3. Правила работы в микробиологической лаборатории

Основные правила работы в базовой лаборатории предусматри­вают:

• запрещение работ с пипеткой при помощи рта, приема пищи, курения, хранения пищи, применение косметичес­ких средств в рабочих помещениях;

• дезинфекцию рабочих поверхностей не реже 1 раза в день и после каждого попадания на них заразного материала;

• мытье рук после работы с заразным материалом, живот­ными и перед уходом из лаборатории;

• проведение работ таким образом, чтобы свести к мини­муму возможность образования аэрозоля;

• обеззараживание всех инфицированных материалов перед выбросом или повторным использованием;

• помещение заразного материала, предназначенного к унич­тожению вне лаборатории, в прочные непромокаемые кон­тейнеры, которые надежно закрывают перед удалением из лаборатории;

• не использовать лабораторную спецодежду и средства ин­дивидуальной защиты вне лаборатории;

• дезинфицирование всех инфицированных предметов;

• применение очков или других средств для защиты глаз и лица от брызг или образующихся при работе частиц;

• допуск в рабочую зону только лиц, предупрежденных о потенциальной опасности и выполнивших специальные тре­бования (например, иммунизация).

Во время работы двери лаборатории должны быть закрыты, вход в виварий ограничен специально отобранным для работы персоналом. Детям вход в лабораторию запрещен. Должны про­водиться текущая дезинсекция и дератизация лабораторных помещений. Нельзя вносить в лабораторию животных, не пред­назначенных для работы. Предусмотреть ограничение использо­вания остроконечных шприцевых игл для парентеральных инъ­екций, забора крови у лабораторных животных или жидкостей из флаконов через резиновые пробки. Шприцы и иглы при работе с инфекционными жидкостями нельзя использовать вместо при­боров автоматического пипетирования; вместо остроконечных игл, когда это возможно, надо применять тупоконечные канюли. Работа с кровью, заразным материалом и зараженными живот­ными должна вестись в резиновых перчатках; после работы перчатки снимают с соблюдением правил асептики и перед уда­лением из лаборатории автоклавируют.

Необходимо обязательно немедленно сообщать руководителю лаборатории обо всех аварийных ситуациях, создающих угрозу биологической безопасности, и немедленно проводить все ме­дицинские мероприятия для предотвращения последствий ава­рий. У всех сотрудников лаборатории перед допуском к работе берут пробы крови и сохраняют фоновый образец сыворотки для определения антител; необходим периодический отбор проб крови персонала в соответствии с характером работы и степе­нью риска.

В лаборатории должна быть инструкция по технике безопас­ности, которую персонал должен знать и строго выполнять и периодически сдавать зачет, подтверждающий знание этой инструкции.

3. Принципы микробиологической диагностики инфекционных болезней

Лабораторная диагностика болезней человека основана на об­наружении в организме больного микроба, вызвавшего болезнь, микробных компонентов (антигенов) или продуктов жизнеде­ятельности (токсинов и др.) либо изменений в показателях гомеостаза под действием этого микроба (например, формулы крови, биохимического состава крови и др.).

Материалом для исследования в медицинской микробиоло­гии служат различные биологические жидкости и другие мате­риалы, взятые из макроорганизма (кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, кал, рвотные массы, промывные воды и т.п ), и ткань — биопсия от живого или аутопсия от трупа. В некоторых случаях на исследование берут объекты окружающей среды: воздух, воду, пищевые продукты, смывы и т.п.

При заборе материала для микробиологического исследова­ния необходимо соблюдать следующие правила. Вид материала оп­ределяется клинической картиной болезни, т.е. он должен со­ответствовать локализации предполагаемого возбудителя на дан­ном этапе патогенеза болезни. Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования и при необходимости его повторения. Материал берут по возможности в начальном периоде болезни, так как именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, они имеют более типичную ло­кализацию. Забор материала должен осуществляться до начала антимикробной химиотерапии или через определенный проме­жуток времени после введения антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма. Материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют соответству­ющее отделяемое (гной, мочу, желчь и др.). Материал берут в момент наибольшего содержания в нем возбудителя. Необходимо исключить возможность контаминации материала нормальной флорой больного и микробами окружающей среды, для чего материал берут в асептических условиях при адекватном доступе к источнику инфекции. Следует предупредить попадание в материал антимикробных препаратов (дезинфектантов, антисеп­тиков, антибиотиков). Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека, по­этому при его заборе, хранении, транспортировке и обработке должны соблюдаться все правила биологической безопасности. Транспортировку материала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, чтобы исключить гибель неустой­чивых видов микроорганизмов, или помещать его в специаль­ные транспортные среды. К материалу прилагают сопроводитель­ный документ, содержащий основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования (фамилия, имя и отчество больного, номер истории болезни, клинический диагноз и т.д.).

