5. Лабораторная диагностика лептоспироза

Для лабораторной диагностики лептоспироза пользуются следующими методами исследования:

• бактериоскопическим

• биологическим

• серологическим

Материал для исследования (табл. 3). В течение первой недели болезни лептоспиры находятся в крови. С 1-го по 5-й день болезни производят посевы крови, заражение лабора­торных животных и микроскопию цитратной крови. На 5-15-й день болезни в сыворотках крови больных появляются агглютинины и лизины, которые определяются с помощью РМА. В течение 2-й недели болезни лептоспиры накапливаются в почках и начинают выделяться с мочой. С 10-16-го дня болезни проводят исследование мочи, ликвора, паренхиматозных органов на присутствие лептоспир методом микроскопии.

Таблица 3

Лабораторная диагностика лептоспироза. Взятие материала.

Период болезни	Материал	Метод исследования
с 1 по 5-й день	Кровь	Бактериологический (посевы)
	Кровь с добавлением антикоагулянта* (два объема крови и 1 объем 1,5% р-ра лимоннокислого натрия, смесь отстаивают при комнатной температуре 2 ч.)	Бактериоскопический (микроскопия в темном поле)
на 5-15 день	Сыворотка крови - 0,5 мл (парные сыворотки с интервалом 7-10 дней)	Серологическая реакция микроагглютинации (РМА)
с 10-16-го дня	Моча (средняя порция), ликвор

* в этих условиях лептоспиры остаются жизнеспособными до 11 суток.

Оценка диагностической значимости полученных результатов представлена в табл. 4.

Таблица 4

Оценка диагностической значимости полученных результатов

Метод	Сроки выдачи результатов, их оценка
Бактериоскопический	В тот же день
Серологический	На следующий день от момента поступления пробы в лабораторию В случаях спорадических заболеваний: Обнаружение нарастания титров антител даже в не высоких разведениях (1:10 – 1:100) является абсолютным доказательством наличия заболевания. При вспышках лептоспироза: Достаточно однократного исследования (диагностический титр 1:100 и выше).
Бактериологический	При отсутствии роста в течение 3-х месяцев посевы считаются отрицательными.

Бактериоскопия. Из-за того, что лептоспиры с трудом воспринимают окраску, все наблюдения производят с живыми возбудителями в темном поле. Для исследования гото­вят препараты «раздавленная капля». Бактериоскопия крови и мочи в темном поле часто дает ошибочные результаты, и в настоящее время ее использование нецелесообразно.

Выделение возбудителя. Для выделения культур лептоспир кровь, мочу, спинномозговую жидкость засеивают в количестве 5-20 капель в 3-5 пробирках с питательной средой (желательно у постели больного) или дистиллированной водой. Самой простой питательной средой является 10% раствор сыворотки кролика в дистиллированной воде с рН 7,2-7,4. Для выявления роста лептоспир через 10 дней от момента посева из каждой пробирки или ампулы готовят препарат «раздавленная капля» и мик­роскопируют в темном поле. Выделение лептоспир требует до 2 нед., но это важно, так как только таким путем может быть идентифицирован серотип возбудителя. Посев мочи менее надежен.

Биологическая проба. С целью выделения лептоспир с успехом можно использовать введение материала золотистым молодым хомякам, морским свинкам и кроликам ­сосункам. Наблюдения за зараженными животными не отличаются от тако­вых за животными, зараженными другими возбудителями.

Серологический метод. Серологический метод диагностики является наиболее простым, общедо­ступным и быстрым. Как уже упоминалось, агглютинины в сыворотке крови при лептоспирозе обнаруживаются с 3-го-5-го дня болезни. Титры их достигают максимума чаще на 14-17-й день с момента заболевания, а затем постепенно снижаются. Агглютинины в сыворотке крови переболевших лептоспирозом сохраняются длительное время (годами и десятками лет).

Окончательный диагноз лептоспироза ставится при выявлении лептоспир в крови, ликворе или моче, нарастании титра специфических антител в реакции микроагглютинации (РМА) или обнаружении IgM (ИФА на полимерных мембранах).