1. Внутриклеточная локализация вкРнк

Было показано, что РНК, комплементарная вРНК, ассоциирована в инфицированных клетках с полисомами (Pons, 1972). Установлено (см. раздел Va, 1), что 10% внутриклеточ-

ной вирусспецифичеокой РНК, изолируемой в виде РНП, представляет собой вкРНК. Однако после фракционирования клеток было обнаружено, что большая часть вирусспецифи-ческой РНК, ассоциированной с лолиоомами, была представлена вкРНК (Pons, 1972). Недавно Etkind и Krug (1974) сообщили, что вся полиеомная РНК представляет собой вкРНК. Этот вывод не согласуется с нашими данными, поскольку в нашей работе мы вынуждены были использовать коррекцию для учета вклада РНК клетки-хозяина. Etkind м Krug (1974) провели тщательное удаление всех контамини-рующих РНК клетки. По-видимому, вирус гриппа .подобен другим вирусам, содержащим в составе своих вирионов РНК-зависимую PiHK-лолимеразу (например, вирус везикулярного стоматита), и в связи с этим способен к синтезу функциональной информационной РНК через короткое время после начала инфекционного процесса.

Другого рода экспериментальный подход позволил полу

чить данные, интерпретация (Которых может привести к за

ключению о том, что природа информационной РНК отлична

от той, о которой говорилось ранее. Эти данные крайне про

тиворечивы н в настоящее время могут рассматриваться

лишь как предварительные. Siegert и соавт. (1973) сообщили

о синтезе полипептида NP в Е. coli бесклеточной белоксинте-

зирующей системе при использовании в качестве информа

ционной РНК 'вРНК. Kingsbury и Webster (1973) получили

прямо противоположные результаты, обнаружив, что вРНК

не может выступать в качестве информационной в бесклеточ

ной системе ретикулоцитов кролика. (В то же время, по их

данным, РНК, изолированная из инфицированных клеток

(смесь вРНК и вкРНК), выступала как иРНК, и ее присутст

вие в системе приводило к синтезу М-белка. На основе этих

прямо противоположных результатов трудно выработать (ком

промиссную точку зрения, однако, учитывая предварительный

характер сообщений, до появления результатов, подтвержда

ющих тот или иной результат, можно с осторожностью пред

положить, что один из фрагментов вРНК -может выступать

в качестве информационной РНК. Данные по самогибриди

зации, полученные Etkind и Krug (1974), а также Pons

(1972), исключают наличие 'больше чем одного фрагмента

вРНК, служащего матрицей как в транскрипции, так и в

трансляции.

2. Кинетика синтеза вкРнк

Работы по изучению синтеза РНП и днРНК, описанные

ранее, показали, что синтез вкРНК начинается очень скоро

*после начала инфекции. Более объективное изучение синтеза

именно этого типа РНК может быть проведено путем иссле-

давания появления вкРНК на полисомах. Клеши метят в течение короткого интервала пульсовой меткой [3Н]-уридином в различные моменты после начала инфекции, и полисомы выделяют и анализируют .после экстракции с помощью смеси фенолхлороформ— SDS. Полученные результаты показали, что после начального периода угнетения формирования полисом клеток-хозяев синтез вкРНК непрерывно растет. Основное количество вкРНК синтезируется через 2'/г—3 ч после начала инфекции, после чего скорость ее синтеза снижается (Pons, в печати). Аналогичные данные привели Krug и Et-kind (1973), изучавшие синтез РНК :в цитоплазме и ядрах инфицированных клеток. Эти авторы показали, что синтез вкРНК заканчивается через 4 ч после начала инфекции. Таким образом, приведенные данные указывают на то, что синтез вкРНК начинается сразу же после начала инфекции и заканчивается через 4 ч. Спустя это время вновь синтезированные вирусные частицы обнаруживаются вне клетки. Природа такого «отсекающего» механизма в настоящее время неизвестна.