3.21. Каковы принципы коагуляционных тестов?

Существует три основных принципа для исследований коагуляции:

• Клоттинговые (3.22) - определение клоттингового времени или времени образования сгустка:

• мануальное определение по конечной точке

• автоматическое определение по конечной точке Используются для выполнения скриниговых тестов, определения активно­сти отдельных факторов свертывания и ингибиторов

• Хромогенные (3.23) фотометрическое определение активности по расщеплению хромогенных субстратов:

• двухточечное измерение

• кинетическое измерение

Используются для выполнения скриниговых тестов, определения активно­сти отдельных факторов свертывания и ингибиторов

• Иммунологические

• радиальная иммунодиффузия

• электроиммунодиффузия

• латексная агглютинация

• нефелометрия и турбидиметрия

• иммуноферментный анализ

• радиоиммуноанализ

Используется для определения концентрации

Методы, основанные на других принципах, используются для специфиче­ских исследований (например сухая химия, преципитация, растворение сгустка, агглютинация эритроцитов и т.д.).

3.22. Какие методы детекции по конечной точке

МОГУТ БЫТЬ ИСПОЛЬЗОВАНЫ В КЛОТТИНГОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ?

В клоттинговых исследованиях конечной точкой для определения времени свертывания (клоттингового времени) является трансформация фибриногена в фибрин. Макроскопически видный сгусток состоит из фибриновых нитей.

Образование фибринового сгустка, как индикатора свертывания, представляет собой основу клоттинговых тестов как в прошлом, так и в настоящее время.

Мануальные методы детекции используются в настоящее время редко:

• метод наклона пробирки - пробирка наклоняется повторяющимися движе­ниями пока образец не свернется;

• метод крючка - крючок или петля повторяющимися движениями опускается внутрь пробирки до образования прилипающего к ней сгустка.

Автоматические методы детекции по конечной точке значительно более распространены. Приборы, используемые для детекции, основаны на следую­щих принципах:

• Электромеханическая детекция по конечной точке - клоттинговое время оп­ределяется либо с помощью крючка, либо с помощью металлического ша­рика;

• Оптическая детекция - клоттинговое время регистрируется по значительно­му возрастанию отпической плотности при переходе фибриногена в фиб­рин. Определение может производиться фотометрически или нефелометрически. При использовании методов сухой химии появление сгустка регист­рируется на основе сниженного отражения на эритроцитах.

3.23. Что представляют собой хромогенные исследования?

Методы хромогенных субстратов в настоящее время широко используют­ся как основа определения активности факторов и ингибиторов свертыва­ния, и эти исследования дополняют клоттинговые, используемые в прошлом. Важным преимуществом хромогенных исследований является то, что они по­зволяют определить активность какого-либо отдельного фактора свертыва­ния или фибринолиза, в то время как в большинстве клоттинговых исследова­ний определяется эффективность работы целой фазы каскада. Недостатком метода хромогенных субстратов являются проблемы специфичности и чувст­вительности, а также более высокая стоимость по сравнению с клоттинговыми методами.

Хромогенный субстрат состоит из короткой пептидной цепи, связанной с красителем. В связанном состоянии краситель не имеет окраски. Окрашива­ние развивается при отщеплении молекулы красителя от пептидной цепи под действием активированного фактора свертывания

Хромогенные исследования используют развитие окрашивания как конеч­ную точку. При специфической длине волны определяется поглощение при двухточечном методе, или кинетически, по нарастанию окрашивания во вре­мени. Интенсивность развившейся окраски служит методом оценки активно­сти фактора или ингибитора