3.14. Почему перед выполнением коагуляционных тестов необходима тщательная проверка образцов крови или исследуемых образцов?

Аккуратная проверка образцов крови перед их дальнейшей обработкой позволяет избежать многих ошибок, связанных с забором. Образцы, где выявлены такие крупные нарушения технологии забора, должны быть отброшены.

Крупные нарушения включают в себя:

• Неправильное соотношение кровь/цитрат. Это можно увидеть, если объем крови в пробирке меньше, чем требуемый. При тестировании таких образцов наблюдается ложное удлинение времен свертывания из-за преданалитической ошибки. При использовании забора с помощью бабочкообразной иглы, объем крови может быть также слишком большим.

• Частично свернувшиеся образцы. Для них характерно наличие сгустков разного размера. В зависимости от степени свертывания, время свертывания может быть ложно укорочено, нормально или удлинено. Наибольшую важность имеет понимание того факта, что даже в самом начале процес­сов свертывания, когда нельзя обнаружить видимых сгустков, но уже имеет место активация факторов сверывания, будут получены неверные результаты.

• Гемолиз. Может наблюдаться после длительного хранения неотцентрифугированных образцов в вертикальном положении, а также после центрифугирования. В таких образцах результаты варьируют в зависимости от степе ни гемолиза. В определенных обстоятельствах могут использоваться и гемолизированные образцы. Если гемолиз присутствует и in vivo, что подтвер­ждается взятием нового образца, образец может быть тестирован для оценки существующей гемостазиологической ситуации. Однако, если ге­молиз происходит во время или после забора пробы, например, как результат избыточно сильной аспирации, слишком энергичного перемешивания или за счет контаминации гемолизирующими веществами, такой образец должен быть отброшен. В отношении эктеричных или липемичных плазм должны применяться те-

же ограничения и учитываться те же возможные влияния, как и большинст­ва биохимических тестов.

3.15. Какова стабильность факторов свертывания при различной температуре?

Стабильность отдельных факторов свертывания в образце нитратной кро­ви или плазмы различна. Кроме длительности хранения, важную роль играет температура хранения

Скрининговые тесты (среднее для 20 образцов

			После хранения 8 часов при
		Сразу после центрифугирования	20°С	37°С
	ПВ (%%)	100	94	72
	АПТВ (сек)	35,5	40,6	48,0

При комнатной температуре протромбиновое время более стабильно, чем АПТВ, увеличение температуры ведет к снижению ПВ и пролонгации АПТВ. Эти изменения происходят за счет изменения активности отдельных факторов.

Активность отдельных факторов (среднее для 20 образцов)

После хранения 8 часов при
	Сразу после центрифугирования	20°С	37°С
V (%%)	100	95	56
VII (%%)	100	100	96
VIII (%%)	100	68	52
IX (%%)	100	92	86

VII фактор крайне нечувствителен к времени и температуре хранения, что в прошлом дало ему имя "стабильного" фактора. Наиболее лабильным факто­ром является VIII, а не V фактор, имевший в прошлом название "лабильного" Быстрая инактивация V фактора происходит только при высоких температу­рах Остальные факторы показывают медленное снижение активности, по­добно IX фактору.

Для стабилизации результатов должны применяться следующие правила Температурные режимы:

• если образец предполагается исследовать в ближайшее время , его можно оставить при комнатной температуре в отцентрифугированном виде. Если плазма перенесена во вторичную пробирку, то она должна быть закрыта. чтобы не допустить изменения рН за счет испарения:

• необходимо избегать повышенных температур, включая прямой солнечный свет

• хранение в холодильнике (+4 С) небезразлично, т к. может вести к холодо-вой активации VII, XI, XII факторов и укорочению времен свертывания.

• если образец предполагается исследовать когда то, бестромбоцитная плазма распределяется по аликвотам и замораживается в закрытых пробирках Для краткосрочного хранения достаточно замораживания при 20 С, для долгосрочного требуется, по крайней мере, 70°С. Для очень длительного хранения требуется замораживание в жидком азоте (-196 С) Заморожен­ные образцы должны оттаивать в водяной бане при +37 С. Необходимо об­ратить особое внимание на окончательное растворение криопреципитатов Анализ должен проходится немедленно после оттаивания, так как эта (про­цедура снижает активность многих факторов Не допускается повторное замораживание / оттаивание.

Длительность хранения:

• Если образец предполагается исследовать сразу, скрининговые тесты должны быть выполнены в течение 4 часов после взятия крови. Это также применимо к исследованиям отдельных факторов, в особенности VIII, который должен быть определен в течение 2 часов после взятия крови.

• Различные реакции и исследования факторов могут быть выполнены после длительного периода хранения. Это включает в себя Hepato Quick, II, VII, X факторы, кофактор ристоцетина, антитромбин III, протеин С и т.д. Каждая лаборатория должна выработать свой собственный подход к хранению та­ких образцов и выполнению таких исследований

• Если образцы предполагается анализировать когда-то, должна быть заморо­жена бестромбоцитная плазма. В настоящее время нет надежных данных по стабильности различных факторов в замороженном состоянии VIII фактор должен быть определен в течение 2 недель при хранении при -20 С, при -70°С допустимо хранение до 1 года при 196 С стабильность практи­чески неограничена.

Необходимо обратить внимание на следующие моменты:

• при замораживании / оттаивании идентичные результаты наблюдаются только в случае, если плазма не содержит фибрин-мономеров, ПДФ и гепарина

• в плазме, содержащей фибрин мономер, процессы гелеобразования после оттаивания могут вести к отрицательным результатам на фибрин-мономер и к удлинению АПТВ, тромбинового и рептилазного времени.

• В плазмах со значительно удлиненным тромбиновым временем (гепарин, ПДФ) нестабильность после оттаивания может вести к укорочению тромбинового времени и АПТВ.