Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Практикум по патфизу 3-е издание.doc
Скачиваний:
778
Добавлен:
06.12.2013
Размер:
2.02 Mб
Скачать

лизания любого типа может быть определена по отношению к самым различным аллергенам:

бактериальным, лекарственным, пищевым, бытовым и др.

Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы, обогащенный лимфоцитами отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.

Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл со­держался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стериль­ные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.

Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласт­трансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.

Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфичес­кого аллергена может достигать 35%.

Студенты на занятиях получают готовые мазки, которые изучают под микроскопом с иммер­сионной системой (об. X 90), подсчитывают 100-200 клеток и определяют процентное содержа­ние бластных форм. Результаты анализируют и делают выводы.

Тема 8. Патофизиология злокачественного роста

В развитых странах злокачественные новообразования стоят на втором месте по причине смертности людей, уступая только сердечно-сосудистым заболеваниям.

Опухоль представляет собой не координированное патологическое очаговое разрастание клеток, выходящее за пределы нормального плана построения организма. Отличительная осо­бенность опухоли заключается в том, что разрастание опухолевой ткани продолжается и после прекращения действия вызвавших его причин. Этим опухоль отличается от других форм пато­логии тканевого роста, таких, как гипертрофия, гиперплазия и регенерация. Кроме того, опухо­левый рост не координирован с организмом, не соответствует его запросам и потребностям.

Рост числа злокачественных новообразований обусловлен многими причинами: во-первых, совершенствованием диагностики, во-вторых, более тщательным учетом онкологических боль­ных, в-третьих, увеличением средней продолжительности жизни и в-четвертых, загрязнением окружающей среды канцерогенами.

Важнейшими биологическими особенностями, присущими опухолям, являются:

  1. - относительная автономность и нерегулируемость роста опухоли. Нормальные ткани име­ют «лимит» клеточного деления, т. е. предел возможной кратности удвоения клеточной массы, после чего деление прекращается, и клетки погибают. Опухолевые клетки размножаются беско­нечно («ускользают от старения»). У опухолевых клеток понижено свойство контактного тормо­жения со стороны соседних клеток.

  2. - снижение уровня дифференцировки опухолевой ткани, сближение ее по ряду признаков с эмбриональной тканью. Различают морфологическую, биохимическую, биофизическую, функ­циональную и иммунологическую анаплазию.

  3. - наследуемость изменений: передача клеткой, подвергшейся опухолевой трансформации, этих свойств дочерним клеткам, что приводит к образованию клона опухолевых клеток.

  4. - инвазийный и деструктивный рост - основной критерий злокачественности опухоли. Это свойство опухоли связано с выделением токсических веществ и протеолитических ферментов.

  5. - метастазирование, или появление новых очагов опухолевого роста.

  6. - прогрессия опухолей, т. е. способность в процессе развития постоянно менять свои при­знаки: морфологическую структуру, биохимические характеристики и антигенный спектр.

Вместе с тем, опухолевый очаг возникает из одной трансформированной клетки. Прогрессия характеризуется повышением независимости опухоли от организма и усилением злокачествен* ности.

Причиной развития опухоли являются химические, физические и биологические факторы. Химические канцерогены делятся на экзогенные и эндогенные. Их канцерогенный эффект j зависит от химической структуры, дозы, метаболизма в организме. К типичным химическим

канцерогенам, вызывающим рак в челюстно-лицевой области, относятся продукты возгонки

табака при курении, вредные привычки (жевание листьев бетеля с известью и др.).

К физическим факторам в этиологии опухолей относится рентгеновское излучение, радио­активное облучение, ультрафиолетовое облучение.

К биологическим факторам возникновения опухолей относятся онкогенные вирусы. ДНК-содержащие вирусы, как правило, индуцируют инфекционные процессы и, кроме того, они способствуют превращению нормальных клеток в злокачественные. В настоящее время уста­новлено, что в клеточном геноме животных и человека находятся также потенциальные он­когены - протоонкогены. Реализация действия в клетке онкогена (клеточного, вирусного или мутационного) происходит при дополнительном действии на клетку канцерогенов, которые выступают в качестве инициирующих факторов. Имеются и дополнительные условия развитая опухолей: характер питания, наследственность и другие.

Между развивающейся опухолью и целостным организмом существует тесная взаимосвязь. В патогенезе опухолевой болезни большое значение имеют регуляторные системы организма: нервная, эндокринная и иммунологическая, от которых зависит не только вероятность развития опухоли, но и ее прогрессирование, а также изменения в органах и системах, обусловленных системным воздействием новообразования.

Занятие. МЕТОДЫ ТРАНСПЛАНТАЦИИ, ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПУХОЛЕЙ

Цель занятия: познакомиться с методами трансплантации и воспроизведения злокачественных

опухолей и изучить морфофункциональную характеристику опухолевых клеток.

Трансплантация является важным методом изучения злокачественного роста в эксперименте.

К основным правилам трансплантации относятся: 1 - клетки перевиваемой опухоли должны быть живыми; 2 - пересадка проводится только в пределах одного вида животных; 3 - молодой возраст реципиента; 4 - соблюдение правил асептики и антисептики; 5 - небольшое поврежде­ние тканей реципиента; 6 -маленькие кусочки трансплантируемой опухоли.

