3. Продукция интерферона при заболевании

При поражении добровольцев вирусами гриппа в секрете слизистой оболочки дыхательного тракта и в сыворотке появляется интерферон. Результаты определения (Jao et al., 1970) интерферона в смывах из полости носа после заражения добровольцев вирусам гриппа А/Бетезда/10/63 (H2N2) показаны на 65. У 8 мужчин из 15, оказавшихся инфицированными после введения вируса, определялось значительное количество интерферона IB смывах из полости носа, и у восьми он был обнаружен в сыворотке. Всего интерферон обнаружили у 10 добровольцев, у шести он находился и в сыворотке, и в смывах. У 9 добровольцев из 10, у которых интерферон был обнаружен в секрете слизистой оболочки носа, имела место клиническая картина 'болезни, и в 4 раза повысилось содержание нейтрализующих антител в сыворотке. Как видно из 65, появление вируса отмечалось на 1—2 дня раньше, чем (появление интерферона в секрете из полости носа и сыворотке. Определение вируса четко коррелировало с клинической картиной 'болезни. Продолжительность выделения больными вируса 'после того, как уровень интерферона достигал максимальных титров, была различной, но у некоторых добровольцев оно отмечалось и в период нарастания и после исчезновения интерферона. Особенно интересным является затухание (клинических симптомов после того, как титры интерферона достигали максимума. По-видимому, интерферон активно участвует в процессе выздоровления, особенно обратного развития симптомов между 3-м и 6-м днем, еще до того, как в сыворотке появляются антитела. Подъем специфических антител в сыворотке коррелирует с довольно резко выраженным вторичным обратным развитием симптомов, и прекращением выделения вируса и секреции интерферона, которое имеет место на 2-й неделе заболевания. Alurphy и соавт. (1973b) также определили интерферон в смывах из полости носа у 6 добровольцев из 7, экспериментально зараженных вирусом А/Бетезда/68 (H3N2). Индивидуально максимальные титры интерферона в смывах из полости носа составляли 6000 ед./мл, а максимальный средний геометрический титр — 30 ед. на 3-й день. Если фактор разведения в смывах из полости носа считать равным 1:10, то максимальный титр индуцированного интерферона следует считать равным 60 000 ед. Титры интерферона оставались повышенными в течение 6 дней, после чего на 7-й и 8-й день, он был обнаружен только у 2 лиц из 7. Отмечалась статистически достоверная корреляция между максимальным количеством выделенного вируса и максимальным титром интерферона в смыве из полости носа. Таким образом, хотя совпадение во времени между появлением интерферона и выздоровлением вполне очевидно, следует иметь в виду, что количество интерферона прямо пропорционально степени репликации вируса и тяжести заболевания.

И. ПРОДУКЦИЯ АНТИТЕЛ

Антитела, выявляемые с помощью РТГА, РСК и реакции ТГАН, появляются в сыворотке экспериментально зараженных добровольцев и впервые обнаруживаются обычно на 2-й неделе после инокуляции вируса. Подробно вопрос об антителах и способах их обнаружения обсужден в гл. 11 и 12. В настоящей главе будет рассмотрен лишь вопрос о накоплении и функции этих антител у зараженных добровольцев. Как показано на 66, у некоторых добровольцев отмечается достоверно определяемый подъем титра антител уже через 7 дней после заражения. РТГАН-антитела обычно достигают (максимальных титров приблизительно к концу 2-й недели после инокуляции вируса; их уровень поднимается лишь немного ,в последующий период. Как уже обсуждалось, появление антител в сыворотке коррелирует с исчезновением затяжных симптомов гриппа. Антитела, определяемые с помощью РТГА, РОК и реакции торможения активности NA, появляются параллельно с антителами, определяемыми с помощью РТГАН (67).

