1. Продуктивная инфекция

Репликативный цикл вирусов гриппа детально описан

в гл. 8. За введением вируса <в 'культуру чувствительных кле

ток следует период «затмения» ^продолжительностью прибли

зительно 2 ч, в течение которого не обнаруживается каких-

либо 'биологических или серологических проявлений синтеза

вирусных белков. В течение этого периода идет синтез вирус-

специфических яолипептидов, :в том числе вирусслецифиче-

оких 'компонентов, которые не инкорпорируются в вирион.

Приблизительно через 2 ч после заражения в клетках можно

обнаружить антиген нуклешротеида (NP). Количество этого

компонента достигает максимума к 5—6-му часу после зара

жения. Присутствие гемагглютинина или поверхностных ан

тигенов в экстрактах клеток обнаруживается через 3 ч после

заражения. Почкующийся вирус может быть обнаружен на

оболочках клеток спустя приблизительно 5'/г ч после зара

жения. Вскоре после этого, примерно через 6 ч после зара

жения, начинается выход вируса в среду, и инфекционный

вирус' достигает максимальной .концентрации в среде через

7—8 ч после заражения

При заражении (вирусом гриппа человека различных первичных (культур клеток, полученных из тканей птиц или млекопитающих, в них (происходит продуктивный цикл. Перечень, этих культур можно найти у Hoyle (1968). Для того чтобы не повторять этот перечень, мы постараемся суммировать, наиболее существенные^ достижения, полученные рядом исследователей «а протяжении более 20 лет экспериментальной; работы.

Эпителиоидные клетки являются наиболее чувствительной, системой для культивирования in vitro обширного ряда штаммов вируса гриппа А и В. Чаще других используют для этих, целей почки плода человека (Mogabgab et al., 1954), макак резусов или зеленых мартышек (Mogabgab et al., 1961), почки телят (Haas, Wulff, 1957; Lehmann-Grube, 1965), свиней. (Lehmann-Grube, 1964), а также хомяков (Heath, Tyrrell,. 1959)'. Из них чаще используют первичные клетки почек, обезьян, человека и телят. Обычно предпочитают почки обезьян, что обусловлено скоростью «х роста и удобством в. обращении.

Не все культуры элителиоидных клеток пермиссивны для вируса (гриппа. Первичные диплоидные и гетероплоидные клетки человеческого амниона, так же как и другие (гетероплоидные эпителиальные клетки, обычно нечувствительны к нему. К гетероплоидным клеткам относятся такие линии, ясак HeLa, KB, клетки конъюнктивы (Green et al., 1957), а также MAF и клетки сердца и кишечника человека (Wong, Kilbour-ne, 1961).

Культуры эпителиощдных клеток, полученные из органов,, обладают более однородной чувствительностью к вирусам гриппа, чем культуры, полученные из органов эмбриона. По нашим данным, культуры клеток, приготовленные из почек, мертворожденных (Младенцев, столь же чувствительны к вирусам гриппа, как культура клеток почек обезьян, а культуры клеток эмбриональных почек человека менее чувствительны. Существенной проблемой при использовании эмбриональных почек человека является разница в чувствительности между различными партиями клеток. Почки обычно получают от эмбрионов разного возраста, условия их получения тоже варьируют, в результате чего сильно (колеблется процент жизнеспособных клеток. Эти факторы приводят к большому разнообразию в соотношении между эпителиоидными и фиб--робластоиодобными клетками в культурах почки эмбриона, человека. Это в свою очередь может привести к значительным вариациям в чувствительности к вирусам. Эпителиоидные клетки в отличие от фибробластоидных поддерживают репликацию вируса. Аналогичные данные отлучены в отношении клеток почек свиней. Культуры, полученные из почек взрослых свиней, состоят в основном из эпителиоидных «леток, которые поддерживают репликацию вируса гриппа. Культуры, полученные из эмбриональных почек, почти полностью представлены фиброблаетами и практически нечувствительны к вирусу (Lehmann-Grube, 1964). Эта закономерность имеет место у многих видов.

Чувствительность эпителиоидных клеток к гриппозной инфекции снижается при субкультивировании. В некоторых случаях, например при использовании «леток почки эмбриона человека, субпаосаж способствует пролиферации фибро-бластов, нечувствительных к вирусу. В других случаях, например при использовании почек обезьян (Dowdle, неопубликованные данные) и теленка (Lehmann-Grube, 1964), культуры клеток сохраняют свои эпителиоидные свойства при многочисленных пассажах, но спектр их чувствительности к вирусам меняется уже при первом субкультивировании. Ди-плоидность эпителиоидных (клеток сама по себе еще не определяет чувствительность к вирусам.

Некоторые вирусы могут размножаться или приобретать способность к размножению после адаптации в фиброблаетах или в гетероплоидных линиях клеток, но таких штаммов мало. Штамм NWS вируса гриппа A (iHONl) уникален по широте клеточного спектра; он может размножаться в гетероплоидных эпителиальных клетках (Wong, Kilbourne, 1961), в фибробластах (Kilbourne et al., 1964) и IB MDBK, гетеро-плоидной линии клеток бычьей почки (Choppin, 1969). Вирус гриппа В тоже способен размножаться в гетероплоидной линии, полученной из почек собак (Green, 1962).

Специфичность в отношении клетки-хозяина не всегда удается предсказать. Вирусы гриппа свиней не размножаются в культуре клеток почки человека (Hinz, Syverton, 1959), но вирусы гриппа человека хорошо размножаются в клетках почек свиней (Lehmann-Grube, 1964). Культура клеток почек обезьян нечувствительна к вирусам гриппа лошадей (Heq2Neq2) при заражении непосредственно клиническим материалом, но те же вирусы размножаются в клетках почки обезьян после одного пассажа на куриных эмбрионах (Dowdle et al., 1963).

Недостаточно полное устранение сывороточных компонентов перед инокуляцией вируса является одной из главных лричин выделения вируса в малом проценте случаев и получения низких инфекционных титров в чувствительных культурах клеток. Компоненты сыворотки, представляющие собой необходимую составную часть среды для роста клеток, могут неспецифически нейтрализовать вирус. Это в наибольшей

степени касается вирусов, выделенных после 1957 г. Ингиби-рующее действие сыворотки может быть устранено посредством двукратной или многократной отмывки клеток средой, .не содержащей сыворотки.