5. Цитотоксическая активность и синтез цитокинов клетками иммунной и нервной систем.

На данное время патогенез ЕАЕ изучен достаточно хорошо. Главным событием для запуска процессов демиелинизации является активация и приобретение способности експресувати антигены II класса главного комплекса гистосовместимости потенциальными антигенпрезентуючими клетками ЦНС - резидентной микроглией и, в меньшей степени, астроцитами. Другим важным механизмом патогенеза ЕАЕ является інтратекальна продукция TNF? активированными микроглиальными клетками, привлеченными в ячейку моноцитами/макрофагами и антигенспецифічними Т-лімфоцитами, что предшествует заострению болезни и предопределяет тяжесть клинических проявлений.

В развитии ЕАЕ можно условно выделить несколько этапов:

I этап - это пролиферация клонов антигенспецифічних Т- и В- лимфоцитов;

II этап - миграция антигенспецифічних цитотоксических Т- лимфоцитов в ткань ЦНС из системного кровообращения, их прямая цитотоксическое действие и продукция цитокинов - TNF?, IL-2 и IFN?;

III этап - клиническое выздоровление животных, которые выжили, после острой фазы ЕАЕ, когда снова происходит перераспределение клеточных популяций, гибель и миграция антигенспецифічних Т-лімфоцитів из ЦНС. В разные периоды после индукции ЕАЕ изменяются как соотношение клеточных популяций в иммунной системе, так и продукция цито- и лимфокина.

Результаты исследований фагоцитарной активности микроглиальной фракции клеток головного мозга, при индукции ЕАЕ путем иммунизации гомогенатом мозга в полном ад’юванті Фрейнда, указывают на повышение активности внутриклеточных ферментов с 5-ї суток после индукции (табл.5.1.).

Таблица 5.1. Фагоцитарная активность микроглиальных клеток головного мозга и мононуклеаров селезенки крыс после индукции ЕАЕ.

Срок после индукции ЕАЕ, сутки	Показатель НСТ-тесту, ум. од.
	Микроглия	Спленоцит
5	47,4 ± 5,2	37,6 ± 4,1
12	85,2 ± 7,3	54,1 ± 4,9
19	29,6 ± 3,8	131,3 ± 11,4
Контроль	16,3 ± 4,5	71,2 ± 6,0

Максимальное повышение фагоцитарной активности микроглиальных клеток отмечается на 12-ые сутки. В дальнейшем фагоцитарная активность этих клеток снижается. Несколько другая картина наблюдается относительно активности спленоцита. В ранние сроки (на 5-ые сутки) наблюдается снижение фагоцитарной активности этих клеток, но в дальнейшем она повышается. Активация фагоцитарных фракций микроглиальных клеток свидетельствует о развитии клеточного ответа на введенный антиген. Снижение фагоцитарной активности в общей системе иммунитета, в частности в селезенке, вызванное миграцией из селезенки активных фагоцитирующих клеток в зону иммунизации в ранние сроки.

После иммунизации также растет активность синтеза фактора некроза опухолей мікрогліальноми клетками (табл. 5.2.).

Таблица 5.2. Спонтанная и индуктируемая ЛПС продукция TNF? микроглиальными клетками головного мозга и мононуклеарами селезенки крыс после индукции ЕАЕ.

Срок после индукции ЕАЕ, сутки	Продукция TNF?, од. акт.
	Микроглия	Спленоцит
5	5,9 ± 0,6	12,6 ± 2,7
12	37,0 ± 1,3	27,8 ± 1,4
19	21,0 ± 1,9	16,2 ± 1,3
Контроль	1,4 ± 0,6	28,7 ± 4,0

Наибольшая способность микроглиальных клеток продуцировать TNF отмечается на 12-ые сутки после индукции энцефаломиелита, который отвечает периоду основных клинических проявлений. В более поздние сроки, когда клинические проявления ЕАЕ погасают и наступает выздоровление животных, продукция TNF? микроглиальными клетками мозга снижается. Дополнительная активация этих клеток липополисахаридом вызывает повышение интенсивности синтеза TNF? на всех этапах развития ЕАЕ.

