2. Динитрофенилгидразиновый (днфг) тест

Метод: до 0,25 мл мочи прибавить 1мл 0,2% раствора 2,4 - ДНФГ в 2-х N растворе HCl. Через 10 минут прибавить 1,25 мл этилового эфира. Смешать. Эфир отобрать в другую пробирку, прибавить ровный объем 10% раствора NaCO3. Содержание пробирки перемешать. Если нижний слой окрашивается в желтый цвет, то реакция считается положительной.

Интерпретация: Нарушение с высоким уровнем кетокислот, например, болезнь “кленового сиропа” (в случае необходимости удалить физиологичные кетоны нагреванием). Возможны ложно положительные пробы при кетонурии, глюкозурии.

3. Проба на наличие сульфитов

Метод: использование коммерчески доступного покаказателя уровня сульфитов (например, Merckoquant 10013, фирмы Merck, г. Дармштадт, Германия); ! свежая моча.

Проба на содержание сульфитов позволяет распознать повышение их экскреции с мочой, что может быть маркером первичного дефицита фермента сульфитоксидазы или его кофактора - молибдена. Дети с одним из этих нарушений обычно страдают тяжелой формой эпилептической энцефалопатии, которая манифестирует в неонатальном периоде или в детстве. Тест на наличие сульфитов в моче должен быть составной частью основных исследований у любого ребенка с невыясненной задержкой психомоторного развития, особенно в сочетании с тяжелой формой эпилепсии. В том случае, если используются несвежие пробы мочи, тест может иметь ложно отрицательный результат. Ложно отрицательные результаты могут быть следствием применения разных врачебных препаратов и других заболеваний, которые вызывают повышенные концентрации сульфитов в моче.

4. Dnph-тест (тест на динитрофенилгидразин)

Метод: смешать 0,5 мл мочи с 0,5 мл 0,2% раствора динитрофенилгидразина (DNPH).

DNPH вступает в реакцию с такими 2-оксоацидами, как оксоациды с разветвленной боковой цепью. По прошествии 5 минут наблюдается выпадение смеси в осадок. Слабое помутнение указывает на следовые количества 2-оксоацидов. Наличие вязкого осадка, имеющего желтый, оранжевый или красный цвет, указывает на положительный результат. DNPH-тест можно использовать для постановки диагноза болезни «кленового сиропа» у новорожденных с метаболической декомпенсацией. Так как DNPH вступает также в реакцию с физиологическими кетоновыми телами, может возникнуть необходимость в удалении их с помощью нагрева подлежащей тестированию мочи. Другой причиной ложноположительного результата может быть глюкозурия, наличие которой также может подозреваться в том случае, если тест на наличие восстанавливающих веществ в моче является положительным.

5. Тест на наличие восстанавливающих веществ в моче

Метод: использование технически доступных тестовых таблеток (например, таблетки фирм Clinitest, Bayer, Leverkusen, ФРГ).

Многие нарушения вызывают экскрецию сахаров и других восстанавливающих веществ в мочу; в таблице 8.1 приведен их перечень. Они легко распознаются с помощью технически доступных тестовых таблеток, которые в присутствии восстанавливающих веществ меняют окраску от желтого до красного цвета.

Альтернативный метод: к 0,5 мл мочи прибавить 5 мл реактива Бенедикта. Смесь нагреть в течение 5 минут на кипящей водяной бане. Охладить в течение 5-7 мин.

При наличии сахара появляется зеленая, желтая или красная окраска жидкости с осадком на дне пробирки. Исходя из полученной окраски, реакция Бенедикта оценивается по шкале от 0 до ++++. Проба считается положительной при количестве глюкозы выше 0,05 г% (табл. 31):

Принцип метода основан на редуцирующих свойствах альдегидной группы глюкозы в щелочной среде. Как окислитель используют сернокислую медь, которая при восстановлении образует окрашенное соединение. Стабилизатором в пробе является лимоннокислый натрий или калий. Реактив Бенедикта: в мерную колбу емкостью 1 литр добавляют 300 мл дистиллированной воды, добавляют 173 г лимоннокислого натрия Na₃C₆H₅O₇ х 11H₂O (Na₃C₆H₅O₇ х 5H₂O – 132г; Na₃C₆H₅O₇ х 5,5 H₂O – 137г), 100 г безводного или 2-х кристаллического углекислого натрия Na₂CO₃ (Na₂CO₃ * 10H₂O – 266,6 г). Нагревают до растворения. Отдельно растворяют 17,3 г сернокислой меди (CuSO₄) в 100 мл дистиллированной воды. Смешивают оба раствора, непрерывно стряхивая и, после охлаждения, доливают до 1 литра дистиллированной водой.

Таблица 30