8.3. Стерилизация микробиологических инструментов, посуды и материалов

При пересевах дрожжей на лабораторных стадиях используются только стерильные микробиологические инструменты, питательные среды и посуда. Микробиологические инструменты – петлю, иглу стерилизуют прямым прокаливанием в пламени спиртовки вместе с частью держателя непосредственно перед использованием. Бактериологическая петля должна быть замкнута в непрерывное кольцо. Использованные пробирки и пипетки кипятят в мыльной воде, затем промывают чистой водой. Чашки Петри после снятия результатов посева стерилизуют при 1 МПа в течение 1 ч для того, чтобы убить клетки микроорганизмов. После этого кипятят в мыльном растворе и промывают чистой водой. Микробиологическую посуду (пробирки, чашки Петри, колбы, пипетки) стерилизуют горячим воздухом в стерилизационном шкафу при температуре 160 С в течение 2 ч. Перед стерилизацией посуда должна быть чистой, сухой и завернутой в бумагу. Разворачивают стерильную посуду только перед употреблением.

Пробирки и колбы закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками, которые сверху обвертывают бумажными колпачками для лучшего сохранения стерильности. Пипетки с помещенными в верхнем конце ватными тампонами также заворачивают в бумагу. Стеклянные палочки, шпатели, чашки Петри с помещенным в них мелом также заворачивают в бумагу, стаканчики закрывают бумажными колпачками.

Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в суховоздушный стерилизатор не очень плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный прогрев стерилизуемого материала. По окончании стерилизации посуды шкаф не следует открывать до тех пор, пока температура в нем не снизится до 100–70 С, так как при резком охлаждении может нарушиться стерильность и, кроме того, в сильно нагретой стеклянной посуде могут образоваться трещины.

Стеклянную посуду можно стерилизовать и в паровом стерилизаторе (автоклаве), при этом режим стерилизации зависит от объема сосудов и толщины стекла (табл. 8.1).

Таблица 8.1

Продолжительность стерилизации посуды различной вместимости

Колбы	Вместимость, дм3	Стерилизация при 121 С, мин
Тонкостенные	0,5 1,0 2,0	10–15 13–18 15–20
Тонкостенные	1,0 2,0	19–24 25–30

Для стерилизации в автоклаве посуду готовят так же, как и для суховоздушной стерилизации. При этом следует иметь в виду, что в автоклаве посуда увлажняется, и ее необходимо подсушивать.

8.4. Стерилизация питательных сред

Питательные среды и предметы, не подлежащие воздействию высокой температуры (например, резиновые шланги), стерилизуют насыщенным паром под давлением. Это – один из наиболее эффективных методов, основанный на прогревании субстрата паром в автоклавах, работающих под давлением выше атмосферного, так как с повышением давления пара повышается и его температура (табл. 8.2). Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает надежность стерилизации: при этом погибают как вегетативные клетки так и споры микроорганизмов. Стерилизацию в автоклаве проводят при более низкой температуре и за более короткий срок, чем в воздушном стерилизаторе.

При стерилизации в автоклаве следует учитывать, что при доступе в стерилизационную камеру воздуха определенному давлению соответствует значительно более низкая температура, чем в его отсутствии. Поскольку гибель микроорганизмов влажным паром зависит от температуры, а не от давления, необходимо закрывать автоклав только после того, как весь воздух будет из него вытеснен водяным паром. Поэтому при автоклавировании правильнее измерять температуру, а не давление, хотя (по соображениям простоты и безопасности) все еще принято измерять давление.

Таблица 8.2