Роль антител в защите от инфекции обсуждается в гл. 12. Недавно Murphy и соавт. (1972b) показали наличие связи между анти-ЫА-антителами и защитой от экспериментально вызванного заболевания гриппом А/Гонконг/68 (H3N2). Как показано в табл. 49, у 6 добровольцев, не заболевших после введения им вируса, титры a'HTH-NA-антител были значительно выше, чем у заболевших. Кроме того, средняя продолжительность периода выделения вируса была значительно выше у добровольцев, у которых анти-ЫА-антитела отсутствовали. Как показано в табл. 50, отмечается статистически достоверное обратное соотношение между уровнем aHTH-NA-антител в сыворотке и тяжестью клинической картины.

Характеристика продукции антител, обнаруживаемых в секрете слизистой оболочки носа, представлена на 68. Вполне очевидно, что увеличение РТГАН-'Знтител в секрете из полости носа параллельно их накоплению в сыворотке. Близкие максимальные титры наблюдаются к 14-му дню после инокуляции вируса, затем несколько повышаются средние титры. Антитела появляются также в слюне и мокроте. Mann и соавт. (1968) сообщили, что изменения титра антител в течение 4 нед были сходными как в мокроте, так и в смывах из полости носа. Как оказалось, при центрифугировании смывов из полости носа, обладающих нейтрализующей активностью, в градиентах плотности сахарозы, антитела в секрете представлены в основном 11S иммуноглобулином А при сравнительном изучении показали, что антитела в мокроте, слюне и смывах из полости носа, собранных у зараженных добровольцев, связаны прежде всего с IgA и что в мокроте и смывах из носа концентрации антител сходны, если рассчитать их относительно одной и той же концентрации IgA. В слюне, однако, уровень антител ниже.

Помимо этого, имеют место (69) изменения количества секреторного IgA (Rossen et al., 1970). При заболевании увеличивается содержание IgA в секрете из полости носа, что не сопровождается подъемом ТГ АН-антител в смывах из полости носа. Подъем титров ТГАН-антител в смывах предшествует, а затем идет параллельно второму подъему концентрации IgA в смывах из полости носа через 3—4 нед после инокуляции вируса. Как только титр антител в смывах из полости носа снижается, содержание IgA возвращается к уровню, существовавшему до болезни.

Rossen и соавт. (il970) сравнили частоту проявления активности ТГАН у 4 зараженных добровольцев, имеющих высокий исходный уровень концентрации IgA в секрете слизистой оболочки носа, и у 4 добровольцев с низким исходным уровнем концентрации IgA. У первых 4 добровольцев нейтрализующая активность появлялась на 7 дней раньше, и ни у одного из них не развилось заболевание, а из 4 добровольцев с низким исходным уровнем IgA заболевание развилось у трех. Таким образом, исходный уровень IgA в секрете слизистой оболочки дыхательного тракта, возможно, является важным определяющим моментом в картине заболевания.

Относительное содержание антител в отделяемом из верхних дыхательных путей и в сыворотке в известной «мере зависит от пути заражения. В исследованиях относительно образования антител Kasel и соавт. (1969) показали, что у добровольцев антитела в секрете слизистых оболочек дыхательных путей наблюдались чаще и достигали более высокого уровня, если инактивированную (гриппозную вакцину вводили интраназально, а не подкожно. Наоборот, антитела в сыворотке появлялись чаще и достигали более высоких титров после введения инактивированного вируса под кожу, чем после введения его в носоглотку. Однако различия в количестве антител в сыворотке и секрете слизистых оболочек, по-видимому, определяются и тем, является ли контакт данного лица с вирусом первичным или повторным (табл. 51). У добровольцев, впервые контактировавших с вирусом А/Гонконг/68 (H3N2), обнаруживается больше антител в сыворотке, чем в смывах из полости носа независимо от пути заражения. Наоборот, у лиц, повторно контактирующих с вирусом гриппа А/64 (H2N2), уровень антител в сыворотке и смывах из полости носа зависел от пути заражения. Эти данные были сходны с результатами Waldman и соавт. (1969), показавших, что введение гриппозной вакцины в аэрозоле защищает от реинфекций.

