3.1.4 Пентобарбитал по-разному модулирует гамКергические токи, вызываемые аппликацией caca (50 м)

ГАМК_Срецепторы не чувствительны к аллостерическим модуляторам ГАМК_Арецепторов, включая барбитураты (Barnard et al. 1998; Bormann 2000b; Johnston 1996; Zhang et al. 2001). Если ток, возникающий при аппликации САСА (50 µМ), опосредован ГАМК_Срецепторами, то он не должен быть чувствителен к

Рис. 3.1.5 Пентобарбитал потенцирует ток, вызываемый аппликацией CACA в интернейронах, но не в пирамидных клетках

Аппликация CACA проводилась при базовых условиях (контр., ), при добавлении 10 μМ (пент 10, ) и 100 μМ пентобарбитала (пент 100, ). Добавление пентобарбитала в суперфузионный раствор приводило к концентрационно-зависимому сдвигу тока компенсации как в интернейронах (а, данные с одной клетки), так и в пирамидных клетках (б, данные с одной клетки). Причем, ток в ответ на аппликацию CACA (агониста ГАМК_Срецепторов) усиливался в интернейронах и оставался неизменным в пирамидных клетках при добавлении пентобарбитала (аллостерического модулятора ГАМК_Арецепторов).в, Гистограмма, показывающая усредненный эффект пентобарбитала на ток вызываемый CACA: в интернейронах в присутствии 10 μМ пентобарбитала ток достигал 12015 %; n=4; p=0,12 от тока при базовых условиях, а присутствии 100 μМ пентобарбитала 29638 %; n=4; p=0,008, тогда как в пирамидных нейронах эти значения были 964 %; n=4; p=0,39 и 12241 %; n=4; p=0,62. Эти результаты указывают на наличие в пирамидных нейронах ГАМК рецепторов, фармакологически сходных с ГАМК_С, тогда как в интернейронах фармакологический профиль рецепторов, активируемых CACA, не может быть отнесен ни к одному из известных типов рецепторов. *: p<0,05

пентобарбиталу. Когда мы провели аппликацию CACA в присутствии пентобарбитала (10 и 100 М), мы не обнаружили в пирамидных клетках изменений в величине САСА-тока, по сравнению с током в отсутствие пентобарбитала (964 % - ток в присутствии 10М пентобарбитала от тока в его отсутствие; n=4; p=0,39 и 12241 % в присутствии 100М пентобарбитала; n=4; p=0,62; Рис. 3.1.5б,в). Учитывая, что пентобарбитал значительно потенцирует ГАМКергические ТПСТ в пирамидных клетках, можно сделать заключение о наличии в них отдельных популяций ГАМК_А и ГАМК_С-подобных рецепторов.

Неожиданно, токи, вызываемые аппликацией CACA в интернейронах, значительно усиливались в присутствии пентобарбитала (120 15 %; n=4; p=0,12 и 29638 %; n=4; p=0,008 при добавлении 10 и 100М пентобарбитала, соответственно; Рис. 3.1.5а,в). Таким образом, ГАМКергические рецепторы в интернейронах, которые активируются САСА, также модулируются пентобарбиталом. Таких фармакологических свойств ГАМКергических рецепторов никогда прежде показано не было. Чтобы исключить возможность ошибки, мы решили провести более детальное изучение особенностей данных токов с использованием других специфических агонистов и антагонистов ГАМК_Аи ГАМК_Срецепторов.

3.1.5 Тпст в интернейронах, регистрируемые в присутствии 100 м пикротоксина, обладают повышенной чувствительностью к антагонисту гамкс рецепторов

Помимо использования специфического агониста ГАМК_Срецепторов для разделения ГАМК_Аи ГАМК_С, можно воспользоваться селективными антагонистами данных рецепторов.

В представленной работе мы использовали (1,2,5,6-тетрогидропиридин-4-ил)метилфосфоновую кислоту (TPMPA) в качестве антагониста ГАМК_Срецепторов (Ragozzino et al. 1996). Мы исследовали эффект 200М TPMPA на амплитуду синаптических ТПСТ в интернейронах и пирамидных клетках. Аппликация этого антагониста производила относительно небольшое снижение ТПСТ вызванных как в интернейронах, так и в пирамидных клетках (688 %; n=7 и 602 %; n=5 от базовых значений в интернейронах и пирамидных клетках, соответственно; p=0,28 t-тест между типами клеток Рис.3.1.6). Поскольку пикротоксин (100М) не полностью блокировал ТПСТ в интернейронах (Рис.3.1.1), мы решили проверить имеет ли остаточный ТПСТ отличную чувствительность к ТPMPA. Оказалось, что TPMPA в присутствии пикротоксина подавляет остаточный ТПСТ в значительно большей степени, чем ТПСТ до добавления пикротоксина (206 %; n=4; от базовых значений ТПСТ в присутствии пикротоксина; p=0,03 t-тест между эффектами TPMPA на ТПСТ с пикротоксином и без него; Рис.3.1.6).

Этот результат указывает на то, что популяция рецепторов в интернейронах, которая обладает сниженной чувствительностью к пикротоксину, обладает более высокой чувствительностью к TPMPA. Такой фармакологический профиль данных рецепторов указывает на их сходство с ГАМК_Срецепторами (McGillem et al. 2000; Zhang et al. 1995b).