крови при различных методах исследования (n=24, М±m)

Метод	Количество тромбоцитов, подсчитанных на гематологическом анализаторе Abacus Junior 5 Vet,10*6/мкл	Количество тромбоцитов, подсчитанных на гематологическом анализаторе Mindray BC-2300, 10*6/мкл	Количество тромбоцитов, подсчитанных в камере Горяева, 10*6/мкл
1	0,81±0,02	0,78±0,02	1,03±0,09
2	0,95±0,1	0,89±0,06	1,15±0,13
3	0,89±0,05	0,82±0,04	1,08±0,07

Согласно данным этой таблицы, второй метод является наиболее оптимальным для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, так как при данном способе наблюдается максимальное количество тромбоцитов в микролитре крови.

Выводы. Для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами второй метод, хоть и не является самым простым в исполнении, но обеспечивает более высокую концентрацию тромбоцитов, что необходимо для достижения наилучшего лечебного эффекта.

Резюме

Метод стимуляции регенеративных процессов с помощью плазмы, обогащенной тромбоцитами, более 20 лет, и с успехом применяется в гуманитарной медицине, в частности, в стоматологии, хирургии, травматологии и т.д. В ветеринарной медицине данный метод не нашел пока большого применения, отчасти ввиду сложности методов получения плазмы, концентрацией тромбоцитов более 1 млн в мкл. При сравнительном анализе некоторых из них установлено, что метод получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, путем двухэтапного центрифугирования при 1300 G и 4000 G позволяет получить наибольшую концентрации тромбоцитов в микролитре крови по сравнению с другими способами.