Занятие 1. Патогенез аллергии немедленного типа

Морскую свинку за 14 дней до занятия сенсибилизируют подкожным введением 0,2 мл ло­шадиной сыворотки, На занятии свинку фиксируют на спине за конечности и верхние резцы на операционном столике. В области угла нижней челюсти анестезируют кожу 0,25% раствором новокаина и делают разрез длиной 1-2 см от угла челюсти по направлению к грудине, выделя­ют яремную вену. Для воспроизведения анафилактического шока в яремную вену или в сердце вводят 2,0 мл лошадиной сыворотки и быстро отвязывают животное. Менее чем через минуту у свинки наблюдают симптомы шока: беспокойство, взъерошивание шерсти на голове и шее, урежение и затруднение дыхания, животное падает на бок, развиваются судороги, происходит непроизвольное мочеиспускание и дефекация. Сразу после остановки дыхания вскрывают груд­ную полость и обнаруживают вздутые легкие на фоне сохранения сердечной деятельности.

Опыт 2. Реакция тучных клеток на аллерген

За 2-3 недели до занятия крысу сенсибилизируют лошадиной сывороткой по 1 мл в течение 3-х дней (2 инъекции подкожно, 3-я - внутривенно). На занятии сенсибилизированной крысе в брюшную полость вводят 5 мл подогретого до 37°С 0,7% раствора хлористого натрия и 1,5% ли­моннокислого натрия для смывания тучных клеток с серозных оболочек. Затем животное нар­котизируют эфиром, мягко массируют брюшную стенку 1-2 минуты и спустя 3 мин после введе­ния раствора вскрывают брюшную полость. Пастеровской пипеткой набирают перитонеальную жидкость, содержащую взвесь тучных клеток, и переносят ее по капле на 2 предметных стек­ла. На одно стекло к капле перитонеальной жидкости добавляют каплю лошадиной сыворотки (специфический аллерген) и осторожно перемешивают стеклянной палочкой, на другое - каплю сыворотки крови человека (неспецифический аллерген) - контроль. После 5-10 мин инкубации (в термостате, 37°С) делают толстые мазки, фиксируют их в смеси спирта и эфира (1:1) и красят спиртовым раствором толуидинового синего в течении 2-5 мин. Затем мазки промывают водой, обсушивают фильтровальной бумагой и рассматривают под микроскопом (об. X 40). В каждом мазке подсчитывают 50 тучных клеток и вычисляют в процентах количество дегранулированных клеток. Полученные результаты заносят в таблицу, сравнивают и делают выводы. Таблица

_{Опыт 3 : Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного при контакте с аллергеном (по Шульц – Дейлу )}

_{— —- «Р« ™ с ^}

Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки (рис. 11). Препарат длиной

3-4 см готовят из проксимального отдела тощей кишки морской свинки, сенсибилизирован­ной лошадиной сывороткой. С обоих концов на кишку накладывают лигатуру, одну из которых закрепляют ив стеклянном крючке, опущенном в сосуд, заполненный раствором Тироде. Дру­гую лигатуру соединяют с миографом для записи сокращений кишки на кимографе. Включают кимограф и в раствор Тироде добавляют сыворотку крови собаки (неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений отрезка кишки. Раствор Тироде заменяют свежим, вводят в него 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический аллерген), отмечают резкое сокращение отрезка кишки. Объясняют полученный результат. Аналогичный результат, но без записи сокра­щений, можно получить, поместив отрезок тощей кишки в чашку Петри с раствором Тироде.

Рис. 11

Схема установки для полунения симптома анафилактического шока на отрезке изолированного

кишечника сенсибилизированного животного [4]. Обозначения:

1 - кимограф, 2 - рычажок Энгелъмана, 3 - стаканчик с раствором Тироде, 4 - изолированный отрезок кишечника, 5 - водяная баня. Слева на ленте — запись реакции кишки, активно сенсибилизированной лошадиной сывороткой.

Занятие 2. Диагностика аллергии. Цель занятия: изучить основные методы диагностики аллергии.

Опыт 1. Реакция Овери.

Морскую свинку наркотизируют (1 мл 2% раствора гексенала на 100 г массы), фиксируют на препаровальном столике на спине, тщательно выстригают шерсть на животе.

Пассивную сенсибилизацию кожи осуществляют путем внутрикожного введения кроли­чьей антисыворотки (сыворотка кролика сенсибилизированного лошадиной сывороткой) по 0,1 мл в разведениях 1:1; 1:10; 1:100 с интервалом в 1 см по средней линии живота. Для контроля отдельно в ту же область вводят 0,1 мл физиологического раствора. Через 1-2 часа после этого животному вводят внутривенно 1 мл лошадиной сыворотки (антиген) вместе с 1 мл 2% раствора синего Эванса, Спустя 10-20 мин после инъекции иссекают кожу на живо­те, на внутренней поверхности отмечают появление окрашенных в синий цвет пятен разной величины.

Измеряют диаметр (в мм) окрашенных пятен на месте введения антисыворотки. Реакция считается положительной, если диаметр окрашенного пятна в месте инъекции сыворотки со­ставляет не менее 5 мм.

Объясняют полученные данные и делают выводы.

Опыт 2. Реакция бласттрансформации лимфоцитов

Бласттрансформация лимфоцитов - одно из проявлений реакции иммунной системы на действие антигена. Фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.

При первичном воздействии аллергена интенсивность бласттрансформации незначительна. Повторное действие аллергена вызывает более выраженную бласттрансформацию, т. к. аллерген действует уже на сенсибилизированные лимфоциты.

Свойство сенсибилизированных лимфоидных клеток давать выраженную бласттрансформа­цию используется как тест для определения аллергена, которым сенсибилизирован организм, и позволяет выявить аллергию замедленного и немедленного типа. Специфическая сенсиби-