8.6. Основные приемы работы с культурой дрожжей лаборатории

Дрожжи в лабораторных условиях выращивают обычно в пробирках, колбах, чашках Петри, содержащих жидкие или плотные питательные среды. При пересеве дрожжей с одной среды на другую или при извлечении части клеток для приготовления препарата необходимо строго соблюдать условия, которые позволили бы предохранить культуру от загрязнений другими микроорганизмами.

Пробирки с культурами должны быть закрыты ватно-марлевыми пробками, которые предохраняют их содержимое от попадания посторонних микроорганизмов. Для пересевов культуры пользуются бактериологической петлей, которая должна быть предварительно простерилизована. Стерилизацию бактериологической петли проводят в пламени горелки, прокаливая докрасна проволоку и обжигая примыкающую к ней часть держателя, вводимую внутрь пробирки. При прокаливании петлю рекомендуется держать в пламени горелки почти вертикально, чтобы проволока была равномерно раскалена на всем протяжении (рис. 8.2, а).

Лишь после такой стерилизации петлю можно вводить в пробирку с культурой. Прикосновение к культуре слишком горячей петли может повредить клетки. Поэтому петлю следует предварительно остудить, прикоснувшись ею к внутренней поверхности пробирки или к питательной среде, свободной от клеток дрожжей (рис. 8.2, б, в, г).

а

б

в

г

е

д

ж

з

Рис. 8.2. Схема приготовления препарата для микроскопирования

Взяв небольшое количество посевного материала с поверхности субстрата, вынимают петлю из пробирки, следя за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок или краев пробирки. Горлышко пробирки снова обжигают в пламени горелки, затем обжигают ватную пробку и закрывают ею пробирку (рис. 8.2, д, е). Если конец пробки загорится, ее нужно быстро ввести в пробирку, где она сама потухнет. Ни в коем случае нельзя дуть на загоревшуюся пробку, так как это поддержит и усилит горение. Извлеченный материал используют для приготовления препарата или для пересева на свежую плотную или жидкую среду (рис. 8.2, ж; рис. 8.3, а–д).

Оставшиеся на петле после пересева клетки сжигают в пламени горелки. Прокаливание петли в этом случае начинают с участка проволоки, примыкающего к кольцу для того, чтобы микробная масса, оставшаяся на петле, подсохла. Затем петлю переводят в вертикальное положение и прокаливают докрасна (рис. 8.2, з; рис. 8.3, е). Такой порядок стерилизации петли необходим потому, что при быстром нагревании влажной микробной массы происходит ее разбрызгивание, и образуется аэрозоль, загрязняющий воздух.

При пересевах культуры из жидкой питательной среды можно пользоваться стерильной пипеткой (рис. 8.4). При этом стерильную пипетку за верхний конец вынимают из бумаги, в которой она стерилизовалась, и вводят в пробирку или колбу с культурой. Отбор жидкой культуры пипеткой можно осуществлять с помощью резиновой груши. Использованную пипетку следует перенести в дезинфицирующий раствор, не касаясь ею окружающих предметов. Все манипуляции следует проводить около пламени горелки (но не в пламени), по возможности быстро, чтобы не загрязнять культуру посторонними микроорганизмами, которые могут попасть в пробирку из воздуха.

Рис. 8.3. Схема пересева культуры из пробирки в пробирку: а–е – этапы пересева

Рис.8.4. Схема посева на поверхность плотной среды: а – бактериологической петлей, б – пипеткой