Лабораторна робота № 6.1. Розділення нейтральних хелатів (комплексів металівіз органічним лігандом) методом тшх.

Мета роботи: ознайомитись із прийомами ТШХ на прикладі розділення 1‑(2‑піридилазо)‑2‑нафтола (ПАН) та його комплексів із Cu (II), Ni (II), Co (II) та Fe (II).

1. Реактиви й обладнання

ПАН, спиртовий розчин із масовою часткою (ПАН) = 0,01 %.

Розчини з с(Ме (ІІ)) = 1  10^‑4 моль/л солей Cu (II), Ni (II), Co (II) та Fe (II).

Буферний розчин із рН = 3,5-4.

Хлороформ; ацетон (або етанол, толуол).

Ділильні лійки, піпетки місткістю 10 мл та 1 мл (останні – з поділками), вимірювальні циліндри місткістю  10 мл, хроматографічні пластинки, капіляри, камера для хроматографування (звичайно хімічна склянка з кришкою з листового скла).

2. Одержання екстрактів комплексів

У ділильну лійку місткістю  100 мл уведіть піпеткою 10 мл розчину солі відповідного металу, додайте піпеткою 0,5 мл спиртового розчину ПАН та циліндром 10 мл буферного розчину. Через 5 хв вимірним циліндром додайте 10 мл хлороформу й екстрагуйте утворені комплекси, ретельно перемішавши вміст лійки та відокремивши органічну фазу у пробірку.

3. Хроматографування

На хроматографічній пластинці, відступивши від її нижнього боку на 2 см, олівцем (за лінійкою) проведіть стартову лінію. На цю лінію, на відстані 0,5-1 см одне від одного, нанесіть відібрані у капіляри краплі хлороформних екстрактів комплексів та екстракту об’єкта розчином ПАН’у. Плями від крапель підсушіть, опустіть нижній край хроматографічної пластинки в розчинник – елюент (суміш ацетон – хлороформ у об’ємному відношенні 1:10, або краще етанол ‑толуол у об’ємному відношенні 3:7), що налитий тонким шаром у камеру для хроматографування, й зразу закривають камеру кришкою.

Камеру з сумішшю розчинників готують заздалегідь. Щоб уникнути зміни концентрацій складових цієї суміші на хроматографічній пластинці, спричиненій випаровуванням елюенту, повітря у камері попередньо насичують цими випарами. Зазвичай у елюент занурюють аркушик фільтрувального паперу, що збільшує поверхню випаровування й цим пришвидшує встановлення рівноваги між рідиною та її випарами. Камеру постійно закривають кришкою, знімаючи останню лише на мить, щоб внести пластинку у камеру.

Коли межа між мокрою та сухою частиною пластинки (так званий фронт) досягне відстані  1 см від верхнього краю пластинки, процес припиніть, вийнявши пластинку з камери. Помітьте місце цієї межі й висушіть пластинку. Виміряйте лінійкою, на якій відстані від стартової лінії розташовані плями від компонентів, що розділені хроматографічно, і на якій відстані розташовано фронт елюенту. Порівнюючи значення R_f для стандартів та компонентів об’єкта, встановіть якісний склад останнього.

Лабораторна робота № 6.2. Розділення амінокислот методом тшх.

Мета роботи: ознайомитись з прийомами ТШХ на прикладі розділення амінокислот – аланіна, гістидина, глутамінової кислоти.

1. Реактиви й обладнання

Розчини з масовими концентраціями амінокислот,  = 10^‑3 г /л.

Розчин нінгідрину (в етанолі або у суміші розчину оцтової кислоти, із масовою часткою  = 120 г/л, та н‑бутанолу, співвідношення об’ємів розчинників 1:19 ), із масовою часткою нінгідрину  = 0,2 %.

Льодяна оцтова кислота, бутанол.

Ділильні лійки, піпетки місткістю 10 мл та 1 мл (останні – з поділками), вимірювальні циліндри місткістю  10 мл, хроматографічні пластинки, капіляри, камера для хроматографування (хімічна склянка з кришкою з листового скла).