17.1. Приготовление питательных сред

Приготовление солодового сусла. В 1 дм³ водопроводной воды, нагретой до 48–50 С, понемногу засыпают 250 г размолотого солода, помешивая для того, чтобы не образовались комки. Температура при этом снижается до 45 С. Ее следует поддерживать на этом уровне в течение 30мин в водяной бане. По истечении этого времени взвесь нагревают до 55–58 С и выдерживают при этой температуре в течение часа. Затем температуру повышают до 63 С и поддерживают на этом уровне до полного осахаривания крахмала. Полноту осахаривания проверяют с помощью раствора Люголя – до появления желто-коричневой окраски сусла. Свежеприготовленное солодовое сусло нагревают до кипения и кипятят 5–10 мин. Выпавший при кипячении осадок отделяют фильтрованием. С целью получения совершенно прозрачного сусла его дополнительно осветляют яичным белком. Для этого белки яиц, взбитые с двойным (по объему) количеством воды, вносят в сусло, нагретое до 50 С, и тщательно перемешивают. При этом белок свертывается и увлекает в осадок оставшиеся в сусле взвешенные частицы. Осадок удаляют фильтрованием сусла через складчатый фильтр. Затем сусло разводят водой до содержания 8–10 % сухих веществ, разливают в сосуды и стерилизуют при 112 С в течение 30 мин. Раствор Люголя готовят следующим образом: 2 г йодистого калия растворяют в 5 см³ воды и прибавляют 1 г кристаллического йода, затем доводят объем до 300 см³.

Сусло-агар. К солодовому суслу, содержащему 8 % сухих веществ, добавляют 2 % агара, нагревают при перемешивании до кипения. Среду разливают в пробирки по 10 см³ или колбы по 50 см³ и стерилизуют при 112 С в течение 20 мин.

Среда-10. В 1 дм³ солодового сусла с содержанием 8 % СВ вносят: 0,05 г MnSO₄  4Н₂О; 0,2 г MgSO₄  7Н₂О; 0,2 г цистина или цистеина; 2 г К₂НРО₄; 0,2 г цитрата аммония; 2,5 г ацетата натрия; 20 г сахарозы; 10 г пептона; 50 см³ дрожжевого автолизата. Величина рН среды должна быть 5,5. К среде добавляют 1,5 % агара. Стерилизуют троекратно текучим паром. При посеве в чашки Петри вносят стерильный мел.

Дрожжевая вода. В 1 дм³ водопроводной воды вносят 80 г прессованных дрожжей, кипятят в течение 20 мин, отделяют дрожжи с помощью фильтрации в горячем виде либо центрифугированием, разливают в колбы и стерилизуют при 121 С в течение 20 мин.

Дрожжевой агар для выявления лейконостока. В дрожжевую воду вносят 2 % агара и 4 % сахарозы. После расплавления агара среду разливают в пробирки либо колбы и стерилизуют при 112 С в течение 15 мин.

Дрожжевой автолизат. В 1 дм³ водопроводной воды разводят 1 кг дрожжей чистой культуры, добавляют 10 см³ уксусной кислоты для предотвращения развития бактерий, устанавливают рН = 4,5–5,0 и помещают в термостат при температуре 45–48 С на 40–48 ч. Затем фильтруют, разливают в пробирки и стерилизуют при 112 С в течение 30 мин.

Молочный агар для выявления гнилостных, не образующих споры, бактерий. Молоко нагревают до кипения, охлаждают, снимают с поверхности жир, разливают в пробирки по 5 см³ и стерилизуют при температуре 112 С в течение 20 мин. Отдельно готовят дрожжевой агар (без сахарозы): дрожжевую воду, в которую внесено 3 % агара, расплавляют и разливают по 8 см³ в пробирки, затем стерилизуют при 112 С в течение 30 мин. При посеве в чашку Петри вносят молоко, затем дрожжевой агар.

