2.1.2 Рабочая установка для поддержания срезов и манипуляторы
Схема рабочей установки представлена на рисунке 2.1. Для подачи в рабочую камеру суперфузионного раствора, находящегося в процессе постоянного насыщения карбогеном, использовался перистальтический насос MasterflexL/Sмодели 7518-00 фирмыColeParmer(США) с силиконовыми трубкамиMasterflexL/S14. Отток раствора производился в 5-и литровую колбу, в которой поддерживалось отрицательное давление с помощью вакуума централизованной системы института.
Срезы удерживались и стабилизировались в рабочей камере с помощью самодельного устройства, изготовленного из расплющенной подковообразной платиновой проволочки с натянутыми на нее тонкими капроновыми нитями.
Большинство экспериментов было проведено при комнатной температуре, за исключением тех, которые указаны в тексте. В случае проведения экспериментов при повышенной температуре, последняя поддерживалась с помощью стандартного устройства Пелтье, установленного в рабочей камере, и термоконтроллера Temperaturcontroller IIIфирмыLuigs & Neumann(Германия). В этих экспериментах рабочий раствор предварительно гарбогенизировался при той же температуре, которая поддерживалась в рабочей камере. Это предотвращало появление пузырьков газа при нагреве холодного раствора.
Рабочая камера с прозрачным дном для прохождения света от источника микроскопа была смонтирована на подвижном столике Luigs & Neumann.
Для установки стимулирующих и регистрирующих электродов использовались манипуляторы Mini 25/Combi 25, оснащенные пультом программирования и дистанционного управления, фирмыLuigs & Neumann. Перемещения оптической оси микроскопа и фокусировка на объекте также осуществлялись с помощью системы моторизации и дистанционного управленияLuigs & Neumann.
Рис. 2.1 Рабочая установка для проведения исследований на срезах гиппокампа и схема взаимодействия ее частей
а, Фотография установки, на которой проводились записи электрической активности в срезах гиппокампа. Она состоит из 3-х основных частей. Первая часть это системы, непосредственно контактирующие со срезом (микроскоп, манипуляторы, головки усилителей, изолированные стимуляторы, термоэлементы и термодатчики) – они электрически и механически изолированы. Вторая - оборудование для обработки информации (усилители, термоконтроллер, монитор, компьютер и дистанционное управление манипуляторами). Эти компоненты расположены вне изолирующей камеры и смонтированы в специальной арматуре. Третья – система жизнеобеспечения среза (камера, система подачи раствора с перистальтическим насосом и система оттока раствора под действием вакуума).б, Схема взаимодействия частей установки. Стрелками показано направления передачи сигнала (раствора). Нумерация одинакова дляаиб.
Для предотвращения нежелательных вибраций и электрических помех микроскоп с рабочей камерой и манипуляторы были помещены в экранированный каркас, расположенный на столе с воздушной подушкой (Spindler & Hoyer, США). Давление в воздушной подушке поддерживалось с помощью баллонаN2.
Электрическая стимуляция производилась через моно- и биполярные электроды из нержавеющей стали фирмы FHC(США) или стеклянные микроэлектроды, в зависимости от задачи, с помощью двух изолированных стимуляторов фирмыDigitimerLTD(Великобритания) моделиDS2, установленных внутри экранированного каркаса.