3.1.7 Эффект аллостерических модуляторов гамка рецепторов на устойчивые к пикротоксину токи, опосредованные гамКергическими рецепторами

В предыдущем разделе мы показали, что ток, вызываемый в интернейронах генерализованной аппликацией CACA, чувствителен к пентобарбиталу. Мы решили проверить, каким образом аллостерические модуляторы ГАМК_Арецепторов, такие как барбитураты и бензодиазепины, будут влиять на изолированные пикротоксином ТПСТ и ионтофоретические токи, вызываемые ГАМК и CACA. Если устойчивые к пикротоксину токи опосредованы ГАМК_Срецепторами, то они не будут чувствительны к этим модуляторам.

Все три тока были потенцированы при добавлении 100 М пентобарбитала: ТПСТ до 47876 % (n=4; p=0,015; Рис. 3.1.8а); ионтофоретический ГАМК ток до 22014 % (n=4; p=0,004; Рис. 3.1.8б) и ионтофоретический CACA ток до 28828 % (n=5; p=0,003; Рис. 3.1.8в). Эффект пентобарбитала на ТПСТ также состоял в увеличении константы затухания токов (_{затухания}: 500 ± 67 % от базовых значений; n=4; p=0,009; Рис. 3.1.8а₂), что указывает на увеличение времени открытого состояния каналов ГАМКергических рецепторов (Macdonald and Kelly 1994).

Когда мы провели исследование чувствительности ТПСТ и ионтофоретических токов к бензодиазепинам, выяснилось, что золпидем (0,2 М) производит сравнительно небольшой эффект на амплитуду ТПСТ, устойчивого к пикротоксину, по сравнению с эффектом на амплитуду ТПСТ без пикротоксина (ТПСТ при аппликации золпидема был 10812 % от базовых значений в присутствии пикротоксина и 1588 % без пикротоксина; p=0,002; Рис. 3.1.9). Эти данные указывают на то, что остаточный ТПСТ (в присутствии пикротоксина) относительно нечувствителен к

Рис. 3.1.8 Пентобарбитал (100 µМ) приводит к увеличению ТПСТ и ионтофоретических ГАМК и CACA токов в присутствии пикротоксина (100 µМ)

(см. подписи на следующей странице)

а, Эффект пентобарбитала (аллостерического модулятора ГАМК_Арецепторов, 100 µМ) на ТПСТ записанные в присутствии D-APV (50 μM), NBQX (20 μM), CGP52432 (5M) и пикротоксина (100 µМ).а₁, Оригинальные записи (усреднение по 10 последовательным регистрациям), полученные с одного интернейрона в ответ на синаптическую стимуляцию до (жирная линия) и во время (тонкая линия) аппликации пентобарбитала.а₂, Пентобарбитал увеличивает константу затухания ТПСТ (данные получены по тем же токам что и наа₁). Нормированные по амплитуде ТПСТ фазы затухания тока показаны до (контр) и во время (пент) добавления пентобарбитала в полулогарифмических координатах. Зависимости тока в фазе затухания от времени были моноэкспоненциально аппроксимированы: τ_затух(пент)=500 ± 67 % от τ_затух(контр); n=4; p=0,009 а3, Амплитуда ТПСТ (среднее ± С.О.С) была нормирована к средней амплитуде ТПСТ перед добавлением пентобарбитала. Пентобарбитал значительно увеличивал амплитуду ТПСТ (478 ± 76 % от базовых значений ТПСТ в присутствии пикротоксина; n=4; p=0,015), так же как и амплитуду токов на ионтофорез 200 мМ ГАМК (220 ± 14 % от базовых значений ГАМК тока в присутствии пикротоксина; n=4; p=0,004;б) и 200 мМ CACA (288 ± 28 % от базовых значений CACA тока в присутствии пикротоксина; n=5; p=0,003;в). Ионтофоретические токи были получены в присутствии тех же агонистов и нормированы таким же образом, что и ТПСТ. Оригинальные записи (каждая усреднена по 10 последовательным регистрациям), представленные над графиками, получены до, во время и после добавления пентобарбитала (пент, 100 µМ) с одного интернейрона при ионтофорезе ГАМК и с одного при ионтофорезе CACA. Разбросы указывают С.О.С.

бензодиазепинам, что является характерной чертой ГАМК_Срецепторов. С другой стороны, известно, что ГАМК_Арецепторы, в которых отсутствует α₁субъединица, также менее чувствительны к бензодиазепинам (Thomson et al. 2000). Таким образом, низкая чувствительность к золпидему может быть объяснена отсутствием данной субъединицы в ГАМКергических рецепторах, слабо чувствительных к пикротоксину. Еще одним объяснением может быть зависимость эффекта золпидема от занятости рецепторов агонистом. Чем выше занятость ГАМКергического рецептора синаптически высвобождаемой ГАМК, тем эффект золпидема меньше (Hajos et al. 2000; Perrais and Ropert 1999). Можно предположить, что ток, изолированный аппликацией пикротоксина, опосредован рецепторами с более высокой средней занятостью агонистом, чем средняя занятость чувствительных к пикротоксину ГАМКергических рецепторов, опосредующих ТПСТ. Это различие в занятости рецепторов агонистом может быть объяснено их локализацией на разном расстоянии

Рис. 3.1.9 ТПСТ в интернейронах, изолированные аппликацией 100 μМ пикротоксина, менее чувствительны к золпидему

Мы исследовали эффект золпидема (аллостерического модулятора ГАМК_Арецепторов, 200 нМ) на ТПСТ в отсутствие пикротоксина (D-APV (50 μM), NBQX (20 μM) и CGP52432 (5M) были добавлены) и в присутствии 100 µМ этого антагониста.а, Оригинальные записи (каждая среднее 10 последовательных регистраций), полученные с одного интернейрона в ответ на синаптическую стимуляцию до (жирная линия) и во время (тонкая линия) аппликации золпидема без пикротоксина. Золпидем вызывал значительное увеличение, как амплитуды, так и константы затухания (τ_затух) этих ТПСТ. Нормированные фазы затухания в полулогарифмических координатах до (контр) и во время (злпм) аппликации золпидема показаны справа от оригинальных записей, из которых они получены. Зависимости тока в фазе затухания от времени были моноэкспоненциально аппроксимированы.б, Оригинальные записи (каждая среднее 10 последовательных регистраций) в ответ на синаптическую стимуляцию до (жирная линия) и во время (тонкая линия) аппликации золпидема в присутствии тех же антагонистов как ва и, дополнительно, пикротоксина (100 µМ). ТПСТ, изолированный аппликацией 100 μМ пикротоксина, подвергался эффекту золпидема в меньшей степени, чем базовый. Было показано меньшее увеличение константы затухания тока и отсутствие значительных изменений в амплитуде ТПСТ.в, Данные полученные в нескольких клетках обобщены в виде гистограмм изменения констант затухания и амплитуд базового (базов) и изолированного добавлением пикротоксина (пикр) ТПСТ при аппликации золпидема нормированных к средним значениям токов перед этой аппликацией.

от места высвобождения медиатора или локализацией в разных синапсах, где исходно наблюдается большая или меньшая занятость рецепторов. Таким образом, данные по эффекту золпидема не могут служить доказательством участия ρ-субъединиц в регистрируемых токах, хотя они четко указывают на гетерогенность популяции ионотропных ГАМКергических рецепторов в интернейронах.