Розчинники

Як вказано вище, розчинники застосовуються при розподільчій хроматографії на папері, як рухома і нерухома фази. Внаслідок гідрофільності паперу нерухомою фазою звичайно є більш полярний компонент системи розчинників. Якщо ж попереднім обробленням паперові надають гідрофобний характер (просочують гасом, тощо), то нерухомою фазою служить менш полярний розчинник (так звані обернені фази).

Для збільшення різниці коефіцієнтів розподілу часто до розчинників додають ту чи іншу речовину. Наприклад, при розділенні алкалоїдів та інших речовин основного характеру часто додають ацетатну, а іноді пропіонову кислоти. При розділенні органічних кислот часто додається аміак. Вплив цих добавок ймовірно зв'язаний з солеутворенням, здатність до якого по різному виражена у речовин з більшою або меншою основністю чи кислотністю.

Крім цього, іноді для збільшення різниці в коефіцієнтах розподілу, папір просочують тим чи іншим буферним розчином. Відомо також ряд випадків, коли добре розділення вдається шляхом додавання до розчинників речовин, близьких за їх властивостями до розділюваних речовин. Наприклад, при розділенні алкалоїдів додають аміак, а при розділенні вищих карбонових кислот додають ацетатну кислоту. В цьому випадку вплив добавок оснований на гасінні йонізації, яка викликає утворення на хроматограмі розмитих плям.

Проявлення

Проявленням називають процес, що дозволяє побачити розміщення плям речовини на хроматограмі. Досягається за допомогою реактивів, які перетворюють досліджувані речовини в кольорові сполуки.

Вибір проявника залежить від хімічних властивостей розділюваних речовин. Для нітрогеновмісних гетероциклів, наприклад, часто застосовується реактив Драгендорфа, для амінокислот – розчин калію перманганату тощо.

У ряді випадків положення речовин на хроматограмі можна виявити при УФ-освітленні, під дією якого одні речовини починають світитися, інші – утворюють темні плями внаслідок поглинання світла.

Способи здійснення розподільчої хроматографії на папері

Для розділення досліджуваних речовин звичайно застосовують один із трьох методів:

1.Спосіб нисхідної хроматографії.

2.Спосіб висхідної хроматографії.

3.Спосіб колової (радіальної) хроматографії.

При нисхідній хроматографії розподіл рухомого розчинника, а разом з ним і розділюваних речовин, відбувається зверху вниз. При висхідній хроматографії – знизу вверх.

При розділенні речовин способом радіальної хроматографії рух розчинника і речовин відбувається від центру паперу радіусами до периферії.

Із перечислених способів найшвидшим є метод радіальної хроматографії. В той же час більш повне розділення речовин, особливо тих, які мають близьке значення R_fдосягається методами висхідної і нисхідної хроматографії.

Хроматографічні камери представляють собою скляний посуд, який закривається пришліфованим склом. В якості камер можуть застосовуватися банки круглої або прямокутної форми, циліндри.

При нисхідній хроматографії в середині камери на спеціальній високій підставці поміщається кювета (лодочка), в яку наливають розчинник, що служить рухомою фазою. Якщо рухомим розчинником служить леткий розчинник, то для насичення камери його парами, цей розчинник наливають на дно камери. Якщо ж застосовують висококиплячий нелеткий розчинник, то ним просочують папір, на якому проводиться розділення досліджуваної суміші речовин, а на дно камери, як і в лодочці, наливають рухому фазу.

При висхідній хроматографії посуд з рухомою фазою поміщають на дно камери. Камера має пристрій для закріплення верхнього кінця паперу.

Розміри камер можуть бути різними, хоч треба мати на увазі, що чим ближче значення R_fрозділюваних речовин, тим більший шлях вони повинні пройти, поки відбудеться їх розділення.

Найбільш практичні розміри камер 40-50 см. Ширина камери обумовлює ширину хроматограми і тим самим лімітує кількість нанесених проб. Тому бажано, щоб ширина камери була не менше 20 см.

Як камери для радіальної хроматографііі можна використовувати ексикатори, чашки Петрі. Папір в цьому випадку вирізають у вигляді кола. В середині кола роблять невеличкий розріз, в який вставляють згорнену у вигляді джгутику смужку і занурюють в склянку з розчинником.