В то же время спленоцит обнаруживает несколько другую динамику продукции TNF?. Да, на 5-ые и 12-ые сутки спонтанная продукция TNF? клетками селезенки снижается, а на 19-ые сутки показатель возвращается в пределы нормы. При дополнительной активации спленоцита липополисахаридом прирост продукции TNF? отмечается только на ранних этапах развития патологии. Разная способность спленоцита и микроглиальных клеток мозга продуцировать TNF? обусловленная особенностями імунопатологічного процесса в ЦНС.

Микроглиальные клетки, которые у интактных животных практически не производили TNF? после индукции ЕАЕ, во много раз усиливали синтез TNF?. Уменьшение продукции TNF? в селезенке, по-видимому обусловленно повышенной элиминацией из селезенки клеток, которые синтезируют TNF?, какие могут мигрировать в ранние сроки в область введения енцефалітогенної смеси, а в более поздние сроки в ЦНС. Возобновление способности спленоцита синтезировать TNF? на 12-ые сутки связано, по-видимому, с возобновлением в селезенке этой популяции клеток, хотя они и не владели способностью активироваться ЛПС.

Таким образом, проведенные исследования показали, что микроглиальные клетки мозга в норме проявляют низкую способность к фагоцитозу и синтезу TNF?, а при развитии ЕАЕ их функция значительно активируется, и коррелирует с клиническими проявлениями ЕАЕ. В то же время установлено, что динамика изменений фагоцитарной и TNF-продукуючої активности микроглиальных клеток и спленоцитов разная и не коррелирует между собой, что указывает на поэтапное проявление их активности при аутоімунному процессе.

Макроглиальная фракция клеток мозга интактных животных (в частности, астроцитіві) владеет способностью продуцировать цитотоксический фактор, который вызывает лизис клеток линии L-929 (табл. 5.3.). Фракция клеток, обогащенная нейронами, также продуцирует TNF?. На 5-ые сутки после индукции ЕАЕ способность к продукции TNF? у этих клеточных фракций значительно снижается, практически к нулю. В дальнейшем, глиальная фракция, в отличие от нейронов, возобновляет способность к продукции цитотоксического фактора. Дополнительная стимуляция ЛПС глиальной и нейрональної фракции не усиливает продукцию TNF?.

Таблица 5.3. Продукция TNF? клетками головного мозга крыс в разные сроки после индукции ЕАЕ.

Срок после индукции ЕАЕ, сутки	Продукция TNF?, од. акт.
	Глиальные клетки	Нейроны
5	0,7 ± 0,01	0,8 ± 0,01
12	22,1 ± 0,4	7,4 ± 0,5
19	23,1 ± 0,8	9,8 ± 0,4
Контроль	20,5 ± 0,9	16,0 ± 1,0

Высокий уровень продукции TNF? клетками головного мозга связанный как с активацией разных клеточных популяций (макрофаги, микроглия, астроглія), так и с накоплением в мозге активированных Т-клітин. Нельзя не учитывать участие антигенспецифічних Т-лімфоцитів в продукции TNF-? при ЕАЕ, тем более, что в литературе описанная экспрессия TNF-? енцефалітогенними Т-клітинними клонами.

Снижение продукции TNF-? на поздних этапах развития ЕАЕ объясняется уменьшением количества антигенспецифічних Т-лімфоцитів в мозге за счет апоптоза и рециркуляции, а продукция TNF-? в ЦНС, опосредствует в основном активированной резидентной микроглией и макрофагами. В селезенке также происходит снижение продукции TNF-?. Учитывая однонаправленное снижение активности или количества клеток, которые продуцируют TNF-? в селезенке и мозге нельзя исключить механизмы, которые тормозят или блокируют активность этих клеток: переключение аутоімунного процесса из активации Т-хелперів-1 на Т-хелпери-2, индукция супресоров-інгібіторів и антиідіотипових антител, накопления в селезенке и мозге факторов, которые инициируют апоптоз, старение и гибель клеток.

Индукция у крыс ЕАЕ моделирует ситуацию, когда микроглиальные клетки выходят из-под влияния других клеток, следствием чего есть процессы активации и пролиферации микроглии, активной продукции TNF-? но других цитокинов. При этом другие нервные клетки (астроглія и нейроны) теряют способность продуцировать цитокины, подобные TNF?.