1. Микробиологический контроль лекарственных средств

Лекарственное сырье и готовые препараты могут обсеменяться микроорганизмами на различных этапах их технологического получения при хранении. Инфицирование происходит через воду, нестерильную посуду, воздух производственных помещений, руки персонала и т.д. Обсеменение происходит также за счет нормаль­ной микрофлоры растений и фитопатогенных микробов — возбудителей заболеваний растений, а также нормальной мик­рофлоры животных при получении медицинских препаратов из животного сырья (см. главу 6).

Микробы, развивающиеся в норме на поверхности растений, относятся к эпифитам (от греч. epi — над, phyton — растение). Эпифитная микрофлора препятствует проникновению фитопа­тогенных микробов в растительные ткани, повышая тем самым иммунитет растений. Наибольшее количество эпифитной микро­флоры составляют грамотрицательные бактерии Erwinia herbicola, образующие на мясопептонном агаре золотисто-желтые колонии. Они являются антагонистами возбудителя мягкой гнили овощей. Обнаруживают в норме и другие бактерии — Pseudomonas fluorescens, реже Bacillus mesentericus и небольшое количество грибов. Микробы находятся не только на листьях, стеблях, но и на семенах растений. Нарушение поверхности растений и их семян способствует накоплению на них большого количества пыли и микроорганизмов.

В почве, около корней растений находится значительное количество микроорганизмов. Эта зона называется ризосферой (от греч. rhiza — корень, sphaira — шар). В ризосфере часто присут­ствуют неспорообразующие бактерии (псевцомонады, микобак­терии и др.), встречаются также актиномицеты, спорообразую­щие бактерии и грибы. Микробы ризосферы переводят различ­ные субстраты в соединения, доступные для растений, синте­зируют биологически активные соединения (витамины, антиби­отики и др.), вступают в симбиотические взаимоотношения с растениями, обладают антагонистическим действием против фи­топатогенных бактерий.

Микробы поверхности корня растений (микрофлора ризо- планы) в большей степени, чем ризосфера, представлены псев­домонадами. Симбиоз мицелия грибов с корнями высших ра­стений называют микоризой, или грибокорнем (от греч. mykes — гриб, rhiza — корень). Микориза ускоряет рост растений.

Растения окультуренных почв в большей степени загрязнены микроорганизмами, чем растения лесов и лугов. Особенно много микробов содержится в нижней прикорневой части растений, что связано с попаданием микробов из почвы. В большом ко­личестве обнаруживаются микроорганизмы на растениях, расту­щих на полях орошения, свалках, вблизи складирования наво­за, в местах выпаса скота При этом растения могут загрязняться патогенными микроорганизмами. При неправильной заготовке растения могут быть хорошей питательной средой для размно­жения микробов. Одним из способов, препятствующих их росту на растениях, является высушивание. При изготовлении лекар­ственных средств микробы могут попадать в препараты из окружающей среды, что может влиять на фармакологические свойства лекарств.

Для соблюдения санитарного режима изготовления лекарствен­ных препаратов проводят санитарно-микробиологический кон­троль объектов окружающей среды предприятия и каждой серии выпускаемой лекарственной формы.

Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки и др., в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно-тех- нической документации, должны быть стерильными. Контроль стерильности лекарственных средств проводят путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов; на среду Сабуро — для обнаружения грибов, главным образом рода Candida. Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют с помощью мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемо­го препарата делят на части и вносят их в жидкие питательные среды для подращивания задержанных микробов. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содер­жат микроорганизмы, поэтому их испытывают на степень микробиологической чистоты: проводят количественное опреде­ление жизнеспособных бактерий и грибов в 1 г или 1 мл препарата, а также выявляют бактерии (бактерии семейства энтеробакгерий, синегнойная палочка, золотистый стафилококк), которые не должны присутствовать в нестерильных лекарствен­ных средствах. В 1 г или 1 мл лекарственного сырья для приема внутрь должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов. В случаях местного применения (полость уха, носа, интравагинальное использование) количество микроорга­низмов не должно превышать 100 (суммарно) микробных клеток на 1 г или 1 мл препарата В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не дол­жна превышать 10 000 микробных клеток на таблетку.

