Метод fish

Использование метода FISH для обнаружения дрожжей определенного вида. Препарат обработан олигонуклеотидным зондом,меченым флуоресцентным красителем. Нуклеотидная последовательность зонда комплиментарна последовательности рРНК, специфичной для вида Saccharomyces cerevisiae: слева. Слева - препарат в обычном свете, справа - в ультрафиолетовом. Светятся только клеткиSaccharomyces cerevisiae.

Так называемая FISH-технология (fluorescent in situ hybridization) получила широкое распространение в качестве молекулярно-биологического метода количественной оценки численности определенных видов микроорганизмов в сообществах. Метод основан на использовании ДНК-зондов - олигонуклеотидных последовательностей, комплиментарных определенным последовательностям в рРНК. В настоящее время созданы многочисленные филогенетические зонды, комплиментарные участкам рРНК различной степени вариабельности и соответственно специфичные для разных таксономических уровней - от отдельного вида до классов и отделов. Аналогично филогенетическим зондам для анализа различных физиологических групп микроорганизмов могут применяться функциональные зонды, комплиментарные нуклеотидным последовательностям генов, кодирующих ключевые ферменты различных процессов метаболизма.

В FISH-технологии используются олигонуклеотидные зонды, меченые флуоресцентным красителем, благодаря чему клетки, с которыми связались зонды, становятся видимыми с помощью флуоресцентной микроскопии. Олигонуклеотидные зонды способны проникать через неповрежденную клеточную стенку, что позволяет осуществлять анализ непосредственно в природных образцах, причем оценивать только количество жизнеспособных клеток определенного вида.

Микробиологические методы определения витаминов

Витамины группы B обычно присутствуют в клетках и тканях в ничтожно малых концентрациях, что затрудняет разработку физико-химических методов их определения. В первой половине XX в. большое распространение получили микробиологические методы количественного определения витаминов. Эти методы основаны на выращивании тест-культур, ауксотрофных по данному витамину, и определению их ростовых характеристик, которые зависят от концентрации витамина в среде. В качестве таких тест-культур могут быть использованы дрожжи. Были разработаны простые дрожжевые методы количественного тех витаминов, потребностьв которых встречается среди дрожжей: инозита, биотина, пантотеновой кислоты, тиамина, пиридоксина, никотиновой кислоты. Большую роль в разработке этих методов сыграла сотрудник Института микробиологии АН СССР Е.Н.Одинцова. Ею были подобраны ауксотрофные тест-культуры дрожжей, в основном из родовDebaryomyces,Pichia,Endomyces,Zygosaccharomyces, разработаны простые питательные среды, построены витаминограммы - графики, показывающие зависимость оптической плотности выращиваемой тест-культуры от концентрации витамина в среде.

Витаминограмма индикаторной на витамин B1культурыPichia fermentans: кривая размножения при добавлении в среду различных доз витамина B1. Иллюстрация из монографии Е.Н.Одинцовой.