Имеется много данных в пользу защитной роли секреторных антител в дыхательных путях. Данные, полученные в опытах на добровольцах, указывают на важную роль как сывороточных, так и секреторных антител, и до сих пор не удалось полностью разобщить их аффект. Couch и соавт. (1969b) провели исследования на добровольцах, вакцинированных подкожным или интраназальным путем. Равное число добровольцев в каждой группе продуцировали антитела как в сыворотке, так и в секрете слизистых оболочек (табл. 62). При введении 3000 ТКИД50 вируса гриппа А/Гонконг/68 (H3N2) через 1 шее после вакцинации обе группы вакцинированных выделяли вирус одинаково (табл. 53). Однако если сравнивать с контрольной группой только тех добровольцев, у которых продуцировались антитела, то можно видеть, что инфекция реже развивалась в обеих группах вакцинированных, особенно у тех, кому вакцину вводили интраназально. Заболели только те из добровольцев, от которых 'было получено три или более изолятов. и лишь у одного из них антитела образовались после вакцинации. Отношение титра антител к развитию инфекции показано в табл. 54. Заражение имело место при любом уровне антител, хотя частота его была значительно выше у тех лиц, у которых антитела в сыворотке отсутствовали. Подобное же сопоставление частоты заражения с титрами антител в секрете слизистой оболочки носа выявило сходную тенденцию, хотя статистически это не было доказано, поскольку слишком малое число добровольцев имели секреторные антитела. Возможный аддитивный эффект секреторных и сывороточных антител показан в табл. 55. Только у 1 добровольца имелись секреторные антитела и не было сывороточных, и он же был инфицирован. В присутствии антител в сыворотке и в отсут-

ния, что указывает на дополнительный защитный фактор в этих случаях.

Секреторные антитела, вероятно, не персистируют столь долго, как сывороточные (см. 65). Отсутствие опубликованных данных по исследованиям серийных образцов не позволяет документально подтвердить это соображение, однако у лиц, перенесших грипп в далеком прошлом, обычно не определяются антитела в секрете слизистой оболочки носа, жг имеются статистически достоверные и даже высокие уровни сывороточных антител.

Титр нейтрализующих антител

Инфицированные в зависимости от титра антител в сыворотке

Инфицированные в зависимости от титра антител в носовых смывах

2 частота заражения у лиц, имеющих антитела, по отношению к частоте заражения у лиц, не имеющих антител (точный тест): по сывороточным ; антителам р = 0,05, по антителам в смывах из полости носа р>0,30. ,з Определено по выделению вируса.

ствие их в секрете слизистой оболочки носа вероятность заражения уменьшалась по сравнению с теми случаями, когда отсутствовали антитела как в сыворотке, так и в секрете слизистых оболочек.

К. ДЕЙСТВИЕ НА БАКТЕРИАЛЬНУЮ ФЛОРУ

Изменения бактериальной флоры в верхних дыхательных путях широко изучались, при экспериментальной инфекции у добровольцев. Smorodintseff и соавт. (1977) провели серийное бактериологическое исследование на 48 добровольцах до инокуляции и в разные дни после инокуляции вируса гриппа (H0N1). Не было обнаружено качественных или количественных изменений бактериальной флоры в верхних дыхательных путях в результате заражения вирусом. Большинство исследователей, работавших с экспериментальной гриппозной инфекцией у человека, отмечали отсутствие гнойных: осложнений после гриппа, таких, как отит, острый гнойный синусит, пневмония. Разумеется, число добровольцев, зараженных при комбинированных исследованиях, далеко превосходит ожидаемую частоту бактериальных осложнений (см. раздел II, В). Однако в возрастной группе от 18 до-30 лет наиболее низкая частота бактериальных осложнений. Кроме того, другие 'факторы, например путь заражения или пассажи в культуре ткани, (могут вести к снижению тяжести заболевания и тем самым снижать частоту бактериальных осложнений.

