Учет дрожжей методом посева

Основной метод определения численности и видового состава дрожжей в природных местообитаниях - метод посева на плотные среды.

Образцы для посева отбирают не более чем за 1-2 дня до посева. Если такой возможности нет, то образцы необходимо сохранять в холодильнике. Для посева образцы природных материалов обычно нуждаются в предварительной подготовке. Листья растений, мелкие веточки и корни измельчают стерильными ножницами. Со стволов, крупных ветвей и крупных корней срезают поверхностный слой толщиной 2-3 мм, который затем также измельчают. Почвенные образцы слегка растирают и удаляют из них корни и крупные камни.

Три-четыре навески каждого образца, помещают в колбу со стерильной водой, при этом масса навески и объем воды подбираются таким образом, чтобы разведение составляло от 1:10 до 1:100 в зависимости от характера образца. Образцы почв лучше сеять из разведения 1:10, подстилок и торфа - 1:20, листьев, ветвей и корней - 1:50, образцы высокосахаристых субстратов, разлагающихся сочных плодов, буровой муки ксилофагов - 1:100. Эти разведения подобраны опытным путем и позволяют получить от нескольких десятков до нескольких сотен дрожжевых колоний на чашке. Навеску обрабатывают при интенсивном встряхивании, на роторном микроизмельчителе или на вортексе в течение 1-3 мин. С помощью стерильной пипетки каплю полученной суспензии наносят на поверхность среды и растирают стерильным шпателем. Каждую навеску желательно высевать не менее, чем на 2-3 чашки.

Наиболее широко для учета дрожжей используется сусло-агар, подкисленный, подкисленный 40%-ной молочной кислотой (4 мл/л) для подавления роста бактерий. Для подавления роста бактерий можно также использовать добавление антибиотиков, таких как стрептомицин, пенициллин, эритромицин. Из синтетических сред наиболее часто используют глюкозо-пептонную среду (агар Сабуро), обычно с добавлением дрожжевого экстракта. Посевы инкубируют в течение нескольких суток при комнатной температуре.

На используемых средах хорошо растут также мицелиальные грибы, колонии которых сильно затрудняют учет и выделение дрожжей. Опытным путем было обнаружено, что мицелиальные грибы хуже развиваются по сравнению с дрожжевыми при низкотемпературной инкубациипосевов около 5°C. В этом случае время инкубации увеличивается до 3-5 недель.

Учет результатов посева проводят следующим образом. Сначала необходимо внимательно рассмотреть колонии, выросшие на чашке и попытаться выделить среди них основные типы по макроморфологическимособенностям. Для выделения макроморфологических типов колоний желательно использовать бинокулярную лупу. Как правило, количество типов колоний, выросших на каждой чашке не превышает 5-10 типов. Желательно просмотреть все выросшие колонии на чашке, и определить количество колоний каждого типа. В зависимости от количества выросших на чашках колоний, такой подсчет можно производить разными способами. Если их число не превышает нескольких десятков, то возможно подсчитать количество колоний каждого типа на всей чашке. Если количество выросших колоний превышает несколько сотен, то целесообразно использовать бинокулярную лупу и подсчитывать число колоний разных типов в 10-20 полях зрения, после чего, зная площадь поля зрения и площадь чашки, определить среднее число колоний каждого типа на чашке.

Представителей каждого типа колоний выделяют в чистую культуру, у которых изучают необходимые признакии в дальнейшем идентифицируют, пользуясьопределителями.