Синтетическая среда с лизином для выявления посторонних дрожжей. В 1 дм³ водопроводной воды растворяют: 50 глюкозы, 3 г лизина, 1 г КН₂РО₄, 1 г МgSО_4, следы FeSO₄. Каждый компонент растворяют в воде отдельно и вносят в указанном порядке. Затем в среду добавляют 2 % агара, расплавляют, разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при 112 С в течение 20 мин.

Физиологический раствор. Растворяют в 1 дм³ водопроводной воды 8,5 г хлорида натрия, разливают в пробирки по 10 см³ и в колбы по 93 см³, стерилизуют в течение 20 мин. После стерилизации в пробирках остается около 9 см³, а в колбах – около 90 см³ физиологического раствора, т. е. такое количество, которое необходимо для приготовления разведения из посевного материала.

Среда Кесслера. К 1 дм³ водопроводной воды прибавляют 10 г пептона и 50 см³ желчи. Смесь кипятят в течение 30 мин на водяной бане, затем фильтруют через слой ваты. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г глюкозы и доводят объем до 1 дм³, устанавливают рН 7,4–7,6. Добавляют 2 см³ 1 %-го водного раствора кристаллического фиолетового. Среду разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 105 С в течение 10 мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Пептонная вода. К 1 дм³ дистиллированной воды добавляют 10–20 г пептона, 5 г натрия хлорида, кипятят 30 мин до растворения пептон. Устанавливают рН в пределах 7,2–7,4, раствор фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности, после чего стерилизуют 30 мин при 121 С.

Среда Эндо. 100 см³ мясопептонного агара (рН 7,4) расплавляют и охлаждают до температуры 70 С. Прибавляют 1 г лактозы (х.ч.), предварительно растворенной в стерильной пробирке с небольшим количеством дистиллированной кипяченой воды. В отдельных пробирках готовят 2–3 см³ спиртового насыщенного основного фуксина, 10 см³ 10 %-го водного раствора натрия сульфита.

В стерильную пробирку отмеряют 1 см³ фуксина и прибавляют раствор натрия сульфита до обесцвечивания фуксина (бледно-розовый цвет). Приготовленную смесь вливают в расплавленный агар, размешивают и разливают в чашки Петри. Горячий агар бледно-розового цвета при застывании становится бесцветным.

Среду Эндо выпускают и в готовом виде – в порошке. В лаборатории ее готовят согласно прописи, указанной на этикетке. Среду готовят в день ее использования.

Индикатор Андреде. 0,5 г кислого фуксина растворяют в 100 см³ дистиллированной воды и добавляют 15–18 см³ 1 н раствора натрия гидроксида. Перемешивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 24 ч, периодически встряхивая. Красный цвет индикатора изменяется и становится коричневым. Если изменение окраски не происходит, вносят еще 1 см³ щелочи и оставляют на 24 ч.

Другая пропись: 0,5 г фуксина растворяют в 16,4 см³ 1 н. раствора натрия гидроксида (4 %-й раствор), прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, настаивают в термостате при 37 С в течение 24 ч, затем 48 ч при комнатной температуре на свету. Готовый индикатор имеет желтый цвет с коричневым оттенком. В кислой среде он приобретает ярко-малиновую окраску. Приготовленный индикатор сохраняют во флаконах из темного стекла с притертой пробкой в обычных условиях. Используют для приготовления среды Гисса.

Синтетическая среда Ридер для определения способности дрожжей к сбраживанию углеводов. В 1л воды вносят 3 г (NH₄)₂ SO₄; 0,7 г MgSO₄; 0,4 г Ca (NO₃)₂; 0,5 г NaCl; 1 г КН₂РО₄; 0,1 г К₂НРО₄ и 2 % исследуемого сахара. Среду наливают в пробирки со стеклянными поплавками или в трубки Думбара и стерилизуют при 110 С в течение 20 мин.

В процессе приготовления питательных сред используют различные индикаторы рН (табл. 17.1).

Таблица 17.1