В процессе транспортировки материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, от механических повреждений, чтобы исключить гибель микробов и контаминацию материала посторонней микрофлорой. Лучше всего доставлять материал в специальных металлических изотермических контейнерах, кото­рые легко очищать и обеззараживать. Нельзя отправлять мате­риал в лабораторию с больными или со случайными людьми.

Микробиологическая диагностика включает в себя 5 методов: микроскопический, культуральный, биологический, серологи­ческий и аллергический.

Микроскопический метод заключается в приготовлении мик­роскопических препаратов (нативных или окрашенных просты­ми или сложными способами) из исследуемого материала и их микроскопии с применением различных видов микроскопичес­кой техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, лю­минесцентная, электронная и др.). В бактериологии микроско­пический метод получил название бактериоскопического, в ви­русологии — вирусоскопического.

Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на искусственные питательные среды с целью выде­ления и идентификации чистой культуры возбудителя/возбуди­телей. В бактериологии культуральный метод получил название бактериологического, в микологии — микологического, в про­тозоологии — протозоологического.

Биологический метод (экспериментальный, или биопроба) заключается в заражении исследуемым материалом чувствитель­ных лабораторных животных. Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина и активности антимикробных химиотерапевтических препаратов и т.д.

Серологический метод заключается в определении титра спе­цифических антител в сыворотке крови больного, реже в об­наружении микробного антигена в исследуемом материале. С этой целью используют реакции иммунитета.

Аллергологический метод заключается в выявлении инфекци­онной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препа­рат-аллерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.

Очевидно, что диагностическая ценность перечисленных методов неравнозначна. Ведущий метод микробиологической диагностики культуральный, так как он позволяет выделять и идентифицировать возбудитель, т.е. определять первопричину болезни. Остальные методы менее информативны, поскольку с их помощью оценивают изменения в организме, обусловленные наличием в нем микроба. Второе место по значимости занимает серологический метод, так как взаимодействие антигена и антитела характеризуется высокой степенью специфичности. Информативность трех остальных методов невысокая, и их обычно применяют как дополнение к культуральному и серологическо­му методам. Так, микроскопия исследуемого материала далеко не всегда позволяет увидеть и идентифицировать микробы под микроскопом. Их удается обнаружить только при высокой об- семененности ими материала. Даже обнаружив бактерии под мик­роскопом, невозможно морфологически идентифицировать их до вида. Как известно, все видовое многообразие бактерий сводится к 4 основным морфологическим формам: кокки, палочки, извитые и ветвящиеся формы. Поэтому по микроско­пической картине можно весьма ориентировочно отнести уви­денные бактерии к крупному таксону, например «грамположи- тельные кокки». Только в единичных случаях, когда бактерии имеют уникальную морфологию, на основании результатов микроскопии можно определить их родовую принадлежность. При микроскопии грибов и простейших информативность микро­скопического метода выше, так как грибы и простейшие, являясь эукариотами, имеют более крупные размеры и более характерную морфологию. Диагностические возможности экс­периментального метода ограничены тем, что к большинству возбудителей антропонозных инфекций человека лабораторные животные невосприимчивы, поэтому вызвать у них экспери­ментальную инфекцию не представляется возможным. Приме­нение аллергологического метода ограничено тем, что боль­шинство микробов, попадая в организм человека, не вызы­вают ГЗТ.

Поскольку микробиологические исследования являются од­ним из наиболее дорогих видов лабораторных исследований, перед микробиологом стоит задача постановки достоверного микроби­ологического диагноза с наименьшей затратой времени, сил и средств. Поэтому для постановки диагноза используют от 1 до 5 методов диагностики так, чтобы выбранный набор методов гарантировал правильный ответ.

Особое значение приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют поставить микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого мате­риала в лабораторию. К этим методам относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, газовая хроматография и др.

В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности био­логии вирусов. Используют 3 метода лабораторной диагностики: вирусоскопический, вирусологический и серологический. Виру­соскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего использу­ют электронный микроскоп, реже люминесцентный. Световая микроскопия из-за ничтожно малых размеров вирусов практи­чески не применяется. Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом чувствительной биологичес­кой модели (лабораторные животные, куриные эмбрионы или культуры клеток), индикации вируса и его последующей иден­тификации. Особенностью серологического метода в вирусоло­гии является исследование парных сывороток. Первую сыворот­ку берут у больного в острый период в начале болезни, хранят при 4—8 °С, а вторую сыворотку берут через 10—14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворот­ке по сравнению с первой. Диагностической является серокон­версия в 4 раза и выше.

Ведущий метод лабораторной диагностики вирусных инфек­ций вирусологический.