3.1.6 Токи, опосредованные гамКергическими рецепторами, в присутствии 100 м пикротоксина возникают за счет характерной Cl-/hco3- ионой проводимости

Исходя из полученных данных, можно заключить, что пикротоксин (100 М) изолирует в интернейронах популяцию ионотропных ГАМКергических рецепторов с

Рис. 3.1.6 ТПСТ в интернейронах, изолированные аппликацией 100 μМ пикротоксина, более чувствительны к TPMPA

Мы исследовали чувствительность ТПСТ в интернейронах (а₁) и пирамидных клетках (а₂) к TPMPA (антагонисту ГАМК_Срецепторов). Было показано, что TPMPA 200 μМ подавляет ТПСТ в отсутствии пикротоксина в обоих типах клеток лишь в небольшой степени, тогда как ТПСТ, оставшийся в интернейронах после добавления 100 μМ пикротоксина, подавляется значительно (а₃). Оригинальные записи ТПСТ (усреднены по 10 последовательным ответам) полученные с одного интернейрона и одной пирамидной клетки.б, Гистограмма, демонстрирующая усредненные данные полученные с нескольких клеток. TPMPA (200 μМ) подавлял ТПСТ в пирамидных нейронах (ПК) до 602 % (n=5) от базовых значений, в интернейронах в отсутствие пикротоксина (ИН) до 688 % (n=7) и в присутствии 100 μМ пикротоксина (ИН пикр) до 206 % (n=4).

*: p=0,03

нетипичными фармакологическими свойствами. По этой причине дальнейшую часть исследования мы провели в присутствии 100 М пикротоксина. Для того чтобы проверить соответствует ли ионный состав ТПСТ в присутствии пикротоксина току, опосредуемому ионотропными ГАМКергическими рецепторами мы построили зависимости регистрируемого тока от потенциала фиксации (I-V зависимости). Использование I-V зависимостей позволило нам определить потенциал реверсии ТПСТ (Рис. 3.1.7а). Традиционно ГАМКергический ТПСТ рассматривается как ток, состоящий из анионов Cl^-и HCO₃^-. Мы рассчитали E_Cl^-_/HCO3^-по уравнению Нернста, исходя из содержания этих ионов во внеклеточном и внутриклеточном растворах. При использовании внутриклеточного раствора с высоким содержанием ионов хлора (см. Материалы и методы: внутриклеточный раствор на основе CsCl) ТПСТ меняли направление при –0,25 мВ (n=6), что соответствует E_Cl^-_/HCO3^-(-1,15 мВ) (Рис. 3.1.7а₁). При использовании внутриклеточного раствора с низким содержанием ионов хлора (см. Материалы и методы: внутриклеточный раствор на основе Cs глюконата) потенциал реверсии ТПСТ смещался в соответствии с изменением концентрации данных ионов в область более негативных значений (Рис. 3.1.7а₂). Ионтофорез ГАМК (100 мМ) и CACA (100 мМ) также вызывал токи с потенциалом реверсии соответствующим рассчетному E_Cl^-_/HCO3^-(Рис. 3.1.7 б,в). Кроме этого, характерI-Vзависимостей ионтофоретических токов напоминалI-Vкривую, полученную для ТПСТ при использовании идентичного внутриклеточного раствора. Этот факт свидетельствует в пользу того, что синаптические и ионтофоретические токи опосредованы одинаковыми ионами и, вероятно, одинаковыми рецепторами. Это наблюдение, позволяет в дальнейшем рассматривать данные, полученные по ТПСТ и по ионтофоретическим токам вместе, для описания свойств одних и тех же рецепторов.

Рис. 3.1.7 ТПСТ и токи в ответ на ионтофорез ГАМК и CACA в присутствии пикротоксина в интернейронах опосредованы Cl^-/HCO₃^-

а, ТПСТ в интернейронах полученные в присутствии D-APV (50 μM), NBQX (20 μM), CGP52432 (5M) и пикротоксина (100 µМ) при различных потенциалах фиксации с использованием внутриклеточного раствора с высоким (а₁, n=6) и низким (а₂, n=4) содержанием ионов хлора. Оригинальные записи, полученные с одного интернейрона для каждого раствора, показаны слева от ток-потенциал (I-V) зависимостей. Данные для I-V зависимостей усреднены по нескольким клеткам, в которых ТПСТ нормировались к ТПСТ при потенциале фиксации 80 мВ. Теоретически полученное по уравнению Нернста значение E_Cl‑HCO3-обозначено на графиках крестиком. Потенциал реверсии, полученный в данных экспериментах, был близок к расчетному потенциалу тока, опосредованного Cl^-/HCO₃^-, и изменялся в соответствии с содержанием ионов хлора во внутриклеточном растворе. Токи в ответ на ионтофоретическую аппликацию 200 мМ ГАМК (б, n=4) и 200 мМ CACA (в, n=4) в тех же экспериментальных условиях при использовании внутриклеточного раствора с высоким содержанием ионов хлора в интернейронах при различных потенциалах фиксации изменялись сходным образом с ТПСТ, а их потенциал реверсии соответствовал Cl^-/HCO₃^-току. Таким образом, данные результаты свидетельствуют в пользу того, что как синаптически высвобождаемая ГАМК, так и ионтофоретические апплицированные агонисты (ГАМК и CACA) активирует одни и те же устойчивые к пикротоксину ГАМКергические рецепторы, обладающие Cl^-/HCO₃^-проводимостью. Разбросы указывают С.О.С.