Л. ИНФЕКЦИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ ВИРУСОМ ГРИППА В

У добровольцев, которым вводили вирус гриппа типа В, развивалось легкое общее лихорадочное состояние, похожее на то, которое наблюдается в легких случаях гриппа вызванного вирусом A. Francis и соавт. (1944) вводили добровольцам интраназально распыленный вирус гриппа В в разных дозах. У 27 из 30 развилось заболевание, характеризуемое подъемом температуры, 10—24-часовым инкубационным периодом, внезапным началом с ознобам, лотерей аппетита, тошнотой, недомоганием. Только 2 больных предъявляли жалобы на головную боль и один — на миалгии. Респираторные симптомы (кашель, насморк, боль в горле) отсутствовали. Состояние больных было тяжелым и требовало постельного режима, у 20 :—температура достигала 38 °С и выше. У 'большинства субъективные и объективные проявления заболевания исчезали в течение 24—48 ч. Из 30 не инокулированных, но бывших в контакте с больными лиц у 11 развились значительные серологические изменения, указывавшие на передачу инфекции от человека человеку.

Henle и соавт. (1943) вводили штамм Lee вируса гриппа В добровольцам. У всех 22 человек, получивших путем ингаляции распыленного материала по 109 эмбриональных инфекционных доз, развилось заболевание с подъемом температуры. Только у 1 'больного из 6, получивших тот же материал интраназально, возникла температурная реакция. В 79% случаев заболевание началось в период от 13 до 24 ч после инокуляции, в 13% —от 25 до 36 ч, в 8% —от 37 до 48 ч. Число лейкоцитов в крови снижалось на 3-й день после заражения и у 3 из 19 обследованных было ниже 6-Ю3 мкл. Вирус был выделен только от 2 добровольцев, но четырехкратный подъем антител наблюдался у 18 из 25 обследованных. Симптомы держались не более 48 ч. Передача инфекции от человека человеку не была установлена при наблюдении за 10 незараженными лицами, находившимися в контакте с больными.

Веаге и соавт. (1966) получили с вирусом .гриппа В/Англия/101/62 сходные результаты в отношении степени и продолжительности заболевания. Они инокулировали вирус интраназально 46 добровольцам, с разными уровнями антител к!.;вирусу гриппа В. Вирус был выделен от 25 лиц, подъем антител обнаружен у 30, заболело 19.

М. ИНФЕКЦИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ ВИРУСОМ ГРИППА С

В противоположность вирусам гриппа А и В заражение добровольцев вирусом гриппа С приводит к развитию афебрильного заболевания, подобного насморку. Joosting и соавт. (1968) инокулировали 12 добровольцам вирус гриппа С/Иоганнесбур|г/1/'66. Заражающий материал, приготовленный из органных культур трахеи эмбриона человека, содержал 105'7 эмбриональных инфекционных доз на одного человека. Вирус гриппа С был выделен из смывов полости носа у 11 лиц, у четырех развился четырехкратный подъем титра антител по РТГА и у четырех — по РОК. Заболевание верхних дыхательных путей с подъемом температуры развилось у 6 добровольцев, общих симптомов не было. Одиннадцати другим добровольцам ввели смешанный секрет слизистой оболочки носа, полученный от добровольцев, зараженных в 1-м опыте в период появления признаков заболевания, каждому была введена доза 104>25 ЭИД50. Вирус гриппа С был выделен от 6 добровольцев, у трех отмечен четырехкратный подъем антител по РТГА и у 4—по РСК- У двоих развился афебрильный насморк, у одного — фебрильное заболевание, которое могло быть обусловлено одновременно развившимся (интеркуррентным) циститом. Средний инкубационный период составил 4 дня, т. е. был длиннее, чем при экспериментальной инфекции, вызванной вирусами гриппа А и В. Насморк, боль в горле, головные боли, недомогание наблюдались очень часто, но кашель и миалгии отсутствовали. Средняя продолжительность составила 6 дней. Представляет интерес небольшая частота случаев, когда было отмечено повышение уровня антител. Из 17 добровольцев, у которых инфекция была доказана выделением вируса, только у 8 отмечалось повышение уровня антител, регистрируемое РТГА или РСК.

