2. Антигенные свойства гликопептида hAt

Поскольку (гликопептид HAi гемагглютинина ориентирован так, что находится в водной фазе, окружающей вирион, можно ожидать, что именно он должен содержать область (или области), которая взаимодействует с эритроцитами, клетками-хозяевами, растворимыми ингибиторами и антителами. Информация об этом в настоящее время еще недостаточна. Однако из штамма PR8 (НОШ) был изолирован ге-магглютининсвязывающий антиген (НАВА), вероятно, представляющий собой димер гликопептида HAi (Eckert, 1966, 1969, 1973). Это молекулярное образование не обладало ге-малглютинирующими свойствами, но реагировало с антителами, специфичными для вирусного гемагглютинина. При обработке детергентом и дитиотриэтолом антиген диссоциировал на фрагменты с молекулярной массой около 40 000. Антиген количественно удалял HI-антитела из иммунной сыворотки, приготовленной против целого вируса. Он, кроме того, индуцировал образование HI- и нейтрализующих антител. Состав аминокислот ,НАВА сходен с таковым гликопептида НАЬ выделенного из штамма АО/Bel. Однако, как уже указывалось, HAi и НА2, выделенные из штамма Bel, сходны по составу аминокислот (исключая содержание .пролина), и их отличие может быть выяснено только с помощью методов определения последовательности аминокислот.

Эксперименты, проведенные Brand и Skehel (1972), также указывают, что HAi может содержать антигенные детерминанты, индуцирующие образование специфических против гемагглютинина антител. Полученный с помощью обработки бромелайном кристаллический гематглютинин давал одну полосу преципитации с антисывороткой против целого вируса или против HAj. Линия преципитации в реакции с антисывороткой против НА2 'наблюдалась только после добавления -к кристаллическому сгемагглютинину восстанавливающих агентов. Эти факты указывают на то, что функциональный антигенный центр интактного гемагглютинина локализован на гликопептиде НАЬ а дополнительный центр, расположенный на НА2, обнажается только после диссоциации HAi и НА2. Однако недавно было обнаружено, что каждая субъединица гемагглютинина содержит несколько антигенных детерминантов и что один из них теряется при выделении гемагглютинина с помощью обработки бромелайном (Laver et al., 1974; см. также гл. 10). Некоторые антигенные центры, вероятно, локализованы полностью на НАЬ в то время как другие могут частично или полностью включать участки гликопептида НА2. Воздействие расщепления субъединицы НА на антигенную активность этих центров еще предстоит изучить.

Субъединицы НА, изолированные из разрушенного с помощью детергента вируса, обладают гидрофобными свойствами. Например, удаление детергента из препарата разрушенного вируса приводит к образованию больших по размерам агрегатов, обладающих гематглютинирующей активностью. Вероятно, за эту способность субъединицы НА и агрегации ответствен гликопептид НА2. После отделения от HAi с помощью детергентов и восстанавливающих агентов молекулы НА2 образуют агрегаты даже в присутствии гуани-дингидрохлорида и дитиотриэтола (Laver, 1971). Однако субъединицы НА, экстрагированные из вирусной частицы с помощью бромелайна, не агрегируют (Laver, 1973). Такие субъединицы не обладают способностью агглютинировать эритроциты, но реагируют с антисывороткой против гемагглютинина, « выделенного из того же штамма с помощью SDS. Субъединицы содержат гликопептид НА2, молекулярная масса которого на 5000 меньше молекулярной массы аналогичного гликопептида, полученного из гемагглютинина при разрушении вируса с помощью детергента. Таким образом, при обработке бромелайном, вероятно, от НА2 отщепляется гидрофобная область, ответственная за способность субъединиц НА агрегировать в растворе.

Ранее Laver (1973) установил, что аминокислоты, включенные в гидрофобную область НА2, должны быть локализованы на одном (или обоих) конце молекулы, поскольку удаление этой области не приводит к деградации НА2 до фрагментов с малой молекулярной массой.

Совсем недавно Skehel и Waterfield (1975) показали, что обычный :и модифицированный с помощью брамелайна НА2 имеет идентичную последовательность аминокислот на N-KOH-це молекулы. Поэтому аминокислоты, отщепляемые броме-лайном, должны локализоваться на С-конце полипептида НА2. Эта часть НА2 длиной около 50 аминокислотных остатков содержит около половины всех остатков серина, входящих в эту молекулу. Считается, что приблизительно 21 аминокислотный остаток из 50 обладает гидрофобными свойствами.