Виды трансплантации и другие методы воспроизведения опухолей

  1. Трансплантация используется прежде всего для изучения вопросов, связанных с метаста-зированием опухоли. С этой целью берется взвесь клеток или кусочек опухоли и переносится на другое место того же животного, затем изучается рост опухоли в месте введения.

  2. Изотрансплантация - перевивка опухоли от одного животного другому одной и той же инбредной («чистой») линии. Животные инбредной линии отличаются одинаковыми наследс­твенными свойствами.

  3. Гомотрансплантация (аллотрансплантация) - это пересадка опухоли в пределах одного и того же вида.

  4. Гетеротрансплантация (ксенотрансплантация) - перевивка опухоли от животного одного вида животному другого вида. Такая перевивка требует предварительного преодоления межви­

дового барьера (облучение, введение больших доз кортизона), что является трудной задачей. В лаборатории Г.Я.Светмолдавского таким путем удалось перевить опухоль человека крысе и хомяку.

Методами трансплантации изучаются разнообразные биологические, биохимические, мор­фологические и другие вопросы канцерогенеза, разрабатываются новые методы лечения.

Кроме трансплантации в экспериментальной онкологии используются также методы инду­цирования опухолей путем длительного воздействия на организм химических соединений и физических факторов. Этот метод является основным для оценки канцерогенной активности химических веществ, воздействий факторов окружающей среды, пищевых продуктов, лекарс­твенных препаратов и для изучения других вопросов онкологии.

Методом экспериментальной онкологии является также эксплантация опухолей, что представ­ляет собой выращивание вне организма опухоли в специальных сосудах с питательной средой.

Выращивание культуры опухолевой ткани является ценным методическим приемом для решения важных теоретических и практических задач онкологии, прежде всего для изучения патогенеза и разработки методов лечения. Метод эксплантации используется также для иссле-

лования этиологических факторов. Для этого используется культура здоровых тканей человека и животных, на которую воздействуют канцерогенными факторами, В отличие от индукции ме­тод эксплантации позволяет изучить влияние самих онкологических факторов, а также различ­ных условий возникновения опухолей вне организма при отсутствии влияния интегрирующих регулятором систем организма.

Опыт 1. Воспроизведение опухолей путем перевивки клеточной взвесью (трансплантация опухолевой ткани)

Для успешной перевивки опухоли клеточной взвесью требуется соблюдение определенных условий: 1 — асептика; 2 — использование жизнеспособных клеток опухоли (без явлений некроза); 3 - проводится в пределах одного вида животных.

Работу выполняют на мышах. Для перевивки опухоли используют быстрорастущие штам­мы опухолей. Животное с не распавшейся опухолью, наркотизируют гекссналом, фиксируют, выстригают шерсть над опухолью, протирают место спиртом и смазывают йодной настойкой, разрезают кожу и извлекают опухоль. Вырезают кусочек опухоли, промывают стерильным фи­зиологическим раствором в чашке Петри и затем измельчают ножницами кусочек опухоли в не­большом количестве физиологического раствора до получения гомогенной массы. Полученную взвесь клеток набирают в шприц и вводят 1-2 мл взвеси под кожу интактной мыши, у которой предварительно в месте инъекции выстригают шерсть, до и после инъекции кожу смазывают йодной настойкой. Через несколько дней после трансплантации под кожей у мышей с привитой опухолью прощупывается уплотнение ткани, которое в дальнейшем увеличивается в размерах, затем размягчается и животное погибает.

Опыт 2. Перевивка асцитной карциномы Эрлиха мышам

Фиксируют мышь с асцитной формой карциномы Эрлиха, брюшную стенку смазывают йод­ной настойкой. Берут шприц с иглой и прокалывают брюшную полость, насасывают примерно 0,2 мл асцитической жидкости с раковыми клетками.

Для перевивки используют интактную мышь, которой вводят внутрибрюшинно асцитичес-кую жидкость с раковыми клетками. Примерно через 10 дней у интактной мыши из-за размно­жения раковых клеток накапливается асцитическая жидкость. Через три недели мышь погибает от раковой кахексии.

На разных сроках развития раковых клеток можно брать асцитическую жидкость, готовить мазки, окрашивать их и исследовать под микроскопом.

Опыт 3. Морфофункциональная атипия малигнизнрованных клеток

В работе используют готовые гистологические препараты злокачественных опухолей. На препарате находят злокачественные клетки, зарисовывают их, обращая внимание на следующие 1 характерные признаки:

1 - гиперхромию и увеличение размеров ядра в результате усиленного синтеза ДНК;

  1. - гипертрофию и увеличение числа ядрышек вследствие интенсивного синтеза РНК;

  2. - выраженную базофилию цитоплазмы из-за повышения содержания белков;

  3. - частые, а иногда и атипичные митозы;

  4. - полиморфизм опухолевых клеток (рис. 12).

На препаратах подсчитывают 50-100 клеток и вычисляют «индекс злокачественности» - от­ношение числа малигнизнрованных клеток к общему количеству клеточных элементов. Результат вносят в протокол, делают выводы.