2. Микробиологический контроль воды, почвы, предметов обихода

Санитарное состояние объектов окружающей среды регламенти­руется по различным физико-химическим и санитарно-микро- биологическим показателям.

Загрязненность воды микробами контролируют по 4 основ­ным показателям: 1) микробному числу воды; 2) коли-титру и коли-индексу; 3) по обнаружению патогенных бактерий кишечной группы; 4) количеству термофилов в почве.

Микробное число (количество микроорганизмов в 1 мл иссле­дуемой воды) определяют количественным высевом разведенной в 10, 100 и 1000 раз воды в чашки Петри с мясопептонным агаром с последующим подсчетом числа выросших колоний.

Для определения коли-титра используют такие показатели: наличие как обычной фекальной кишечной палочки, так и БГКП. Данных бактерий выявляют методом бродильной пробы. Сущ­ность метода заключается в посеве уменьшающихся объемов исследуемой воды в среды накопления (например, глюкозо- пептонная среда с индикатором pH и газообразования), после­дующим культивированием и высеве помутневших (забродив­ших) проб на среду Эндо. Кишечную палочку определяют по росту колоний красного цвета (лактозоположительные), состо­ящих из грамотрицательных палочек, которые не продуцируют оксидазу. Затем по расчетным таблицам определяют коли-титр и коли-индекс.

Коли-индекс можно определить, профильтровав исследуемую воду через мембранный фильтр и поместив последний на среду Эндо. Из осевших на фильтре кишечных палочек вырастают колонии красного цвета, состоящие из грамотрицательных па­лочек. При коли-индексе питьевой воды более 10 БГКП (10 бактерий на 1 л воды) дают немедленный ответ о факте фекального загрязнения воды.

Санитарно-микробиологическую оценку почвы проводят пу­тем определения ее фекального загрязнения по коли-титру, титру энтерококка и перфрингенс-титру. Одновременно определяют и микробное число почвы. Обычно фекальное загрязнение сопро­вождается увеличением в почве количества БГКП и спорообра­зующих анаэробов группы Clostridium perfringens. В результате самоочищения почвы бактерии группы кишечной палочки (БГКП) исчезают, но еще в течение определенного времени в ней на­ходят Clostridium perfringens. Следовательно, присутствие в почве определенного количества Clostridium perfringens и отсутствие БГКП свидетельствуют о старом фекальном загрязнении.

Санитарный надзор за состоянием объектов общественного питания, пищеблоков, помещений аптек, лечебных и детских учреждений осуществляют при взятии смывов с рук персонала, посуды, поверхности столов, оборудования и других предметов окружающей среды. Смыв высевают на соответствующие пита­тельные среды для определения общей микробной обсеменен- ности, наличия БГКП, патогенных энтеробактерий, стафило­кокков, грибов рода Candida. Можно также заражать культуры клеток для выявления энтеровирусов (кишечных вирусов).

3. Микробиологический контроль продуктов питания

Продукты питания контролируют по микробиологическим пока­зателям при их санитарно-микробиологическом исследовании в плановом порядке или по эпидпоказаниям. В плановом порядке проводят исследования на: 1) общее микробное обсеменение (количество мезофильных микробов в 1 г продукта); 2) обна­ружение санитарно-показательных бактерий (например, БГКП и энтерококков), а также иногда выявление патогенных микробов.

По эпидпоказаниям исследования проводят на обнаружение патогенных микробов — возбудителей пищевых отравлений микробной этиологии.

Общее микробное обсеменение (микробное число) не опре­деляют в молочнокислых продуктах (твороге, сметане, кефире) и других продуктах, содержащих специфическую микрофлору (молочнокислые стрептококки, лактобациллы и др.). В них определяют микробный пейзаж с помощью микроскопии ок­рашенных мазков. Наличие молочной плесени, дрожжей и от­сутствие молочнокислой специфической микрофлоры указывает на неудовлетворительное состояние продуктов, их неправильное хранение. Исключение составляют кефир и кумыс, в которых при микроскопии в поле зрения выявляются 2—5 дрожжевых клеток, поскольку эти продукты — результат молочнокислого и спиртового брожения.

Санитарно-бактериологическое исследование консервов про­водят для определения аэробных и анаэробных микробов и в отдельных случаях — ботулинических токсинов.