1. Гемагглютинин

Как уже было указано, поверхностный «шип» гемагглютинина формируется из субъединиц гликопротеида с молекулярной массой приблизительно 75 000—80 000. Гликопротеид может находиться либо в виде одной полипептидной цепи II А, либо в виде комплекса продуктов ее протеолитического расщепления — HAi и НА2, которые продолжают удерживаться рядом друг с другом за счет наличия между ними дисульфидиых мостиков.

В исследованиях с использованием для разрушения вирионов эфира было показано, что из вируса может быть изолирован компонент, обладающий гемагглютинирующей активностью (Hoyle, 1952; Scharer, Zillig, 1954) и что при негативном контрастировании субъединиц гемагглютинина наблюдаются розеткоподобные структуры диаметром 30—40 нм, в которых частицы, идентичные присутствующим на поверхности вириона, располагаются радиально (Hoyle et al., 1961; Choppin, Stoeckenius, 1964). Laver и Valentine (1969) изолировали поверхностные «шипы», используя штамм, в котором гемагглютинин был устойчив к обработке додецилсульфатом натрия (SDS). Эти структуры имели диаметр около 4 нм и длину 14 нм. После удаления SDS структуры агрегировали идентичными концами, что указывает на гидрофобный характер этих областей поверхностных «шипов». Основываясь на размерах «шипов» гемагглютинина, определенных по электронно-микроскопическим снимкам, Laver и Valentine (1969) установили, что их молекулярная масса должна быть не менее 150 000. После того как стало ясно, что поверхностные «шипы» формируются из белковых молекул с молекулярной массой 75 000—80 000, было предположено, что две такие белковые молекулы (представляющие собой комплекс HAi и НА2) образуют «шип» гемагглютинина (Laver, 1971; Stanley, Haslam, 1971; Skehel, Schild, 1971). Позднее с помощью седиментационных методов (Brand, Skehel, 1972) было выяснено, что молекулярная масса «шипов» гемагглютинина равна 215 000, а их изучение с помощью метода электронной микроскопии показало, что они имеют треугольную форму, если смотреть в торец выступа (Laver, 1973; Griffith, 1975). В связи с этим был сделан вывод, что каждый «шип» гемагглютинина является тримером, состоящим из трех НА-полипептидов, каждый из которых является комплексом HAi + + НА2.

Гидрофобное свойство основания «шипа» гемагглютинина указывает на то, что именно эта область определяет его связь с вирусной мембраной (Laver, Valentine, 1969). Впоследствие было показано, что после обработки протеазой можно получить вирусные частицы, сохраняющие в своем составе полипептид НА2, но не обладающие гемагглютинирующей активностью и не содержащие различимых поверхностных «шипов» (Compans et al., 1970а). Это доказывает, что именно НА2— часть молекулы НА —отвечает за связь «шипа» с поверхностью вириона. Это согласуется с выводом Brand и Skehel (1972) о том, что «шипы» гемагглютинина могут быть солю-билизированы с помощью протеазы и при этом они теряют только небольшую часть лолипептида НА2. Такие частицы неспособны ж агрегации и могут быть кристаллизованы. Таким образом, приведенные факты ясно показали, что НА2 — часть гликопротеида НА —содержит гидрофобную область и отвечает за связь «шипа» гемагглютинина с мембраной. Детали механизма взаимодействия «шипа» с вирусной мембраной еще не совсем ясны. Однако уже сейчас можно утверждать, что, как будет подробно обсуждено далее, липиды вирусной мембраны сгруппированы в двойной слой и лишь небольшая часть «шипа» гемагглютинина проникает в этот слой. Именно поэтому небольшой по молекулярной массе пептид, содержащий большое число гидрофобных аминокислотных остатков, вероятно, остается в составе вирусной частицы после ее обработки протеазой (Compans, неопублико-занные данные). Протеаза лишь незначительно изменяет структуру липидного двойного слоя и, вероятно, эта структура стабилизируется в большей степени липид-липидным взаимодействием, чем связью между глшдапротеидными и ляпид-ными молекулами (Compans et al., 1970a; Landsberger et al 1971, 1973).