Н. ИНФЕКЦИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ У ЧЕЛОВЕКА ВИРУСАМИ ГРИППА ЖИВОТНЫХ

Синдром гриппа воспроизводился у человека при заражении его вирусами гриппа свиней и лошадей, но не птиц. Веаге и соавт. (1972) показали, что вирусы гриппа, выделенные от свиней, легко заражают людей. Семерым добровольцам ввели по 105'5 ЭИД вируса гриппа А/свинья/Тайвань/73Ю/70, антигенно родственного вирусу гриппа человека А/Гонконг/68 (H3N2) и, вероятно, происходящего от вируса H3N2 человека. Заболели 3 добровольца, у которых вирус продуцировался в секрете слизистой оболочки носа. Симптомы были сравнительно легкими и ограничивались заложенностью носа и выделениями из него. У 4 лиц развился четырехкратный подъем антител, и у 5 — отмечен достоверный подъем анти-NA-антител. Обнаруживались как антитела к НА и NA вируса гриппа человека А/Гонконг/68, так и к антигенам вируса гриппа свиней. Наоборот, при заражении вирусом свинья/ /Висконсин/66 заражение было засвидетельствовано выделением вируса или повышением уровня антител только у 2 из 13 добровольцев, а при заражении вирусом свинья/Манито-ба/67— у 5 из 14, причем симптомы либо отсутствовали, либо были слабо выражены. Интересно, что эти штаммы анти-генно не связаны с человеческими штаммами, но имеют антигенную связь с лрототипным штаммом свинья/Айова/15/70 вируса гриппа свиней1.

Alford и соавт. (1967а) вводили добровольцам вирус А/ло-шадь/2/Майайми/1/63. Этот штамм'был выделен от естественно зараженной лошади и в 100% случаев вызывал заражение у не имеющих антител пони, причем в 63% случаев заболевание протекало с подъемом температуры. Его испытывали на добровольцах после 1,2 и 3 пассажей на людях, после 10 пассажей в культуре клеток почки эмбриона человека или после 6 пассажей на пони породы Чинкотит. Все исследования дали сходные результаты. Из 33 добровольцев у четырех развилось заболевание с легкими общими проявлениями и подъемом температуры. Вирус был выделен от 21 добровольца, повышение уровня сывороточных антител к заражающему вирусу было отмечено также у 21 добровольца. От 47 до 71% инфицированных ответили повышением уровня антител не только к гомологичному вирусу, но и ж вирусам гриппа А (H2N2). Материал, полученный при пассажах на людях, сохранил способность вызывать инфекцию и заболевание у пони. Из 4 зараженных лони у всех повысилась температура от 39,5 до 40,5 °С (нормальная температура у лошадей до 39 °С) продолжительностью от 1 до 7 дней, в течение 5— 7 дней выделялся вирус и сохранялся повышенный уровень антител.

Более тяжелое заболевание людей при использовании того же лошадиного вируса описано Couch и соавт. (1969а). Заражающий материал получили в результате пяти пассажей на куриных эмбрионах, двух — в .культуре почки эмбриона человека, одного — на добровольцах, четырех — снова на культуре почки эмбриона человека, одного на добровольцах и трех — в культуре почки эмбриона человека. Из 15 добровольцев заболело 13. На 2-й или 3-й день после заражения у троих развилось афебрильное заболевание верхних дыхательных путей, у 10 — заболевание с лихорадкой и общими симптомами, максимальным подъемом температуры до 38,5 — 39,5 °С. У двоих развилось, кроме того, заболевание нижних дыхательных путей с пароксизмальными приступами кашля, неприятным ощущением в загрудинной области и повышенной чувствительностью трахеи. При заболевании человека, вызванном вирусом гриппа лошадей, лихорадка имеет меньшую продолжительность, чем при заболевании гриппом, вызванным вирусом А, а выделения из носа и заложенность его наблюдаются несколько реже, так же как кашель и боли в горле.